一、缺氧缺血后新生鼠脑c-fos表达与脑海马迟发性神经元死亡（论文文献综述）
孙灵芝,孟苗苗,刘芹,曹晓岚[1]（2018）在《侧脑室注射EGb 761对MCAO大鼠神经细胞凋亡的影响》文中研究指明缺血性脑卒中缺乏有效的治疗措施,目前应用于临床的许多药物受到血脑屏障的限制,难以充分发挥疗效。EGb761是银杏制剂的提取物,在改善心脑血管疾病方面积累了大量证据。为提高其局部血药浓度,我们采用侧脑室微量泵泵入EGb 761,并观察其对大脑中动脉缺血-再灌注（MCAO）大鼠脑区细胞凋亡的影响,探讨其作用机制及侧脑室注射途径的可行性。
孙邈[2]（2016）在《复智胶囊及大黄素对VD大鼠海马和SH-SY5Y线粒体凋亡通路与Iκ电流关系的影响》文中研究说明近年来我们团队对复智胶囊经验方防治血管性痴呆（Vascular Dementia）进行了大量的研究工作,已知其可通过保护胆碱能系统,上调海马胆碱能系统低水平;削减缺血炎症反应对神经系统的损害;恢复脑血管循环流注,减少血小板聚集,消除氧化自由基等来预防治疗血管性痴呆。近年来研究发现钾离子通道与细胞凋亡有密切关系,尤其以延迟整流钾电流IK在凋亡中扮演重要角色,本研究将关注复智胶囊及其有效成分大黄素对线粒体凋亡通路与IK电流关系的影响。目的本研究聚焦延迟整流钾通道电流与经典的内源性线粒体凋亡通路之间的关系对细胞凋亡的影响,结合分子生物技术和基因技术,运用Western-blot、Real-time PCR和ELISA的方法检测复智胶囊对血管性痴呆大鼠海马Bcl-2、Bax及Caspase-3的影响,研究复智胶囊对血管性痴呆大鼠海马细胞凋亡的保护作用,探索复智胶囊修复神经细胞功能的可能机制;并且以神经细胞膜的离子通道特征为出发点,通过运用全细胞膜片钳技术观察复智胶囊有效成分大黄素对人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）延迟整流钾通道（IK）的作用,并探讨IK与线粒体凋亡通路的关系,望从神经元保护方面来阐明复智胶囊的拮抗凋亡机理以验证其改善血管性痴呆大鼠学习和记忆的作用;通过观察复智胶囊及大黄素对VD大鼠海马组织和SH-SY5Y细胞线粒体凋亡通路与IK电流关系的影响为复智胶囊治疗血管性痴呆提供理论及实验的可靠依据;且为进一步探讨中枢钾离子通道与血管性痴呆的关系开拓道路。方法在体实验:根据随机数字表法,将100只SD大鼠,选出正常组和假手术组各20只,剩余则使用双侧颈动脉永久结扎2-VO法,将造模成功的大鼠分为血管性痴呆VD模型组、安理申治疗组和复智胶囊治疗组,每组动物20只。各组动物连续灌药四周后进行相应的指标检测。本实验使用Morris水迷宫的方法对各组大鼠进行行为学检测,观测其学习记忆能力;采用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定各组大鼠血清中的Cleaved Caspase-3表达;采用Real-time PCR的方法检测各组大鼠脑海马组织中Bcl-2和Bax的mRNA基因变化水平;采用Western blot的方法测定各组大鼠脑海马组织中Bcl-2,Bax,Caspase-3和Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平。离体试验:细胞常规培养人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y,通过建立细胞生长曲线确定本实验所需细胞密度,通过MTT比色法检测复智胶囊有效成分大黄素细胞毒性实验确定本实验大黄素加药浓度,将SH-SY5Y细胞随机分为空白对照组、糖氧剥夺OGD组、糖氧剥夺OGD+大黄素（Xμmol/L）治疗组,使用全细胞膜片钳技术描记对照组、模型组和大黄素组IK的变化,绘制I-V曲线。结果我们的结果显示:（1）与正常对照组相比,VD模型组大鼠脑海马组织中凋亡抑制基因Bcl-2表达降低,而促凋亡基因Bax表达升高,Bcl-2/Bax的比值变小;通过复智胶囊或安理申的干预则可降低VD大鼠脑海马组织中的促凋亡基因Bax,并且升高凋亡抑制基因Bcl-2,通过改变Bcl-2/Bax的比值来起到对抗细胞凋亡的作用。（2）与正常对照组相比,VD模型组大鼠脑海马组织中的Caspase-3和Cleaved Caspase-3明显过表达,而通过复智胶囊或安理申的干预,可降低VD大鼠脑海马组织中的Caspase-3和Cleaved Caspase-3,以改善VD所造成的脑组织损害。（3）SH-SY5Y经过糖氧剥夺后呈现缺糖缺氧状态,细胞存活率显着下降,此现象可在加入复智胶囊有效成分大黄素后被逆转,提示复智胶囊有效成分大黄素对SH-SY5Y细胞缺糖缺氧损伤后生长和活力状态具有保护作用。（4）糖氧剥夺OGD组与空白对照相比,IK电流密度明显减弱。复智胶囊有效成分大黄素则可逆转此抑制作用,在指令电压为+50 mV时IK峰密度值分别从（4.474±0.4182）pA/pF增大至（5.947±0.7415）pA/pF（P<0.05,n=15）（5）复智胶囊有效成分大黄素可使被OGD抑制的IK电流-电压曲线（I-V）慢慢上升,并且伴随着的去极化幅度的逐步升高而越来越大。结论1、在体实验显示复智胶囊可以抑制促凋亡基因Bax的表达,下调凋亡执行者Caspase-3的表达,并且上调凋亡抑制基因Bcl-2的表达,说明基于经典的线粒体凋亡通路,复智胶囊可启动抗凋亡机制,以达到对血管性痴呆的神经元保护作用。2、膜片钳的数据结果说明复智胶囊主要成分对SH-SY5Y延迟整流钾通道IK的峰值及电压电流（I-V）曲线有较为显着的激活作用,说明复智胶囊主要成分可以通过激活IK电流,减少细胞内钙离子堆积来抑制线粒体凋亡通路的启动。以上结果提示我们复智胶囊可能通过对IK电流的激活和抗凋亡机制来治疗血管性痴呆。
许超[3]（2016）在《大鼠放射性脑损伤模型中Ca、Cu、Zn、Fe、Mg含量和c-Fos、NF-κB表达的变化及MgSO4的保护作用》文中提出一、大鼠放射性脑损伤模型中Ca、Fe、Cu、Zn、Mg含量的变化及MgSO4的保护作用目的建立放射性脑损伤（radiation-induced brain injury,RBI）动物模型,对SD大鼠进行全脑照射,观察脑组织含水量、微血管损伤及海马组织中Ca、Mg、Cu、Fe、Zn含量的动态变化,探讨这些元素在放射性脑损伤发病机制中的作用。方法用随机数字表法将大鼠分为空白组、防护组（400 mg/kg体重腹腔注射10%MgSO4溶液+单次全脑20 Gy电子束照射）和照射组（400 mg/kg体重腹腔注射生理盐水+单次全脑20 Gy电子束）,每组18只,每个时间点3只,对防护组和照射组SD大鼠用5 Me V电子束进行20 Gy全脑单次照射,即放射性脑损伤模型（RBI）,用干-湿重法测定脑组织含水量（BWC）,HE染色脑组织切片查看微血管损伤程度,应用电感耦合等离子体发射光谱仪,定量分析大鼠脑放射性损伤后不同时间海马组织中Ca、Mg、Cu、Fe、Zn元素含量的动态变化。结果（1）照射组在照后7、14、30 d与空白组相比脑含水量升高（t=-3.21、-2.11、2.82,P<0.05）;且防护组在照后7、14、30 d低于照射组（t=2.84、4.33、1.90,P<0.05）;（2）RBI模型中出现微血管栓塞,防护组较照射组减轻;（3）照射组Ca含量在照后各时间点及Fe含量在照后1、3、7 d与空白组相比含量升高（t=11.41、6.81、14.03、17.17、6.89、9.12和5.43、5.66、3.60,P<0.05）,且照射组Ca含量在照后各时间点较防护组增加（t=5.35、5.28、11.02、14.26、5.68、9.10,P<0.05）;（4）照射组Cu含量在照后1、7、14、60d及Zn含量在照后1、7、14、30、60d与空白组比较降低（t=4.24、3.76、4.76、3.86和5.25、4.78、26.53、6.67、11.37,P<0.05）,其中防护组Cu含量在照后各时间点低于照射组（t=4.23、3.57、4.01、4.73、3.78、3.44,P<0.05）,Zn含量在照后14 d高于照射组（t=6.21,P<0.05）;（5）照射组Mg含量在照后7 d降低（t=5.85,P<0.05）。结论RBI模型中Ca、Fe、Cu、Zn含量失衡,补充MgSO4可以纠正Ca、Fe、Cu、Zn含量的失衡,并可以减轻放射性脑损伤。二、大鼠放射性脑损伤模型中c-Fos和NF-κB表达变化及MgSO4的保护作用目的建立放射性脑损伤（radiation-induced brain injury,RBI）动物模型,对SD大鼠进行全脑照射,观察海马组织中c-Fos和NF-κB含量的动态变化,探讨这些基因在放射性脑损伤发病机制中的作用。方法用随机数字表法将大鼠分为空白组、防护组（400 mg/kg体重腹腔注射10%MgSO4溶液+单次全脑20 Gy电子束照射）和照射组（400 mg/kg体重腹腔注射生理盐水+单次全脑20 Gy电子束）,每组18只,每个时间点3只,对防护组和照射组SD大鼠用5 Me V电子束进行20 Gy全脑单次照射,即放射性脑损伤模型（RBI）,通过实时荧光定量逆转录多聚酶链反应（QRT-PCR）分别检测核转录因子（nuclear factorκB,NF-κB）、即刻早期基因（c-Fos）m RNA表达变化,Western blot分别检测海马组织NF-κB和c-Fos总蛋白含量的改变,通过统计学相关性分析评价二者基因在放射性脑损伤中的作用机制。结果（1）照射组与防护组在照后c-Fos表达增加,且照射组在照后第1、3、7、14、30、60天增加具有统计学意义,防护组在照后第3、7、14、30天增加具有统计学意义;（2）照射组与防护组在照后NF-κB表达增加,且照射组在照后第1、3、7、14天增加具有统计学意义,防护组在照后第3、7、14天增加具有统计学意义。结论RBI模型中海马组织NF-κB和c-Fos表达增加,补充MgSO4可以降低海马组织NF-κB和c-Fos的表达,说明NF-κB和c-Fos可以作为评价脑损伤的指标。
钟鸣[4]（2012）在《JNK/MAPK信号通路介导川芎嗪对海马神经元损伤的保护机制研究》文中认为脑血管疾病是临床常见病、多发病,并且脑血管病患者的存活病人中有50-70%遗留不同程度的残疾,这些后遗症严重影响了患者的生命健康与生存质量。此外,随着医学科学技术的迅猛发展,围术期患者发生缺血／再灌注性脑损伤的风险也随之增大,因此围术期脑缺血再灌注损伤也是临床麻醉与复苏近年来所关注的热点。脑缺血再灌注损伤后中枢神经系统功能的恢复较差,脑缺血／再灌注损伤均会造成不同程度神经功能障碍。近年来国内外研究证实,脑缺血再灌注损伤不仅仅是由于脑氧供中断细胞能量供应不足导致的脑细胞凋亡,而是一个多环节、多因素、多途径的酶促级联反应。但其分子机制至今尚未完全明确。中药川芎嗪（TMP）常用于缺血性脑血管疾病及其后遗症的治疗,但其作用机制尚不明确,特别是从JNK信号转导通路探讨TMP预处理对缺氧／复氧大鼠海马神经元保护机制国内尚无文献报道。本研究拟在体外原代培养大鼠海马神经元细胞的基础上,以海马神经元细胞为研究对象建立细胞缺氧／复氧模型,模拟神经细胞的能量代谢障碍。观察不同浓度TMP预处理与JNK通路阻断剂SP600125对缺氧／复氧后海马神经元细胞凋亡细胞比例的影响,检测JNK信号转导通路相关蛋白的表达。试图通过本研究,从分子水平上阐明TMP预处理对缺氧／复氧大鼠海马神经元JNK转导通路的干预机制,为脑缺血损伤的治疗提供新的理论依据。目的通过TMP预处理对缺氧／复氧大鼠海马神经元影响的研究：1.阐明JNK信号转导通路在缺血再灌注诱导体外培养的神经细胞凋亡中作用机制。2.阐明TMP对缺氧／复氧大鼠海马神经元JNK信号转导通路的干预机制。方法1.体外原代培养胎鼠海马神经元细胞,培养7天后造模。2.实验分组及缺氧／复氧模型的建立：以培养7天的胎鼠海马神经元为研究对象,随机分为6组：N组（正常组即未缺氧组）,C组（空白对照组Oug/ml）,S组（JNK抑制剂SP600125组10μmol/L）, L组（TMP低浓度60ug/ml）,M组（TMP中浓度组200ug/ml）,H组（TMP高浓度组800ug/ml）,实验组分别加入相应浓度的药物,药物作用1小时后持续通入90%N2+10%CO2（流速0.2L/min）,诱导缺氧2小时,然后放入5％CO2培养箱中复氧。3.培养7天的胎鼠海马神经元缺氧／复氧损伤后,采用Annexin V-FITC测定不同处理组海马神经元的凋亡率。免疫荧光法检测c-jun、c-fos、P-JNK蛋白的表达,及三者之间的关系。采用实时定量RT-PCR法（探针法）检测缺氧／复氧后MKK4mRNA、 MKK7mRNA的含量及与P-JNK的相关性。结果1.与正常组N组比较,模型组均不同程度增加了海马神经元细胞的凋亡率（P<0.05）。与单纯缺氧／复氧组比较,S组（SP600125抑制剂组）、川芎嗪60μg/ml、200μg/ml、800μg/ml预给药均可不同程度降低海马神经细胞的凋亡率（P<0.01）。M组（200μg/ml）组较60μg/ml、800μg/ml组差异亦有显着性（P<0.01）,与S组无显着性差异。2.与单纯缺氧／复氧组比较,S组（SP600125抑制剂组）、川芎嗪60μg/ml、200μg/ml、800μg/ml预给药均可不同程度降低C-fos、c-jun、P-JNK蛋白的表达（P<0.01）。川芎嗪200μg/ml组较60μg/ml、800μg/ml组差异较为显着（P<0.01）,抑制剂组与川芎嗪组比较无显着性差异。3.与正常组比较,模型组均不同程度的增加了MKK4mRNA、MKK7mRNA的表达含量。与单纯缺氧／复氧组比较,S组（SP600125抑制剂组）、川芎嗪60μg/ml、200μg/ml、800μg/ml预给药均可不同程度降低MKK4mRNA、MKK7mRNA的含量。川芎嗪200μg/ml组较60μg/ml、800μg/ml组差异亦有显着性（P<0.01）,抑制剂组与川芎嗪组比较无显着性差异。结论SP600125抑制剂、川芎嗪60μg/ml、200μg/ml、800μg/ml预给药均可不同程度降低缺氧／复氧诱导海马神经细胞的凋亡和坏死,同时抑制JNK通路相关蛋白C-fos、 c-jun、P-JNK的表达。降低JNK激酶MKK4mRNA、MKK7mRNA的含量。SP600125抑制剂与高、中、低三种浓度的川芎嗪均有保护作用,200μg/ml浓度的川芎嗪保护作用最显着。川芎嗪的保护作用可能是通过JNK信号转导通路的相关蛋白与激酶协同作用实现的。
孙瑾[5]（2012）在《白藜芦醇甙对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠ERK通路的影响及其改善学习记忆能力的机制研究》文中研究表明目的：缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）是新生儿期危害最大的神经系统疾病之一，常引起新生儿死亡，存活者也存在不同程度的神经系统发育障碍。HIBD发病机制十分复杂，治疗主要采取综合性措施减轻症状，对脑细胞进行保护，尽量减轻脑组织的进一步损害。但是由于围产期脑细胞较成年期容易受损以及治疗窗口期的问题，导致这些治疗措施在新生儿仍需进一步探讨。而且对于成熟脑行之有效的治疗是否在未成熟脑也能够表现出显着的神经保护作用，以及各种治疗方法对于不断发育的脑组织是否具有持续保护作用，仍需更多的研究。值得注意的是，在受到损伤同时，机体还会产生相应的保护性因子对抗损伤反应，如何上调保护性因子水平且降低损伤性因子水平是临床治疗的重要靶点。脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）是突触可塑性和记忆的重要调节因子，在HIBD修复中起着重要的神经保护作用，而MAPK/ERK信号通路的激活可以反馈性抑制神经元的兴奋性毒性，起到神经保护作用，在各种细胞内信号激酶瀑布链中,细胞外信号调节激酶ERK是脑源性神经营养因子发挥保护作用最可能的细胞内机制。脑缺氧缺血后磷酸化ERK的高表达可能是内源性神经保护反应的结果。缺氧缺血脑损伤后，即刻早基因（Immediate-early Genes,IEGS）如c-Jun在短期内迅速表达，导致了一些后期效应基因被抑制或激活，最终神经细胞坏死、凋亡。因此采用药物维持保护性信号通路的激活，上调脑损伤保护性神经营养因子水平，同时下调引起早期神经损伤的因子如c-Jun的水平，是临床治疗缺氧缺血性脑损伤的重要思路。已有的研究和我们的前期研究工作证明，中药单体白藜芦醇甙（Polydatin,PD）对心脑血管具有十分明显的保护作用，它具有调节血管张力，抑制血小板聚集，改善微循环，保护血管内皮、抗氧化等作用，并对脑缺氧缺血后急性期的大脑组织细胞损伤具有一定的保护作用。目前，应用PD治疗急性脑梗塞、帕金森病以及老年性痴呆均已取得很好的临床效果。这些基础研究和临床实践的结合为长期寻找一种有效治疗新生儿HIBD的潜力药物提供了新思路，更为重要的是它体现了整体调节效应的中药治疗疾病宗旨。但是迄今为止，有关PD对未成熟脑HIBD后远期学习记忆能力的影响及其作用机制的研究甚少。基于以上研究和理论基础，我们提出设想，将PD运用到新生大鼠HIBD的治疗，研究缺氧缺血性脑损伤对于新生大鼠远期学习记忆能力的影响，进一步探讨PD对于HIBD新生大鼠远期学习记忆能力的保护作用，从蛋白水平通过ERK通路以及神经保护性因子BDNF表达进一步探讨其对于HIBD新生大鼠学习记忆能力保护作用的可能机制，并从即刻早基因c-Jun表达进一步研究其神经保护机制，旨在进一步明确PD对HIBD的保护作用及机制，为PD在新生儿HIE中的临床应用提供实验基础和理论依据。方法：1.7日龄SD大鼠随机分为三组:假手术对照组（NS组），缺氧缺血组（HI组），PD干预组（PD组）。分离并结扎左侧颈总动脉2小时后吸入含氧8%的氮氧混合气体2小时参照Rice方法制备新生大鼠HIBD模型。NS组仅游离左颈总动脉但不结扎和行缺氧处理，PD组在缺氧缺血后每天腹腔注射0.1％PD10mg/kg10天，NS组和HI组注射等体积无菌生理盐水。缺氧缺血损伤后24小时、10天及21天三个时间HE染色光镜下观察各组大鼠皮层、海马区脑组织病理结构的变化。缺氧缺血损伤后21天采用Y-迷宫和跳台实验评估大鼠学习记忆功能的变化。2.给予PD组新生大鼠0.1％PD10mg/kg干预治疗1天，NS组和HI组注射等体积无菌生理盐水1天，在缺氧缺血后24小时Western Blot方法检测各组大鼠左侧海马p-ERK，p-CREB表达的变化，免疫组化方法检测左侧皮层、海马CA1区、CA3区及DG区c-Jun表达的变化，Western Blot方法检测左侧海马c-Jun表达的变化。3.给予PD组新生大鼠0.1％PD10mg/kg干预治疗10天，NS组和HI组注射等体积无菌生理盐水10天，免疫组化方法检测各组大鼠缺氧缺血后24小时、10天及21天三个时间点左侧皮层、海马CA1区、CA3区BDNF的表达变化。WesternBlot方法检测缺氧缺血后24小时、10天及21天三个时间点大鼠左侧海马BDNF的表达变化。结果：1. Y-迷宫实验结果显示,在第一天的学习测试和第二天的记忆保持测试中，同NS组比较，HI组全天总反应时间显着延长（P <0.01）、错误反应次数增加（P<0.01），主动回避率减少（P<0.01）。同HI组比较，PD组全天总反应时间显着减少（P<0.01）、错误反应次数减少（P<0.01），主动回避率增加（P<0.01）。2.跳台实验结果显示,同NS组比较，在第一天学习测试中，HI组反应时间延长（P<0.01），错误次数增加（P<0.01），在第二天记忆保持测试中，HI组潜伏期缩短（P<0.01），错误次数增多（P<0.01）。同HI组比较，在第一天学习测试中，PD组反应时间短于HI组（P<0.05），错误次数少于HI组（P<0.01）,且错误次数与NS组比较无差异（P>0.05）。在第二天记忆保持测试中，PD组潜伏期长于HI组（P<0.05），错误次数少于HI组（P<0.01）,且错误次数与NS组比较无差异（P>0.05）。3.缺氧缺血损伤后24小时，Western Blot结果显示NS组大鼠海马有p-ERK、p-CREB蛋白的基础表达，HI组大鼠海马p-ERK、p-CREB蛋白表达较NS组明显增高（P<0.01），PD组大鼠海马p-ERK、p-CREB蛋白表达同HI组相比明显增高（P<0.01）。4.免疫组化结果显示，缺氧缺血损伤后24小时,HI组大鼠左侧皮层及海马CA1区、CA3区BDNF表达同NS组相比较明显增高（P<0.01）,10天仍高于NS组（P<0.01），随着损伤时间延长，HI组BDNF的表达逐渐回落,在21天HI组皮层及海马CA1区、CA3区BDNF表达同NS组相比无统计学差异（P>0.05）。PD组呈现出同样的趋势，缺氧缺血损伤后24小时,PD组左侧皮层及海马CA1区、CA3区BDNF表达同NS组相比较明显增高（P<0.01），皮层、海马CA1区与HI组相比较无统计学差异（P>0.05），CA3区BDNF的表达高于HI组（P<0.05），缺氧缺血损伤后10天PD组皮层及海马CA1区、CA3区BDNF的表达高于HI组（P<0.05），21天PD组皮层及海马CA1区、CA3区BDNF的表达高于HI组（P<0.05）。大鼠左侧海马BDNF Western Blot结果同免疫组化结果相近，缺氧缺血后，HI组及PD组海马BDNF表达同NS组相比增高，后随着时间延长逐渐回落，缺氧缺血损伤后21天HI组已降至NS组水平，PD组在24小时（P<0.05）、10天（P<0.01）及21天（P<0.05）BDNF表达高于HI组。5.缺氧缺血损伤后24小时,HI组左侧皮层、海马CA1、CA3及DG区免疫组化结果可见c-Jun阳性表达明显高于NS组（P<0.01），PD组较HI组明显减少（P<0.01）。Western Blot显示HI组左侧海马c-Jun的表达HI组高于NS组（P<0.01），而PD组的表达低于HI组（P<0.01）。6. HE染色结果显示光镜下NS组左侧大脑半球组织皮层、海马CA1区结构层次清晰，神经细胞形态、结构正常。缺氧缺血损伤后24小时、10天HI组左侧脑组织皮层变薄，海马锥体细胞层数减少，神经细胞排列紊乱，出现细胞肿胀、溶解，有明显神经元缺失、局灶性坏死。缺氧缺血损伤后21天皮层、海马等部位形成胶质瘢痕。PD组在各时间点仍有不同程度的神经细胞变性，但多数神经元结构较完整，海马锥体细胞层细胞形态、排列基本正常。结论：1. HIBD可以引起新生大鼠脑组织病理改变和学习记忆能力的下降，应用白藜芦醇甙干预可以减轻脑组织损伤，改善HIBD新生大鼠的学习记忆能力。2.缺氧缺血性脑损伤后，新生大鼠大脑海马p-ERK及p-CREB表达增加，表明MAPK/ERK信号通路被激活，应用白藜芦醇甙干预能进一步增强海马p-ERK及p-CREB表达，提示白藜芦醇甙干预对于学习记忆的改善作用可能同其作用于MAPK/ERK信号通路有关。3.缺氧缺血性脑损伤后，新生大鼠脑组织BDNF表达增加，应用白藜芦醇甙干预能进一步增强HIBD新生大鼠大脑皮层及海马BDNF的表达，并且延长其表达时间，这可能是白藜芦醇甙对于HIBD新生大鼠神经保护作用的机制之一。4.缺氧缺血性脑损伤后，新生大鼠脑组织c-Jun表达增加，应用白藜芦醇甙干预降低HIBD新生大鼠大脑皮层、海马c-Jun的表达，可能对缺氧缺血后的神经元具有早期保护作用。
冯书芳[6]（2010）在《电针预处理对+Gz暴露大鼠学习和记忆的影响及机制的研究》文中进行了进一步梳理实验一:+Gz对大鼠学习和记忆的影响目的:持续性正加速度（+Gz）可使血液向下半身转移,引起脑组织缺血缺氧,飞行员意识丧失（+G induced loss of consciousness,G-LOC）。动物实验表明, +Gz暴露可引起大鼠认知功能损害,但由于G值参数的不统一,评价学习和记忆的实验方法不同,得出的结论也不一致。因此我们很难评价+Gz暴露后认知功能。故在本实验中,我们结合前期的实验确定的G值参数,采用Morris水迷宫探讨+10Gz/5min暴露对大鼠学习和记忆能力的影响。方法:16只雄性SD大鼠随机分为两组+1Gz/5min对照组（Sham）, +10Gz/5min暴露（n=8）。两组动物于暴露后2h,采用Morris水迷宫进行空间搜索实验和定位航行实验,自动视频分析系统记录大鼠逃避潜伏期（Escape Latency）,游泳距离（Pathlength to the platform）,游泳速度（Swimming Speed）,目标象限所占时间百分比（Percentage of target quadrant）,穿越站台的次数（Number of crossing the platform）。结果:Morris水迷宫实验结果显示:①.定位航行实验中, +Gz组逃避潜伏期及游泳路程于第二﹑第三天较Sham组明显延长。逃避潜伏期及游泳路径[F （1, 14） = 4.98, P<0.01],[F （1, 14） = 5.93, P<0.01],游泳速度两组之间无明显统计差异[F （1, 14） = 1.95, P>0.05 ];②.空间探索实验中,+Gz组大鼠目标象限的百分比较Sham组相比明显缩短（44.15±2.35 V 27.45±1.65, P < 0.01）,跨越原平台位置的次数较对照组相比也明显减少（4.25±0.67 V 1.73±0.75, P < 0.01）。结论:Morris水迷宫实验可以用来作为评价+Gz暴露后学习和记忆的实验方法,该测试方法稳定可靠。+10Gz/5min暴露并不影响大鼠的运动能力,但可以造成大鼠学习和记忆能力障碍。实验二:电针预处理对+Gz暴露大鼠学习和记忆的影响目的:采用电针刺激“百会穴”预处理,探讨电针预处理是否能够改善正加速度（+Gz）造成的大鼠学习和记忆能力损伤。方法:40只雄性SD大鼠随机分为5组（n=8）+1Gz对照组（Sham）、戊巴比妥钠（Con）组、电针预处理组（EA）、+Gz （+Gz）组和电针预处理-+Gz （EA-+Gz）组。除Sham组和+Gz组外其余各组动物每只均腹腔注射（ip） 2%戊巴比妥钠40mg/kg麻醉,连续5d;+1Gz对照组仅给予+1Gz/5min;EA组电针刺激百会穴30 min/d,连续5d,最后一次预处理后24h给予+1Gz/5min;Con组和+Gz暴露组给予+10Gz/5min暴露;EA-+Gz组接受电针刺激百会穴30min/d,连续5d,最后一次预处理后24h给予+10Gz/5min。所有动物于暴露后2h,采用Morris水迷宫实验探讨大鼠的空间学习和记忆的变化情况。视频自动分析系统记录空间搜索实验和定位航行实验,记录如实验一中各项指标。结果:定位航行实验中,五组大鼠逃避潜伏期和路程[F （4, 35） = 5.98, P<0.01],[F (4, 35 = 6.32, P<0.01]。Sham组、EA组无明显统计差异,与上述两组相比,+Gz组及Con组的逃避潜伏期及游泳路径于暴露后第二天及第三天明显延长（P<0.05）,而EA-+Gz组大鼠的逃避潜伏期及游泳路径较+Gz组有所缩短,但仍然长于其余两组（P<0.05）;五组之间游泳速度相似,无统计差异[F （4, 35） = 1.65, P>0.05]。②.空间探索实验中,+Gz组及Con组大鼠的目标象限活动的时间百分比占总时间百分比明显下降,显着低于Sham组（P< 0.01）。EA-+Gz组与+Gz组相比时间有所增加,但仍低于Sham组( （P < 0.05）。+Gz组穿越站台的次数较Sham组也明显减少,EA-+Gz组较+Gz组有所增加,但仍低于Sham组和EA组（P < 0.05）。结论:连续5天,每天30min电针“百会穴”预处理可以在一定程度上改善+Gz暴露所造成的学习和记忆能力障碍;仅给予连续5天电针预处理及戊巴比妥钠不会影响大鼠学习和记忆能力。实验三:电针预处理抑制+Gz暴露后神经元细胞凋亡改善大鼠认知功能障碍目的:探讨凋亡及相关分子在电针预处理改善+Gz暴露后大鼠学习和记忆中的作用。方法:45只雄性SD大鼠随机分为3组（n=15）: +1Gz对照组（Sham）、+Gz组（+Gz）和电针预处理-+Gz暴露组（EA-+Gz）。Sham组仅给予+1Gz/5min作为对照;+Gz组给予+10Gz/5min暴露;EA-+Gz组接受电针刺激百会穴30min/d,连续5d,最后一次预处理后24h给予+10Gz/5min。选取暴露后不同时间点（6h,12h,24h）进行HE和TUNEL染色分析大鼠海马CA1区细胞形态及凋亡情况,并通过检测凋亡共同通路下游分子Caspase-3活性验证神经元凋亡,通过免疫组化,RT-PCR,Western Blotting检测凋亡上游分子P53情况,从而进一步验证形态学观察的可靠性。结果:+Gz暴露后的早期阶段（6-12h）海马锥状神经元细胞主要以水肿为主,胞浆浅染,有极少数细胞核深染的凋亡细胞;暴露后24h,凋亡细胞及形态改变细胞数目增多,主要分布在海马CA1区。给予电针预处理后,可以减少神经元细胞凋亡。除此之外,+10Gz/5min可以诱导海马CA1区Caspase-3活性升高,6h较为显着,并持续到12h。而电针预处理可以减少Caspase-3活性升高。通过免疫组化,RT-PCR, Western Blotting发现电针预处理还可显着减少+Gz暴露引起的P53mRNA及蛋白表达升高。结论:电针预处理可以有效减轻海马神经元病理损害,减少海马CA1区神经元细胞凋亡,减少+Gz暴露后Caspase-3活性增加以及P53mRNA及蛋白表达上调,改善+Gz暴露后大鼠学习和记忆能力。实验四:电针预处理对+Gz暴露后大鼠脑红蛋白表达的影响目的:探讨电针“百会穴”预处理对+Gz暴露后脑红蛋白的表达影响。方法:15只雄性SD大鼠随机分为3组（n=5）: +1Gz对照组（Sham）、+Gz组（+Gz）和电针预处理-+Gz暴露组（EA-+Gz）。Sham组仅给予+1Gz/5min作为对照;+Gz暴露组给予+10Gz/5min暴露;EA-+Gz组接受电针刺激百会穴30min/d,连续5d,最后一次预处理后24h给予+10Gz/5min。所有动物于暴露后24h处死,利用免疫组化,间接免疫荧光,以及Western Blotting等方法观察电针预处理后,+Gz暴露后大鼠脑组织不同区域脑红蛋白（NgB）表达及分布情况。结果:+Gz暴露后24h,顶叶梨状皮质NgB蛋白表达升高,不同区域升高不同;海马NgB表达下降;丘脑NgB表达类似颅顶,但部分细胞形态改变较大。电针预处理可以进一步增强皮层NgB的表达升高,但对海马区域NgB影响不大。结论: +Gz暴露本身能够上调NgB蛋白的表达,而电针预处理进一步升高该蛋白的表达,推测电针通过上调NgB表达减少+Gz暴露引起的脑组织损伤。
曲云霞[7]（2010）在《白藜芦醇甙对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期学习记忆能力的改善及其机制的研究》文中指出缺氧缺血性脑病是新生儿期常见的神经系统疾病,存活者常遗留学习、记忆等神经系统发育障碍性疾病和脑性瘫痪、癫痫等。关于缺氧缺血性脑损伤的早期干预是目前研究的热点,目前研究显示还没有发现理想的治疗方法。探索最大限度地激活HIE患儿大脑的对抗损伤及重塑潜能的康复方法,以使患者获得更好功能恢复,提高其生存质量显得非常有意义。目的：从学习和记忆能力测定、ICAM-1的表达、细胞凋亡的表达,以及中枢神经系统的突触可塑性和超微结构等方面,探讨缺氧缺血脑损伤引起新生大鼠学习记忆障碍及中药单体白藜芦醇甙改善学习记忆障碍的可能机制。方法：本研究以新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤模型为研究对象,随机分为假手术组、HIBD自然恢复组（HIBD组）和PD干预组。分离并结扎左侧颈总动脉2小时后吸入含氧8%的氮氧混合气体2小时制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。假手术组只分离左侧颈总动脉不结扎。采用Morris Water Maze实验评估HIBD后21天大鼠学习记忆功能的变化,用免疫组化观察脑组织ICAM-1、突触素的表达变化,用TUNEL法观察神经元细胞凋亡的变化,透射电镜观察缺血侧海马CA 1区突触形态结构的变化。结果：一、白藜芦醇甙对HIBD新生大鼠远期学习记忆能力影响的研究1.定位航行实验HIBD组大鼠（52.37±8.03 S）平均逃避潜伏期比假手术组（39.55±8.08S）明显延长（P<0.001）,PD治疗组（43.29±7.63 S）比HIBD组大鼠明显缩短（P<0.05）。三组大鼠第1天训练的平均逃避潜伏期无显着意义差异（P>0.05）,随着训练天数增加,三组大鼠平均逃避潜伏期的均值逐渐缩短；第3天、第4天经单因素方差分析,三组平均逃避潜伏期两两比较,均有统计学意义（P<0.05 or P<0.01）, PD治疗组和假手术组平均逃避潜伏期较HIBD组缩短明显。2.空间搜索实验HIBD组穿台次数（2.36±1.80）比假手术组（5.29±2.62）和PD干预组（4.25±1.66）明显减少,HIBD组目标象限的游泳时间（10.63±3.66S）与假手术组（15.74±3.85）和PD治疗组（14.32±2.52）比较明显缩短（P均<0.05）；PD治疗组的穿台次数和目标象限的游泳时间（14.32±2.52S）均低于假手术组,但组间则无明显差别（P均>0.05）。结果显示缺氧缺血能够损害大鼠的空间探索能力,白藜芦醇甙能减轻缺氧缺血引起的大鼠的空间探索能力损害。3.组织学改变：缺氧缺血组左侧大脑皮质及海马CA1区锥体细胞层次排列紊乱,细胞数目明显减少且排列疏松,细胞核轮廓欠清,尼氏体颗粒丢失明显。PD治疗组神经元尼氏体较缺氧缺血组丰富且染色较深,细胞核轮廓较为清晰,细胞层次较为丰富,细胞排列较缺氧缺血组整齐。二、缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马CA1区的病理改变和突触素的表达及白藜芦醇甙的干预作用1.突触素的表达HI后7天HIBD组大鼠缺血侧海马CA1区突触素表达的平均密度值（0.1628±0.0 1 23）比假手术组（0.2857±0.0709）表达减少。在缺氧后21天HIBD组（0.3436±0.0569）大鼠缺血侧海马CA1区突触素表达明显增高；PD干预组同样也呈现出相同的趋势：缺氧缺血后7天,各组大鼠缺血侧海马CA1区突触素表达的平均密度值已经接近或达到假手术组水平,缺氧缺血后21天PD干预组大鼠缺血侧海马CA 1区突触素表达强度（0.4491±0.2230）进一步增强,与同时间点假手术组和模型组比较差异显着（P<0.05、P<0.01）。2.电镜观察结果（1） HIBD组：海马神经细胞固缩改变、核膜皱折、染色体致密、双核仁,胞浆致密,线粒体肿胀,线粒体嵴消失、内质网扩张。脑组织点状溶解灶,周围髓鞘变性,胶质细胞增生,微血管周围胶质足肿胀、破裂、微血管腔受压变形。神经丝数量减少,排列稀疏。神经元突触数量减少,突触间隙增宽,突触囊泡减少,突触后致密物变薄。（2）PD治疗组：海马神经元核膜完整光滑,核内染色质均匀,胞浆粗面内质网、核糖体及高尔基体、线粒体等细胞器完整、丰富。神经丝排列有序。突触前膜、突触后膜和突触间隙清晰,突触前终末有较多清亮的圆形囊泡,突触后膜有电子密度高的致密物质。三、新生大鼠HI B D后脑组织ICAM-1的表达、细胞凋亡的分析及白藜芦醇甙的作用1.对ICAM-1表达的影响假手术组少许脑实质中微血管显示阳性免疫染色。HIBD组HI后6hrICAM-1免疫阳性染色血管数明显增多,12hr达高峰,24hrICAM-1免疫阳性染色血管数的仍然持续在高峰水平；PD治疗组与HIBD组比较,HI后6hr、12hr、24hr脑微血管内皮ICAM-1表达明显减少（P<0.05或P<0.01）；HE染色组织病理的改变也显示在损伤脑组织中中性粒细胞浸润明显减少,神经元细胞变性、脑组织水肿和组织结构紊乱明显减轻。在HIBD后早期使用白藜芦醇甙,能降低脑微血管内皮ICAM-1的上调,抑制脑内炎症反应的发生。2.海马CA1区神经细胞凋亡及凋亡指数的变化假手术组未见或仅见少量凋亡细胞出现。HIBD组可见有多量凋亡细胞存在。PD干预组凋亡细胞数较HIDB组明显减少。凋亡阳性细胞细胞核有棕黄色至棕褐色颗粒,其形态学特征为细胞核体积缩小,染色质浓集、核裂解以及核周新月体样浓集染色质,细胞内可见深色凋亡小体。缺氧缺血组在缺氧缺血后各时间点海马CA1区神经细胞凋亡指数均明显高于假手术组（P<0.001）,缺氧缺血后随时间而增加；与缺氧缺血组相比,相同时间点PD干预组神经细胞凋亡指数明显下降（P均<0.05）。结论：1.HIBD可以引起新生大鼠空间学习记忆能力的下降,白藜芦醇甙治疗可以改善HIBD大鼠的空间学习记忆能力。2.ICAM-1参与了缺氧缺血性脑损伤时的炎症反应,白藜芦醇甙部分阻断ICAM-1蛋白的表达,此作用可能参与白藜芦醇甙对缺氧缺血后大脑的神经保护作用。3.细胞凋亡参与新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经元的死亡,白藜芦醇甙干预可以抑制缺氧缺血后神经细胞凋亡。4.HIBD后海马突触素免疫反应产物明显减少和超微结构受损,白藜芦醇甙治疗可以使海马组织CA1区组织突触素表达增多,改善脑缺氧缺血大鼠海马突触的超微结构,促进突触重建。综上所述,脑缺氧缺血后学习记忆功能损伤是一个多因素综合作用的过程。脑缺氧缺血引起的炎性损伤、可作为细胞凋亡的刺激信号诱导凋亡相关基因的表达改变、炎症反应及突触的结构和功能的可塑性受损等,都将导致神经结构和功能的损伤,最终引起学习记忆功能减退。白藜芦醇甙可能通过抗炎性浸润、抗凋亡、增加中枢神经系统结构和功能的可塑性等机制来改善脑缺氧缺血引起的学习记忆功能障碍。
赵建华[8]（2007）在《热休克蛋白-70在脑缺血预处理诱导脑缺血耐受中的作用及其机制的实验研究》文中研究表明第一部分大鼠局灶脑缺血预处理诱导脑缺血耐受和HSP70的表达目的研究局部脑缺血预处理（ischemic preconditioning[PC]）、HSP70的表达和对随后发生的局灶脑缺血的保护作用。方法应用改进的Longa’s法,建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）的局部脑缺血预处理诱导脑缺血耐受（ischemic tolerance[IT]）模型。MCAO20min作为PC,分别在再灌注12h、1d、3d、5d、7d、14d后造成永久性MCAO（PMCAO）并与未行PC的假手术组对照。检测以下指标: TTC染色测量梗死体积;神经功能缺失评分;HE染色观察组织结构变化;同时应用原位杂交、免疫组织化学染色和RT-PCR、Western blotting观察PC后HSP70表达的变化。每小组动物5只。结果PC组1d、3d、5d、7d与未行PC组比较,PMCAO后24h脑梗死体积明显减小（P<0.01）,神经功能缺损明显减轻（P<0.05）;PC后不同时间点与假手术组比较缺血区HSP70mRNA（12h、1d、3d、5d）（P<0.01）和蛋白（1d、3d、5d、7d）的表达明显增加（P<0.05）。结论PC可以充分诱导其后17d的脑缺血耐受,同时PC诱导HSP70表达,可能与缺血耐受的产生有关。第二部分HSP70在脑缺血预处理诱导脑缺血耐受中的作用和对细胞凋亡的影响目的探讨HSP70蛋白合成在脑缺血预处理（PC）诱导脑缺血耐受（IT）中的作用和对细胞凋亡的影响。方法应用改进的Longa’s法建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）的局部脑缺血预处理诱导脑缺血耐受（IT）模型。MCAO20min作为PC, PC后24h给予永久性MCAO（PMCAO）,并与未进行PC假手术组比较。免疫印记（Western blotting）法测量PC24h后HSP70的变化,TUNEL法、流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测大鼠前脑皮质细胞的凋亡;同时观察在PC前或PC后PMCAO前给予蛋白合成抑制剂放线菌酮对PC后24h HSP70、PMCAO后24h脑梗死体积、神经功能评分和细胞凋亡的影响。每组动物5只。结果PC组PMCAO后24h脑梗死体积明显减小（P<0.01）,神经功能评分降低（P<0.05）、细胞凋亡数和凋亡率降低（P<0.05）;PC前给予放线菌酮消除了以上影响,但在PC后较长时间而在PMCAO之前给予则没有以上影响;HSP70在PC后1d明显表达,而在PC前30min给予放线菌酮抑制了HSP70的表达（P<0.05）。结论HSP70的合成在PC诱导脑缺血耐受中发挥重要作用,可能是通过抑制神经细胞凋亡实现的。第三部分HSP70在缺血预处理诱导脑缺血耐受中抑制细胞凋亡的机制目的探讨HSP70在缺血预处理诱导脑缺血耐受中抑制细胞凋亡的机制。方法应用改进的Longa’s法建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）局部脑缺血预处理诱导脑缺血耐受（IT）模型。MCAO20min作为PC, PC后24h给予永久性MCAO（PMCAO）,并与未进行PC假手术组比较。免疫组织化学和免疫印记（Western blotting）法测量PMCAO24h后c-fos、bcl-2和caspase-3的变化,同时观察在PC前给予蛋白合成抑制剂放线菌酮对c-fos、bcl-2和caspase-3的影响。结果PC-PMCAO组PMCAO后24h c-fos、bcl-2表达增加,caspase-3表达减少,与假手术（SS-PMCAO）组比较均有显着行差异（P<0.05）。PC前给予放线菌酮消除了以上影响。结论HSP70在PC诱导脑缺血耐受中抗神经细胞凋亡的作用可能是通过促进再缺血后c-fos bcl-2的表达、抑制caspase-3的表达实现的。第四部分氧-糖剥夺预处理和HSP70表达在诱导体外培养神经细胞缺血耐受中的作用目的研究氧-糖剥夺预处理和HSP70表达在诱导体外培养神经细胞缺血耐受中的作用方法原代培养的大鼠皮层神经细胞进行非致死性氧-糖剥夺（Oxygen-glucose deprivation[OGD]）20min作为预处理（ischemic preconditioning[PC]）,分别在PC后12h、24h、48h、72h进行第二次致死性OGD50min,建立体外缺血耐受模型。致死行OGD后24h测定乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase[LDH]）检测神经元损伤的程度、台盼兰染色检测神细胞死亡率;RT-PCR、免疫组织化学、Western blotting测定PC后HSP70的表达;同时测定在PC前30min或PC后较长时间而在致死性OGD前应用放线菌酮对神经细胞损伤和在PC前30min应用放线菌酮对HSP70蛋白的影响。结果与致死性OGD组比较PC-OGD组OGD后24h、48h LDH水平明显减低（P<0.05）、神经细胞死亡数减少（P<0.05）,同时PC后12h、24h、48h HSP70mRNA的表达增加（P<0.05）,24h、48h HSP70蛋白的表达增加（P<0.01）,而PC后12h、72h组则无变化。在PC前应用放线菌酮消除了PC-OGD组OGD后24h上述指标的变化,而在PC后较长时间应用放线菌酮对此则无影响。同时PC前应用放线菌酮抑制了HSP70蛋白的表达（P<0.05）。结论20min OGD预处理成功的诱导了体外皮层神经细胞的缺血耐受,这种作用可能与HSP70的高表达有关。第五部分氧-糖剥夺预处理对体外培养大鼠神经细胞凋亡的保护作用及机制目的探讨氧-糖剥夺预处理对体外培养神经细胞凋亡的保护作用及机制方法原代培养的大鼠皮层神经细胞进行非致死行的氧-糖剥夺（Oxygen-glucose deprivation[OGD]）20min作为预处理（ischemic preconditioning[PC]）,在PC后24h进行第二次OGD50min,建立体外缺血耐受模型。流式细胞仪、TUNEL法,吖啶橙荧光染色测定致死行OGD后24h细胞凋亡率和凋亡细胞数。免疫组织化学和免疫印迹测定致死行OGD后24h bcl-2、caspase-3的表达。结果与对照组相比PC-OGD组致死性OGD后24h神经细胞凋亡百分率和凋亡阳性细胞均减少（P<0.05）,同时发现其致死性OGD24h后bcl-2表达增加（P<0.05）而caspase -3表达减少（P<0.05）。结论PC对体外培养大鼠神经细胞凋亡有保护作用,这种作用可能是通过促进随后发生的致死性OGD后bcl-2表达、抑制caspase -3表达实现的。
施昱丞[9]（2007）在《针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的实验研究》文中研究指明研究目的:近年来脑血管病的发病率呈现较快的上升趋势,该类疾病的致残率和病死率较高。动脉粥样硬化是脑血管病的基本病因之一,而血脂代谢紊乱可致动脉粥样硬化,这在国内外许多研究报道中已证实;血脂异常与脑血管疾病密切相关。高脂血症是引起和加重动脉粥样硬化的病理基础,是导致脑血管疾病的重要危害因素;高脂血症约占整个脑卒中发病率的1/3,因此,降低血脂对减少脑血管疾病的发病率具有重要的意义。在临床上脑血管病患者大多有高脂血症,而高脂血症患者在脑卒中后,会因原本的血脂代谢紊乱,更加重脑缺血后损伤,比单纯性脑缺血损伤更严重;有效地调节血脂水平就可预防脑血管疾病的发生。因此寻找适当有效的早期干预防治措施是针灸临床与实验研究的重要课题之一。研究方法:（1）首先以高脂饲料喂养大鼠造成高脂血症大鼠后,采用氯化铁（FeCl3）化学诱导大脑中动脉血栓闭塞模型法,将高脂血症大鼠造成高血脂合并脑缺血模型,将动物随机分为八组,电针术前干预及脑缺血后全程治疗;（2）应用生化法观察高血脂大鼠脑缺血后血脂四项变化及针刺的影响;（3）应用神经行为学指标观察治疗前后神经症状的改善情况;应用形态学方法观察缺血侧及海马区大脑病理改变状况及针刺的作用;（4）采用免疫组化方法观察针刺前后大鼠缺血侧及海马区星形胶质细胞表达GFAP、HSP70、S-100β、vimentin等的变化;（5）通过双抗夹心ABC-ELISA法,测定脑匀浆中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量。结果:1.经典高脂配方饲料喂养所致的高血脂模型较为理想,然后采用氯化铁（FeCl3）化学诱导大脑中动脉血栓闭塞模型法,将高脂血症大鼠造成高血脂合并脑缺血模型。以大鼠血脂四项的变化,可以作为大鼠高血脂模型检测的方法之一。2.大鼠在造成脑缺血损伤后,1-2h的神经行为症状均有阳性反应,各脑缺血模型组神经行为症状评分显着高于正常对照组和高血脂模型组,脑缺血模型各组行为症状评分总体高于各针刺组,针刺各组有减少评分趋势。提示针刺可以降低大鼠神经行为症状评分,改善神经功能缺损体征。3.针刺可以通过降低总胆固醇、低密度脂蛋白,升高高密度脂蛋白的含量,有效地调节血脂水平。4.在单纯高血脂大鼠海马区、缺血区,与正常对照组比较,高血脂模型组的GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度减少,经针刺治疗7d后,与高血脂模型组比较,高血脂治疗组的GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度增加。而在脑缺血损伤发生后,在大鼠海马区、缺血区GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度显着增加;经针刺治疗7d后,与脑缺血模型组比较,脑缺血治疗组的GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度增加。在高脂血症大鼠造成高血脂合并脑缺血模型后,与脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组在大鼠海马区、缺血区GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度降低。而与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异, p<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组比较,高血脂合并脑缺血Ⅰ组GFAP、HSP70、S-100β及vimentin等的各项升高均有极显着差异,p<0.01;5.NGF、BDNF及bFGF的含量:脑缺血治疗组>脑缺血模型组>正常对照组;正常对照组>高血脂治疗组>高血脂模型组。与正常对照组比较,高血脂模型组及高血脂合并脑缺血模型组的NGF、BDNF及bFGF含量均极显着低于正常对照组（P<0.01）;与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组及高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组的NGF及bFGF含量均极显着高于高血脂合并脑缺血模型组（P<0.01） ;高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组的BDNF含量极显着高于高血脂合并脑缺血模型组（P<0.01）,高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组的BDNF含量高于高血脂合并脑缺血模型组,但二者无差异（P>0.05）;高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组及高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组的NGF及BDNF含量均极显着高于高血脂合并脑缺血模型组（P<0.01） ;高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组的bFGF含量高于高血脂合并脑缺血治疗Ⅱ组。结论:1.本实验首先选用经典高脂饲料喂养大鼠6周造成高血脂模型后,接着再用FeCl3化学诱导大脑中动脉血栓闭塞模型法造成局灶性脑缺血,最终二种模型结合造成高血脂合并脑缺血模型。高血脂合并脑缺血模型建立成功,将可为往后的针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的各种实验研究及探究高血脂合并脑缺血的发病机理提供正确的动物模型。2.脑缺血损伤过程中,高脂血症可加重脑缺血损伤程度;3.针刺可以通过降低总胆固醇、低密度脂蛋白,升高高密度脂蛋白的含量,有效地调节血脂水平。4.持续电针治疗可使星形胶质细胞表达GFAP、HSP70、S-100β、vimentin及大脑中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量,在相当长时间内保持较高水平,有利于受损神经元的修复;电针介入治疗时间点有其重要性,电针早期介入治疗可能是治疗高血脂合并脑缺血疾病的良策,而电针持续增高星形胶质细胞表达GFAP、HSP70、S-100β、vimentin及持续增高大脑中神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的含量,可能是电针抗高血脂合并脑缺血损伤的重要机制之一。
任秀君[10]（2007）在《针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响》文中研究指明研究目的:高脂血症（hyperlipidemia,HLP）由血中脂蛋白合成与清除紊乱所致,表现为血浆脂蛋白异常、血脂增高等,属于祖国医学的“痰浊”“瘀血”范畴。它是动脉粥样硬化等心脑血管疾病发生的重要危险因素,有效地防治HLP是防治心脑血管疾病的重要途径。脑血管疾病是目前严重危害人类健康的主要疾病之一。在我国死于脑血管病者居三大死因首位。其中缺血性脑血管疾病占60%～80%。脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高的“三高”特点,是威胁人类尤其是中老年人健康的常见病、多发病。为了减少和延缓中风的发生,减轻中风后机体状态,从高血脂阶段早期进行针刺干预,是针刺防治中风的新视角,具有重要流行病学研究意义。高血脂与中风,神经干细胞与神经营养因子之间的关系是目前研究尚未进行探讨的部分,本研究试图通过建立高血脂合并脑缺血动物模型,并观察针刺的影响,探讨在高血脂阶段积极早期进行针刺干预,是否可通过升高神经营养因子的合成与分泌,从而促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,促进脑损伤的修复和再生。研究方法:应用大鼠喂养经典高脂饲料,化学诱导大脑中动脉血栓闭塞制造高血脂合并脑缺血模型。将动物随机分为八组:正常对照组、高血脂模型组、高血脂治疗组、脑缺血模型组、脑缺血治疗组、高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ、Ⅱ组。高血脂治疗组用电针三阴交、丰隆穴治疗10天。脑缺血治疗组用针刺人中、百会穴治疗7天。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ、Ⅱ组,先给大鼠喂养高脂饲料造成高血脂模型,治疗Ⅰ组电针三阴交、丰隆穴10天后,两组同时电针三阴交、丰隆穴,针刺人中、百会穴,7天后处死。正常对照组和模型组均不针刺。用生化方法检测各组治疗前后血脂四项。应用神经行为学指标观察治疗前后神经症状的改善情况。实验结束用免疫组化方法检测海马区和额叶皮层脑缺血病理改变、室管膜下区和大脑额叶皮层nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达情况。用酶联免疫法（ELISA）检测右侧大脑匀浆中神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）浓度。实验结果:1高血脂合并脑缺血模型的建立本实验选用经典高脂饲料喂养6周造成高脂血症大鼠模型,在此基础上用大脑中动脉FeCl3刺激血栓性闭塞法造成局灶性脑缺血,最终造成高血脂合并脑缺血模型。预实验结果显示,与同时段正常对照组比较,高血脂组4周、6周CHO、LDL-C、TG升高有显着差异,P<0.01,HDL-C没有显着差异。说明高脂饲料喂养4-6周可以造成大鼠高血脂模型。由于高血脂形成时间较长,饲养6周的高血脂症大鼠模型更近似于人类高血脂症的病理变化,正式实验定为6周。正式实验,42天,高脂饮料喂养的各组大鼠的CHO和LDL-C、TG与正常对照组大鼠比较,升高有显着性差异,P<0.01。HLD-C降低有显着性差异,P<0.01。证明高血脂症大鼠造模成功,可以进行实验。52天脑缺血造模后,在MCAO清醒（术后约1h）后,在1～2h内观察模型动物有脑缺血模型出现的神经功能缺失症状,各组大鼠在造模后1～2h的神经症状行为在评定上均有阳性反应,与正常对照组比较均有显着性差异p<0.01。HE染色结果可见,实验组动物脑缺血造模后,缺血灶出现在额叶,位置比较恒定,缺血灶内细胞排列散乱,并见大量神经元变性坏死,出现脑水肿表现,海马区大量神经元变性坏死,排列紊乱,各组有不同程度的神经元脱失现象等病理改变,说明本实验的脑缺血模型制作是成功的。本实验首次建立高血脂合并脑缺血的动物模型,此模型成功率高,死亡率小,重复性好,充分模拟了人类疾病的病理及生理改变。2正常大鼠血脂、HE染色结果、神经干细胞、NSE、神经营养因子的表达正常大鼠CHO 51.92±9.46mg/dL, HDL-C 26.80±8.16 mg/dL,LDL-C 30.50±8.19 mg/dL,TG47.98±12.18 mg/dL。HE染色结果显示,大鼠右侧海马区和额叶皮层神经细胞排列清楚,细胞形态清晰。神经干细胞标志,nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞,在正常大鼠右侧脑内表达较少,在前脑背外侧伸展、侧脑室外侧壁可观察到散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的阳性细胞（背外侧伸展nestin:阳性细胞数63±9.40;面密度0.62±0.10%;光密度0.50±0.03%。PCNA:阳性细胞数185±10.60;面密度1.93±0.11%;光密度1.22±0.07%。vimentin:阳性细胞数95±6.31;面密度0.61±0.04%;光密度0.34±0.02%。Tuj-1:阳性细胞数56±7.69;面密度0.96±0.13%;光密度0.22±0.03%。侧脑室外侧壁:nestin:阳性细胞数41±5.61;面密度0.35±0.05%;光密度0.23±0.03%。PCNA:阳性细胞数114±22.79;面密度1.25±0.25%;光密度0.94±0.19%。vimentin:阳性细胞数48±11.85;面密度1.05±0.26%;光密度0.58±0.14%。Tuj-1:阳性细胞数35±4.69;面密度0.88±0.12%;光密度0.45±0.06%。）正常对照组大脑右侧额叶皮层相应区域表达更少。（nestin:阳性细胞数14±3.47;面密度0.11±0.03%;光密度0.09±0.02%。PCNA:阳性细胞数58±6.52;面密度0.64±0.07%;光密度0.39±0.04%。vimentin:阳性细胞数56±6.46;面密度0.22±0.03%;光密度0.11±0.01%。Tuj-1:阳性细胞数13±5.14;面密度0.08±0.03%;光密度0.05±0.02%。）右侧大脑匀浆中NSE（41.70±3.47 ng/dL）及神经营养因子NGF（79.36±7.07 pg/ml）、BDNF（5.66±0.86μg/L）、bFGF（51.20±6.05 ng/L）含量呈基础表达。3针刺对实验性高血脂大鼠的治疗作用3.1针刺对实验性高血脂大鼠血脂的作用经针刺治疗后,和高血脂模型组相比,高血脂治疗组大鼠的CHO、LDL-C、TG降低有极显着差异,P<0.01。HLD-C升高有极显着差异,P<0.01。说明针刺能降低实验性高血脂大鼠CHO、LDL-C、TG,升高HLD-C,调节血脂水平。3.2针刺对实验性高血脂大鼠右侧大脑SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1在实验性高血脂造模后大鼠脑内表达较少,在室管膜下区SVZ、背外侧角可观察到散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的阳性细胞,额叶皮质表达更少,与正常对照组相比,其阳性细胞数、面密度、光密度没有显着差异,P>0.05。针刺对实验性高血脂大鼠nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达影响不大。3.3针刺对高血脂大鼠右侧脑组织匀浆中NSE的作用高血脂造模后,右侧脑匀浆中NSE浓度与正常脑匀浆中NSE浓度没有显着差异,P>0.05,说明高血脂本身不能影响右侧脑组织中NSE的分泌与合成。高血脂大鼠治疗组和模型组之间没有显着差异,说明针刺不能影响实验性高血脂大鼠NSE的分泌。3.4针刺对实验性高血脂大鼠右侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常对照组比较,高血脂模型组大鼠大脑匀浆中NGF、BDNF、bFGF含量明显降低,P<0.05或P<0.01;与高血脂模型组比较,针刺治疗组BDNF显着升高,P<0.05,NGF、bFGF没有显着差异,P>0.05,但有升高的趋势。实验结果提示高血脂可降低大鼠大脑中NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成,针刺可升高高血脂状态某些神经营养因子的含量,如BDNF。4针刺对实验性脑缺血大鼠的治疗作用4.1针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后神经行为评分和脑缺血病理改变的作用59天,与正常对照组比较,脑缺血模型组和脑缺血治疗组神经症状评分升高有极显着性差异,p<0.01;与脑缺血模型对照组比较,脑缺血治疗组的神经症状评分降低有极显着性差异,p<0.01。HE染色结果显示,脑缺血治疗组缺血区周围组织水肿减轻,无明显的细胞空泡变性,细胞核正常。海马CA3区结构完整的神经细胞明显增多,变性坏死细胞较少,细胞周围间隙明显缩小,血管病变主要以内皮细胞肿胀,空泡形成为主。说明针刺治疗对局灶性脑缺血大鼠具有显着的治疗作用。4.2针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后缺血侧SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用脑缺血后,大鼠缺血侧前脑室管膜下区（背外侧伸展、侧脑室外侧壁）、缺血区额叶皮层nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1强表达,并有多层阳性细胞,背外侧角可见大量的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞,并向外形成了背外侧伸展,脑缺血区可见散在的nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达。与正常对照组比较,脑缺血模型组、治疗组nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与脑缺血模型组比较,脑缺血治疗组各项升高均有极显着差异,P<0.01。脑缺血后存在神经干细胞的增殖,并有一部分神经干细胞有向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化的趋向。针刺后各项指标高于脑缺血组。说明针刺可提高实验性脑缺血大鼠大脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的表达。针刺结果显示,针刺可促进大脑SVZ和额叶皮层神经干的增殖,并能促进神经干细胞向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化,同时可能促进神经干细胞从SVZ区向缺血区迁移。4.3针刺对实验性脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中NSE的作用与正常组相比,脑缺血模型组大脑匀浆中NSE含量明显上升,有极显着性差异,P<0.01;与脑缺血模型组相比,脑缺血治疗组大脑匀浆中NSE含量降低有极显着差异,P<0.01。实验结果提示:脑缺血后,脑匀浆中NSE浓度显着升高,说明出现脑损伤。针刺可降低NSE浓度,从而减轻脑损伤。4.4针刺对实验性脑缺血大鼠脑缺血后缺血侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常组相比,脑缺血模型组缺血侧脑组织匀浆中NGF、BDNF、bFGF含量明显上升,有显着性差异,P<0.05;与脑缺血模型组相比,脑缺血治疗组缺血侧脑组织匀浆中NGF、bFGF含量升高有显着差异,P<0.05或P<0.01。实验结果提示脑缺血后,缺血侧脑组织匀浆中NGF、BDNF、bFGF浓度显着升高,说明脑缺血后,自身可分泌神经营养因子,从而产生一定的脑保护作用。针刺可通过促进缺血侧大脑NGF、bFGF的分泌与合成,加强脑保护作用。5针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠的治疗作用5.1针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠血脂的作用经针刺治疗后,与正常对照组比较,高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅰ组、Ⅱ组CHO、LDL-C升高有极显着性差异,P<0.01;高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅱ组TG升高,有极显着性差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,治疗Ⅰ组CHO、TG、LDL-C降低有显着性差异,P<0.01或P<0.05,治疗Ⅱ组没有显着差异,P>0.05;与治疗Ⅰ组比较,治疗Ⅱ组CHO、LDL-C、TG没有显着差异,P>0.05;HDL-C,各组之间比较没有显着差异,P>0.05,但与42天比较,治疗Ⅰ组HDL-C升高有显着差异,P<0.01。本实验表明,针刺可降低高血脂合并脑缺血大鼠CHO、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,高血脂合并脑缺血模型治疗治疗Ⅰ组疗效好于治疗Ⅱ组,从而说明从高血脂阶段积极介入针刺治疗,可更好、更有效地调节血脂水平。5.2针刺对实验性高血脂合并脑缺血脑缺血后神经行为评分和脑缺血病理改变的作用与合并模型组比较,合并治疗组神经症状评分显着降低,p<0.05;与合并治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组没有显着差异,p>0.05,说明针刺治疗对局灶性脑缺血大鼠具有显着的治疗作用。针刺后缺血区HE结果显示,针刺后缺血区周围组织水肿减轻。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组水肿程度最轻,无明显的细胞空泡变性,细胞核正常。海马CA3区结构完整的神经细胞明显增多,变性坏死细胞较少,细胞周围间隙明显缩小,血管病变主要以内皮细胞肿胀,空泡形成为主。说明电针在高血脂成模后积极治疗可减轻脑损害。5.3针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧SVZ和额叶皮层神经干细胞的作用高血脂合并脑缺血模型组前脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、额叶缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞的表达弱于单纯脑缺血模型组。与正常对照组比较,高血脂合并脑缺血模型组、高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组、Ⅱ组阳性细胞个数、面密度、光密度升高均有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比较,高血脂合并脑缺血Ⅱ组各项降低有极显着差异,P<0.01。实验结果提示高血脂可减弱脑缺血后nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1阳性细胞的表达。即高血脂可减弱脑缺血后神经干细胞的增殖,迁移和分化。针刺可提高高血脂合并脑缺血模型大鼠大脑侧脑室背外侧伸展、侧脑室外侧壁、缺血区nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1的表达。高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比Ⅱ组各项表达要强,说明在高血脂阶段介入治疗,更能提高nestin、PCNA、vimentin、Tuj-1表达。针刺结果显示,针刺可促进高血脂合并脑缺血模型大鼠大脑SVZ和额叶皮层神经干的增殖,并能促进神经干细胞向胶质细胞和神经元祖细胞定向分化,同时可能促进神经干细胞从SVZ区向缺血区迁移。说明在高血脂阶段介入治疗,更能促进神经干细胞的增殖,分化和迁移。5.4针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中NSE的作用与正常对照组和脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组大脑匀浆中NSE含量显着上升,有显着性差异,P<0.05,P<0.01。与正常对照组相比,合并各组缺血侧大脑匀浆中NSE含量明显上升,有极显着性差异,P<0.01;与合并模型组比较,合并治疗Ⅰ组、Ⅱ组下降有显着差异P<0.01,P<0.05;与高血脂合并脑缺血模型治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组升高有显着差异P<0.05。实验结果提示,高血脂合并脑缺血可加重脑缺血后脑损伤,针刺可减低高血脂合并脑缺血大鼠的脑损伤,尤其在高血脂阶段介入针刺治疗的治疗Ⅰ组疗效远远好于治疗Ⅱ组。5.5针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠缺血侧脑组织匀浆中神经营养因子的作用与正常对照组、脑缺血模型组比较,高血脂合并脑缺血模型组NGF、BDNF、bFGF降低有极显着差异,P<0.01;与高血脂合并脑缺血模型组比较,治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组NGF、bFGF上升有显着差异P<0.01;与高血脂合并脑缺血治疗Ⅰ组比较,Ⅱ组NGF、BDNF降低有显着差异P<0.01。实验结果提示:高血脂可降低脑缺血后脑自身的保护作用,针刺可通过促进NGF、BDNF、bFGF的分泌和合成,从而起到脑保护的作用。针刺治疗Ⅰ组的NGF、BDNF高于Ⅱ组,说明在高血脂阶段积极进行针刺治疗可更好的提高神经营养因子分泌,从而起到脑保护的作用。实验结论:1高血脂合并脑缺血模型的建立是成功的。2高血脂本身并不能影响实验性高血脂大鼠右侧室管膜下区和右侧额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,和右侧脑匀浆中NSE的表达,但能降低右侧大脑匀浆中神经营养因子,如NGF、BDNF、bFGF的分泌。3脑缺血能增强实验性脑缺血大鼠缺血侧室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进缺血侧脑组织中NSE的分泌,促进缺血侧脑组织中NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。4高血脂合并脑缺血,可减弱脑缺血后室管膜下区和右侧额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进缺血侧脑组织NSE的分泌,降低缺血侧脑组织NGF、BDNF、bFGF的分泌,减弱大脑的自我保护作用。5针刺“丰隆”、“三阴交”,可降低实验性高血脂大鼠CHO、TG、LDL-C,升高HDL-C水平。针刺不能影响实验性高血脂大鼠高血脂后大脑右侧室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,和右侧脑组织中NSE的分泌,但能促进右侧脑组织中BDNF的分泌与合成。6针刺“百会”“人中”可改善实验性脑缺血大鼠神经行为症状评分,改善脑缺血状态,降低缺血侧NSE的分泌,增强实验性脑缺血大鼠缺血侧大脑室管膜下区和额叶皮层神经干细胞的增殖、迁移与分化,促进大脑缺血侧脑组织NGF、bFGF的分泌与合成。7针刺可降低高血脂合并脑缺血大鼠CHO、TG、LDL-C水平,升高HDL-C水平,改善高血脂合并脑缺血模型大鼠神经行为症状评分,改善脑缺血状态,可提高高血脂合并脑缺血后缺血侧室管膜下区和缺血区神经干细胞的增殖、迁移与分化,降低缺血侧脑组织中NSE的分泌,促进缺血侧脑组织中神经营养因子NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。8从高血脂阶段积极介入针刺治疗,可更好、更有效地调节血脂水平,改善脑缺血状态,明显提高高血脂合并脑缺血后缺血侧室管膜下区和缺血区神经干细胞的增殖、迁移与分化,降低缺血侧大脑NSE的分泌,促进缺血侧大脑匀浆中神经营养因子NGF、BDNF、bFGF的分泌与合成。9针刺能通过促进缺血侧脑组织NGF、BDNF、bFGF的分泌,降低NSE分泌,促进神经干细胞的增殖、迁移和分化,从而促进神经元的修复和再生。综上所述本实验结果显示,神经营养因子和神经干细胞增殖、迁移、分化之间存在必然联系。在实验性脑缺血和实验性高血脂合并脑缺血大鼠脑缺血造模后,神经营养因子含量的升高,往往同神经干细胞的增殖同时出现,所以猜测本实验脑缺血后是神经营养因子的升高促进了神经干细胞的增殖、迁移和分化。实验结果表明,针刺作为一种治疗手段在一定程度上促进了神经营养因子的分泌,从而最终促进了脑缺血后神经干细胞增殖、迁移、分化,尤其在高血脂阶段针刺治疗可减轻脑缺血后损伤,促进神经元的修复与再生。
二、缺氧缺血后新生鼠脑c-fos表达与脑海马迟发性神经元死亡（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、缺氧缺血后新生鼠脑c-fos表达与脑海马迟发性神经元死亡（论文提纲范文）
（1）侧脑室注射EGb 761对MCAO大鼠神经细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 药品和试剂 |
| 1.3 分组、模型制备及神经功能评分 |
| 1.4 给药方法 |
| 1.5 取材及组织切片样本制备 |
| 1.6细胞凋亡检测 |
| 1.7 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 神经行为学观察 |
| 2.2 对缺血-再灌注大鼠皮层区梗死灶周围TUNEL阳性细胞计数的影响 |
| 2.3 对缺血-再灌注大鼠皮层区梗死灶周围c-fos和c-jun阳性细胞数的影响 |
| 3 讨论 |
（2）复智胶囊及大黄素对VD大鼠海马和SH-SY5Y线粒体凋亡通路与Iκ电流关系的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 从肾论治血管性痴呆的中医药研究进展 |
| 1 从肾论治血管性痴呆的中医理论依据 |
| 2 从肾论治血管性痴呆的现代医学认识 |
| 3 马云枝教授治疗血管性痴呆的经验述评 |
| 4 局限与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 Bcl-2和Caspase在缺血性脑损伤线粒体凋亡通路中的重要角色 |
| 1 细胞凋亡和缺氧缺血性脑损伤 |
| 2 线粒体通路在缺血性脑损伤神经元凋亡中具有调控作用 |
| 3 局限与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 复智胶囊对VD模型大鼠线粒体凋亡通路的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 复智胶囊主要成分大黄素对 SH-SY5Y 缺糖缺氧损伤的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验三 复智胶囊有效成分大黄素对SH-SY5Y缺糖缺氧后I_κ的影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 存在问题与不足 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 造模方法选择 |
| 附录二 阳性药选择 |
| 附录三 Morris水迷宫图 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（3）大鼠放射性脑损伤模型中Ca、Cu、Zn、Fe、Mg含量和c-Fos、NF-κB表达的变化及MgSO4的保护作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 大鼠放射性脑损伤模型中CA、FE、CU、ZN、MG含量的变化及MGSO_4的保护作用 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 大鼠放射性脑损伤模型中C-FOS和 NF-ΚB|表达变化及MGSO_4的保护作用 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 关于血管内皮细胞生长因子在缺血/缺氧性脑损伤过程中机制的初步探讨 |
| 参考文献 |
| 缩写词表 |
| 发表论文及其他 |
| 致谢 |
（4）JNK/MAPK信号通路介导川芎嗪对海马神经元损伤的保护机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 引言 |
| 第一章 文献研究和立项依据 |
| 第一节 脑缺血/再灌注损伤的机制及研究概况 |
| 一、自由基与缺血/再灌注损伤 |
| 二、细胞凋亡与缺血再灌注损伤 |
| 三、兴奋性氨基酸毒性与缺血再灌注损伤 |
| 四、炎性反应与缺血再灌注损伤 |
| 五、钙离子的超载与缺血再灌注损伤 |
| 第二节 JNK通路与脑缺血再灌注损伤研究进展 |
| 一、JNK的生物学特征 |
| 二、JNK信号通路调节因子 |
| 三、JNK介导细胞凋亡的机制 |
| 第三节 川芎嗪对神经细胞凋亡保护机制的研究进展 |
| 一、清除自由基、调节脂质代谢 |
| 二、抗血小板聚集和血栓形成 |
| 三、舒血管作用 |
| 四、抑制钙超载 |
| 五、调节凋亡相关基因的表达 |
| 六、抑制Fas蛋白的表达 |
| 七、影响细胞因子水平 |
| 第四节 立论依据与研究意义 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 实验材料 |
| 一、实验动物 |
| 二、实验药物和试剂 |
| 三、实验仪器 |
| 四、实验前准备 |
| 五、主要试剂的配制 |
| 第二节 实验方法 |
| 一、海马神经细胞原代培养 |
| 二、实验分组及缺氧/复氧模型的建立 |
| 三、具体实验方法 |
| 第三节 实验结果 |
| 一、相差显微镜下观察原代培养大鼠海马神经元形态学改变 |
| 二、大鼠海马神经元细胞缺氧/复氧不同时间对其形态的影响 |
| 三、不同浓度川芎嗪预给药对缺氧/复氧大鼠海马神经元凋亡率的影响 |
| 四、不同浓度川芎嗪预给药对缺氧/复氧大鼠海马神经元c-fos、c-jun、p-jnk蛋白表达的影响 |
| 五、不同浓度川芎嗪预给药对缺氧/复氧大鼠海马神经元MKK4、MKK7基因mRNA的表达水平的影响 |
| 附图表 |
| 第四节 讨论 |
| 一、海马神经元原代培养 |
| 二、JNK通路抑制剂SP600125与川芎嗪对缺氧/复氧海马神经元凋亡率的影响 |
| 三、SP600125与川芎嗪对缺氧/复氧海马神经元C-fos、C-jun、P-JNK蛋白表达的影响 |
| 四、SP600125与川芎嗪对缺氧/复氧海马神经元MKK4mRNA、MKK7mRNA的含量的影响 |
| 第三章 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（5）白藜芦醇甙对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠ERK通路的影响及其改善学习记忆能力的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 论文一 白藜芦醇甙对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠学习记忆能力的影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 论文二 白藜芦醇甙对新生大鼠缺氧缺血脑损伤后 ERK 通路及 p-CREB 的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 论文三 缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织 BDNF 的表达及白藜芦醇甙的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 论文四 新生大鼠缺氧缺血后脑组织 c-Jun 表达及白藜芦醇甙的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 科研课题和成果 |
| 发表论文及专着 |
| 致谢 |
（6）电针预处理对+Gz暴露大鼠学习和记忆的影响及机制的研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 正文 |
| 实验一 +GZ 暴露对大鼠学习和记忆的影响 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 电针预处理对+GZ 暴露大鼠学习和记忆的影响 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 电针预处理通过减少神经元细胞凋亡改善大鼠认知功能障碍 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 电针预处理对+GZ 暴露后大鼠脑红蛋白表达影响 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（7）白藜芦醇甙对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期学习记忆能力的改善及其机制的研究（论文提纲范文）
| 一、摘要 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 二、文献综述 |
| 参考文献 |
| 三、正文 |
| 前言 |
| 论文一 白藜芦醇甙对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期学习记忆影响的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 论文二 缺血缺氧性脑损伤新生大鼠海马CA1区的病理改变和突触素的表达及白藜芦醇甙的干预作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 论文三 新生大鼠HIBD后脑组织ICAM-1的表达、细胞凋亡的分析及白藜芦醇甙的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附图 |
| 四、附录 |
| 五、英文缩略语说明 |
| 六、致谢 |
（8）热休克蛋白-70在脑缺血预处理诱导脑缺血耐受中的作用及其机制的实验研究（论文提纲范文）
| 研究背景 |
| 参考文献 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1. 大鼠局灶脑缺血预处理诱导脑缺血耐受和HSP70 的表达 |
| 1.材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 2. HSP70 在大鼠脑缺血预处理诱导脑缺血耐受中的作用和对细胞凋亡的影响 |
| 1.材料和方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 3. HSP70 在大鼠脑缺血预处理诱导脑缺血耐受中抑制细胞凋亡的机制 |
| 1.材料和方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 4. 氧－糖剥夺预处理和HSP70 表达在诱导体外培养大鼠神经细胞缺血耐受中的作用 |
| 1.材料和方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 5. 氧－糖剥夺预处理对体外培养大鼠神经细胞凋亡的保护作用及机制 |
| 1.材料和方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 参考文献 |
| 6. 全文小结 |
| 7. 综述 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读博士学位期间发表(录用)的论文 |
| 致谢 |
（9）针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 针灸治疗高脂血症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 针刺对实验性脑缺血损伤作用机理研究 |
| 参考文献 |
| 综述三 星形胶质细胞在脑缺血损伤后作用机理的研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 高血脂合并脑缺血大鼠模型的建立 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠治疗前后血脂含量变化的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经行为症状及病理改变的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达GFAP 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验五 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达HSP70 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验六 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达S-100β的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验七 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞表达vimentin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验八 针刺干预后高血脂合并脑缺血大鼠NGF、BDNF、bFGF 含量的变化.. |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综合讨论 |
| 1. 高血脂合并脑缺血大鼠模型的建立 |
| 2. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠治疗前后血脂的影响及机理研究 |
| 3. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经行为症状及病理改变的影响 |
| 4. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠海马、缺血区星形胶质细胞表达 GFAP、HSP70、S-100β 及 vimentin 等的影响研究 |
| 5. 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠 NGF、BDNF 及 bFGF 等表达的影响研究 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附图 |
（10）针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语（abbeviations） |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 针刺治疗高血脂的研究进展 |
| 1 中医对高脂血症认识 |
| 2 高血脂的病因病机 |
| 3 针刺治疗高血脂的临床研究 |
| 4 针刺治疗高血脂的实验研究 |
| 5 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医学对中风病的认识 |
| 1 病名 |
| 2 病位 |
| 3 病因 |
| 4 促发因素 |
| 5 临床症状 |
| 6 辨证施治 |
| 7 预后 |
| 8 针灸在治疗中风中的作用 |
| 参考文献 |
| 综述三 针刺对实验性脑缺血作用机制的研究进展 |
| 1 针刺对脑缺血合并症的实验研究 |
| 2 针刺抗脑缺血的作用机制研究 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 综述四 神经干细胞与脑缺血 |
| 1 神经干细胞的发现 |
| 2 神经干细胞的概念 |
| 3 神经干细胞的生物学特性 |
| 4 神经干细胞的定位和标记 |
| 5 脑缺血与NSC 的激活 |
| 6 脑缺血时影响NSC 增殖的因素 |
| 7 针灸与脑缺血后神经干细胞的研究现状 |
| 8 研究展望与科学意义 |
| 参考文献 |
| 综述五 神经营养因子与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 1 神经干细胞分化及其相关因子 |
| 2 NGF 家族与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 2.1 NGF |
| 2.2 BDNF |
| 3 GDNF 家族与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 4 其他生长因子与脑缺血及神经干细胞的关系 |
| 4.1 bFGF |
| 4.2 其他生长因子 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 高血脂合并脑缺血大鼠模型的建立 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 电针对实验性高血脂大鼠血脂四项的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 电针对高血脂合并脑缺血大鼠血脂四项的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 针刺对实验性脑缺血神经行为及脑缺血病理改变的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| HE 染色图 |
| 实验五 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠Nestin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Nestin 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠PCNA 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| PCNA 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验七 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠vimentin 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Vimentin 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠Tuj-1 的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| Tuj-1 表达图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验九 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验十 针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经营养因子NGF、BDNF、bFGF 的影响.. |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综合讨论 |
| 实验结论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、缺氧缺血后新生鼠脑c-fos表达与脑海马迟发性神经元死亡（论文参考文献）
- [1]侧脑室注射EGb 761对MCAO大鼠神经细胞凋亡的影响[J]. 孙灵芝,孟苗苗,刘芹,曹晓岚. 中国中医药现代远程教育, 2018(14)
- [2]复智胶囊及大黄素对VD大鼠海马和SH-SY5Y线粒体凋亡通路与Iκ电流关系的影响[D]. 孙邈. 北京中医药大学, 2016(04)
- [3]大鼠放射性脑损伤模型中Ca、Cu、Zn、Fe、Mg含量和c-Fos、NF-κB表达的变化及MgSO4的保护作用[D]. 许超. 苏州大学, 2016(06)
- [4]JNK/MAPK信号通路介导川芎嗪对海马神经元损伤的保护机制研究[D]. 钟鸣. 广州中医药大学, 2012(10)
- [5]白藜芦醇甙对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠ERK通路的影响及其改善学习记忆能力的机制研究[D]. 孙瑾. 大连医科大学, 2012(11)
- [6]电针预处理对+Gz暴露大鼠学习和记忆的影响及机制的研究[D]. 冯书芳. 第四军医大学, 2010(06)
- [7]白藜芦醇甙对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期学习记忆能力的改善及其机制的研究[D]. 曲云霞. 大连医科大学, 2010(10)
- [8]热休克蛋白-70在脑缺血预处理诱导脑缺血耐受中的作用及其机制的实验研究[D]. 赵建华. 华中科技大学, 2007(05)
- [9]针刺对实验性高血脂合并脑缺血大鼠星形胶质细胞影响的实验研究[D]. 施昱丞. 北京中医药大学, 2007(02)
- [10]针刺对高血脂合并脑缺血大鼠神经干细胞和神经营养因子的影响[D]. 任秀君. 北京中医药大学, 2007(02)