一、P53蛋白在喉癌细胞中的表达（论文文献综述）
黄镇楷[1]（2021）在《喉高分化鳞状细胞癌临床特征与治疗策略初步探讨》文中研究说明背景与目的喉癌（laryngocarcinoma,LC）在头颈部恶性肿瘤中较为常见,96%?98%为喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）,按细胞分化程度可分为高、中、低分化三种病理类型,其中喉高分化鳞状细胞癌（highly differentiated laryngeal squamous cell carcinoma,HDLSCC）较少见。众所周知,肿瘤分级不同,其临床行为、治疗及预后有着明显的差异。近年来,LC精准外科概念[1]的实践更要求LC外科治疗迈向更高层次的精准化、精细化、微创化和个性化,这就要求我们必须将肿瘤分级作为肿瘤治疗的重要指导思想,依据肿瘤分级制定差异化的治疗策略和临床径路。而迄今为止,国内外专门针对HDLSCC临床特征的研究甚少,各种权威指南缺乏根据肿瘤分级制定的HDLSCC治疗指南。本文对我科HDLSCC的临床数据进行回顾性总结与分析,旨在提高我们对HDLSCC的认识,为其临床更精准微创个性化的治疗策略提供依据。资料与方法回顾分析从2003年01月至2016年12月过去14年间汕头大学医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科收治的HDLSCC患者资料71例。包括男性67例,女性4例,年龄在32?79岁,且都是首次接受治疗。根据UICC分期可分为I期18例,II期28例,III期14例,IV期11例。其中根据临床TNM分期可分为T1N0M0 18例,T2N0M0 28例,T2N1M01例,T2N2M0 1例,T3N0M0 13例,T4N0M0 9例,T4N1M0 1例。单纯手术治疗的患者有66例,全喉切除术的患者有19例,部分喉切除术的患者有47例,同期行手术及化疗的有5例。同期行颈部淋巴结清扫有30例。组间运用SPSS 22.0统计学软件对数据进行统计分析。结果全组患者在围手术期间不存在死亡病例,首次就诊时均未出现远处转移,颈部淋巴结转移率为4.2%。平均病史约14.24月,T1+T2占67.6%,T3+T4占32.4%,且T1+T2与T3+T4的平均病史分别为10.08月以及22.91月,组间比较有显着差异。术后复发率28.2%,按T分期可见术后复发率为T1 5.6%,T2 23.3%,T3 46.2%,T4 60%,且T1+T2与T3+T4的术后复发率分别为16.7%、52.2%（P<0.05）;按N分期可见在N1?2的患者中,术后复发率为66.7%,在N0患者中,术后复发率为25%,两组比较有显着性差异（P<0.05）。术后复发组3年及5年生存率分别是60%和30%,无复发组的3年及5年生存率分别是100%和98.0%,两组间的比较差异有显着性。全组的3年及5年生存率分别是88.7%和78.9%,生存率均随着T分期分期的递增而下降,T1+T2与T3+T4的生存率比较具有显着性差异。单纯手术组的3年及5年生存率分别是89.3%（59/66）和78.8%（52/66）,手术+化疗组的3年及5年生存率均为80%（4/5）,两组生存率的比较结果无显着性差异。结论1.HDLSCC以声门型多见,男性明显多于女性,其发病多在40岁以上,好发年龄为50?80岁,本文资料未发现HDLSCC在年龄、性别、发病部位方面有其明显特质。2.HDLSCC病程进展缓慢,晚期患者少。其侵袭性较PDLSCC低,生存率更高,可采取更保守的手术治疗策略和喉功能保全手术。3.基于以下方面的考量:（1）由于传统经典的普遍性共识,高分化恶性肿瘤对放、化疗的低敏感或不敏感;（2）由于目前LSCC分子病理研究的相对滞后,尚无足够的基础研究发现HDLSCC放化疗敏感性预测标志物,也无强力的临床循证证据支持HDLSCC放化疗确切的疗效;（3）依据我们对HDLSCC的治疗经验及本研究对HDLSCC的认识,我们倾向保守认为对于HDLSCC,无论是早期患者还是晚期患者,手术彻底切除是其近乎唯一有效的治疗手段,并且倡导和推崇更趋于保守的手术方式和更多喉功能保全性手术,联合放化疗对HDLSCC的疗效不明,我们不建议采用放化疗作为辅助治疗手段。4.根据本文的认识和我们的临床经验,我们认为声门型HDLSCC手术治疗应遵循下列几点基本原则:（1）手术是主要治疗手段,不推荐放疗作为唯一的手段;（2）不主张常规甲状腺切除;（3）T1-3N0患者均不需做预防性颈清术,T4N0患者术中行前哨淋巴结活检,根据活检结果决定是否行颈清术;（4）尽量采取保守性切缘,尽量行喉功能保全手术。在上述基础上,我们提出了声门型HDLSCC的治疗策略和临床径路。
盛晓丽[2]（2021）在《HTR7致喉鳞状细胞癌患者不良预后的相关机制研究》文中研究表明研究目的喉鳞状细胞癌在我国的发病率仍较高,致残率高,严重影响了患者的生存治疗和生命。目前仍需要有效并且特异性高的生物标志物以提高早期诊断。虽然近几年来靶向药物在肿瘤等疾病的治疗中的作用研究较多,但尚缺乏有效治疗喉癌的靶向药物。G蛋白偶联受体（GPCRs）是目前研究最多的药物靶点,GPCRs是否可能作为头颈鳞癌基因治疗的药物靶点目前尚未见研究涉及。关于GPCRs与在喉癌肿瘤组织中的表达水平如何,以及GPCRs是否可以调控喉癌细胞的生物学行为及其机制,目前尚未见文献报道。本研究是基于TCGA数据库中喉癌数据文件的分析发现5羟色胺受体7（HTR7）,GPCRs家族的一员,在喉鳞状细胞癌肿瘤组织中表达明显增高。通过系列实验研究,拟分析喉鳞状细胞癌标本中HTR7是否呈现表达异常,以及其表达水平是否与喉癌患者的预后相关,探讨HTR7在喉鳞状细胞癌细胞生物学行为中是否发挥作用及可能的调控机制,从而为喉癌的早期诊断以及靶向治疗提供实验室依据。研究方法1.随机选取我科喉鳞状细胞癌标本库中的8对新鲜喉癌及癌旁组织,进行q-PCR和Western blot实验分析HTR7的表达情况;对113名喉鳞状细胞癌患者的组织标本进行免疫组化染色分析HTR7蛋白在喉癌组织标本中的表达情况,并将免疫组化染色结果与患者的预后进行相关性分析。2.构建过表达HTR7和敲减HTR7表达的细胞,进行MTT实验、平板克隆形成实验、BrdU增殖实验、soft agar assay实验及裸鼠成瘤模型实验,分析HTR7表达水平不同的情况下喉癌细胞的生物学行为的变化。3.我们通过GSEA分析发现,HTR7表达水平与PI3K/Akt信号通路的下游蛋白表达正相关。于是行FOXO荧光素酶报告基因实验,了解HTR7过表达是否可以激活PI3K/Akt通路;将喉癌细胞株进行HTR7过表达或敲减,进行q-PCR及Western blot实验,研究PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化;在HTR7过表达的细胞株中抑制PI3K/Akt通路,观察细胞的生物学行为变化。结果1.使用8对新鲜喉癌组织及癌旁正常组织进行q-PCR和Western blot实验,发现喉癌组织中HTR7 mRNA和蛋白水平均表达增高。使用113对喉癌患者肿瘤标本及癌旁正常组织进行免疫组化,发现喉癌组织较癌旁正常组织的HTR7表达明显增高,对喉癌组织中HTR7的表达情况与患者的预后进行生存分析发现,HTR7高表达的患者较低表达的患者生存时间明显缩短,单因素和多因素COX回归分析提示喉癌组织中HTR7高表达是导致喉癌患者不良预后的独立影响因素。2.MTT实验、平板克隆形成实验、BrdU增殖实验、soft agar assay实验表明,HTR7过表达可以促进喉癌细胞的增殖生长,敲减HTR7的表达可以抑制喉癌细胞的增殖;裸鼠成瘤模型实验显示,HTR7过表达的细胞株在裸鼠内成瘤速度快、瘤体体积较大,而敲减HTR7的细胞株在裸鼠内成瘤速度较慢、瘤体体积较小。3.FOXO荧光素酶报告基因实验发现HTR7高表达可以激活PI3K/Akt信号通路,通过细胞实验发现,HTR7过表达促进Akt的磷酸化,可以增加P13K/Akt信号通路的下游靶基因 BCL2L1、BCL2A1、BIRC5、BCL2、XIAP、CCNE2、CCND2、CDK2、CDK4和BAD的表达;通过平板克隆实验和soft agar assay实验,发现HTR7过表达的细胞株中通过抑制/干扰Akt的表达能够抑制PI3K/Akt通路活性,能够抑制喉癌细胞的增殖和生长。结论本研究发现HTR7在喉癌组织中高表达,HTR7高表达与喉癌患者的不良预后相关,HTR7促进喉癌细胞的增殖和生长是可能是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。因此HTR7有可能作为预测喉癌患者预后的标志物,并且有可能成为喉癌基因靶向治疗的药物靶点。
谷佳[3]（2021）在《miR-552通过靶向p53调控喉癌细胞生长、转移和干性的研究》文中认为目的:喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一,在我国东北部地区高发,且发病率呈逐年上升趋势,已成为危害人民身体健康的重要疾病之一。目前喉癌的治疗是以手术为主辅以放疗和化疗的综合治疗。近年来尽管喉癌在治疗上取得了多方面的进展,但由于缺乏有效的早期诊断标志物,易发生恶性增殖与颈部淋巴结转移,加之缺少特异敏感的药物,喉癌患者的喉功能保存率及五年生存率难以获得实质性的提高。因此,研究喉癌的发病机制,寻找新的治疗靶点,提高喉癌患者的临床疗效,已成为当务之急。MicroRNAs（miRNAs）属于非编码RNA,是由约22个核苷酸构成的小分子RNA。Mi RNAs通过靶向靶分子的3’端非翻译区（untranslated region,UTR）发挥转录后调控的作用。越来越多的研究结果显示miRNAs参与肿瘤的各个过程,包括肿瘤发生、增殖、转移、复发和耐药等。例如,miR-365可通过RAC1途径调控肝癌干细胞。Mi R-383-5p通过靶向HDAC9分子进而抑制胃癌的进展。有研究报道miRNAs存在于各种体液中,结构稳定且可反映起源组织的病理生理状况,这一特点可使它成为新的有前途的生物标志物。多项研究报道了数种在人类喉癌中异常表达的不同miRNAs,包括miR-9、miR-29a-3p、miRNA-221等。miR-552是一种新发现的miRNA,其在生理或病理过程中发挥的作用及作用机制尚未被完全阐明。既往研究表明,miR-552可通过靶向WIF1促进骨肉瘤细胞的增殖和转移。此外,Mi R-552通过抑制AJAP1表达促进肝癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转换（epithelial mesenchymal transition,EMT）。同时还有研究报道miR-552促进肝癌起始细胞的自我更新及化疗耐药。然而,作为重要的节点分子miR-552在喉癌中的生物学作用及调控机制尚不清楚。肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）是一小群具有自我更新能力和致瘤性的癌细胞,已有研究表明肿瘤干细胞是肿瘤形成、生长、转移、复发和介导放疗抵抗和化疗耐药的最主要原因。越来越多的证据表明喉癌中存在肿瘤干细胞,可利用其干性标志蛋白CD133、CD44直接从切除的喉癌组织中分离出来。此外,也可以从原代培养的人喉癌细胞中鉴定出肿瘤干样细胞。因此,研究喉癌干细胞特性有助于阐明喉癌的发展,对于深入了解喉癌的复发转移也具有重要意义。本课题拟检测喉癌组织及细胞中miR-552的表达情况,通过设计包装miR-552的过表达和敲减慢病毒,感染喉癌细胞系建立稳定的过表达和敲减细胞系,通过体内和体外实验研究miR-552对喉癌细胞生长和转移的调控作用;通过流式细胞仪和低粘附培养富集喉癌干细胞,检测分析miR-552在喉癌干细胞中的表达情况,并利用稳定的miR-552敲减细胞系研究其对喉癌干细胞自我更新和体内成瘤能力的影响;通过生物信息学分析找到miR-552可能的下游信号分子p53,并利用经典的生物学方法验证miR-552通过p53调控喉癌细胞的生长、转移和自我更新;希望通过本项研究,能为喉癌增殖、转移及干性的调控提供新的分子机制,为喉癌诊断、治疗和预后判定分子标志物的深入研究奠定理论基础。研究方法:本研究纳入56例2019年1月-2019年6月在中国医科大学附属第一医院住院明确诊断为喉鳞状细胞癌的患者。其手术切除的喉癌组织和癌旁对照组织立即在液氮中快速冷冻,并在-80°C条件下保存,供后续分析。每位患者均已签署了知情同意书,且研究方案经中国医科大学附属第一医院医学科学研究伦理委员会批准;于中国科学院细胞库（上海）购买了M2E,M4E,TU212和Hep-2的喉癌细胞系;于中国科学院上海斯莱克实验动物有限公司购买6周龄雄性裸鼠及6周龄雄性NOD-SCID小鼠,按照SPF级实验动物饲养标准饲养。购买回来之后在动物房饲养一周以上后方进行实验,动物实验通过中国医科大学实验动物福利与伦理审查会批准。1.收集喉癌临床组织标本,利用Real-time PCR检测miR-552的表达情况,并用统计学方法分析miR-552的表达与临床病理及其他数据的相关性;2.设计构建miR-552过表达及敲减的质粒,包装慢病毒,感染喉癌M4E及Hep-2细胞系建立miR-552特异性过表达及敲减的稳定转染细胞系及其对照细胞系;3.利用miR-552 sponge和miR-552 mimic细胞及其对照细胞,采用CCK8、平板克隆形成、流式细胞周期、EDU免疫荧光等实验方法观察miR-552受干扰后对喉癌细胞体外增殖能力的影响;4.利用Hep-2的miR-552 sponge细胞及其对照细胞进行裸鼠皮下荷瘤实验,并利用免疫组织化学实验检测荷瘤组织中Ki67的表达,观察miR-552对喉癌细胞体内增殖能力的调控;5.利用miR-552 sponge和miR-552 mimic细胞及其对照细胞,采用transwell、invasion实验观察miR-552对喉癌细胞体外迁移及转移能力的调控;6.利用Hep-2的miR-552 sponge细胞及其对照细胞进行裸鼠尾静脉注射建立裸鼠体内肺转移模型实验,检测miR-552对喉癌细胞体内转移能力的调控;7.通过流式细胞仪分选或低粘附培养富集喉癌干细胞,利用Real-time PCR检测miR-552在喉癌干细胞中的表达情况;8.利用miR-552 sponge细胞及其对照细胞进行Real-time PCR实验,检测敲减miR-552后喉癌干细胞表面标志物及相关转录因子的变化;9.利用miR-552 sponge细胞及其对照细胞,进行低粘附成球培养和体外有限稀释实验,检测miR-552对喉癌干细胞自我更新能力及干细胞比例的调控;10.利用M4E的miR-552 sponge细胞及其对照细胞,进行体内有限稀释实验检测miR-552对喉癌干细胞体内成瘤能力的调控;11.通过生物信息学分析预测miR-552的下游分子,并利用经典的生物学技术Real-time PCR、western blot、荧光素酶报告基因和免疫组织化学实验在喉癌细胞、喉癌组织及裸鼠荷瘤组织中进一步验证;12.通过特异性的si RNA沉默miR-552 sponge及对照喉癌细胞中p53的表达,然后进行CCK8、平板克隆形成、transwell、invasion、低粘附成球培养和体外有限稀释等实验,验证miR-552通过p53调控喉癌细胞的进展;13.通过特异性的慢病毒过表达miR-552 sponge及对照喉癌细胞中p53的表达,然后进行CCK8、平板克隆形成、transwell、invasion、低粘附成球培养和体外有限稀释等实验,进一步验证miR-552通过p53调控喉癌细胞的进展。结果:通过一系列体内体外实验我们发现:1.Real-time PCR证实miR-552在喉癌组织中的表达水平显着高于癌旁组织;晚期喉癌组织中其表达水平高于早期喉癌;四种喉癌细胞系中miR-552表达水平均较正常黏膜细胞高;运用统计学方法分析发现miR-552高表达水平的患者更倾向于有低级别的病理分级;2.通过CCK8、平板克隆形成、流式细胞周期、EDU免疫荧光、裸鼠皮下荷瘤、免疫组织化学等实验方法发现,敲减miR-552抑制喉癌细胞的生长,过表达miR-552促进喉癌细胞的生长;3.通过transwell、invasion、裸鼠肺转移等实验发现,敲减miR-552抑制喉癌细胞的迁移及侵袭能力,过表达miR-552促进喉癌细胞的迁移及侵袭能力;4.通过Real-time PCR检测发现miR-552在喉癌干细胞中表达升高;5.通过Real-time PCR、低黏附成球、体外有限稀释及体内有限稀释实验发现,敲减miR-552的表达可下调喉癌干细胞表面标志物CD133,CD44和相关转录因子SOX2,OCT4的表达,抑制喉癌干细胞的自我更新能力,降低喉癌干细胞的比例,抑制喉癌干细胞的动物体内成瘤能力;6.生物信息学分析发现p53是miR-552的下游分子,通过Real-time PCR、western blot和荧光素酶报告基因实验进一步明确miR-552通过靶向p53的3’-UTR调控其表达;对喉癌临床样本及裸鼠荷瘤组织分析发现miR-552与p53的表达呈负相关;7.沉默或过表达p53可以减弱miR-552敲减喉癌细胞及其对照细胞生长、迁移、侵袭及自我更新能力的差异,进一步明确miR-552通过下调p53来调控喉癌细胞的生长、迁移、侵袭及自我更新。结论:根据本研究可得出以下结论:喉癌组织及喉癌细胞中miR-552的表达水平呈升高趋势,肿瘤分期越晚或病理分级越低,患者喉癌组织中miR-552的表达水平越高;在喉癌中,p53可能是miR-552的直接调控靶点;miR-552能够通过下调p53促进喉癌细胞的生长、迁移和侵袭,促进喉癌干细胞的自我更新。我们的结果为喉癌生长、转移及干性的调控提供新的分子机制,为喉癌诊断、治疗和预后判定分子标志物的深入研究奠定理论基础。
钟庆瑶[4]（2020）在《喉癌中HPV16/18感染与RUNX3、TGF-β1蛋白之间的相关性研究》文中提出目的:研究HPV16/18感染、RUNX3、TGF-β1蛋白与喉癌患者临床病理特征的关系,分析喉癌中HPV16/18感染与RUNX3、TGF-β1蛋白之间的相关性,从而探讨其在喉癌发生发展中的作用与机理,有利于针对关键调控分子的靶向干预,对于提高喉癌患者的临床预后具有重要意义。方法:选取2017年1月至2019年12月在遵义医科大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科经临床和病理确诊为喉癌患者83例和声带息肉患者83例,采集信息并收集其喉癌组织、癌旁组织及声带息肉组织石蜡标本。采用PCR扩增和杂交技术结合检测HPV16/18感染,采用免疫组化法检测RUNX3、TGF-β1蛋白的表达。采用c2检验分析HPV16/18、RUNX3、TGF-β1与肿瘤的病理分化程度、TMN分期、临床分期及转移的关系。采用pearson分析喉癌中HPV16/18感染与RUNX3、TGF-β1蛋白表达的相关性。结果:（1）HPV16/18感染在喉癌组织中的阳性率高于癌旁组织及声带息肉组织（c2=6.979,P=0.031）,RUNX3蛋白在喉癌组织中的阳性表达率低于癌旁组织及声带息肉组织（c2=25.784,P<0.001）,TGF-β1蛋白在喉癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织及声带息肉组织（c2=17.393,P<0.001）。（2）（1）组织学分级:HPV16/18在低分化喉癌组织中的阳性率高于高-中分化喉癌组织中的阳性率（c2=9.795,P=0.002）;RUNX3蛋白在低分化喉癌组织中的阳性表达率低于高-中分化喉癌组织中的阳性表达率（c2=4.806,P=0.028）;TGF-β1蛋白在低分化喉癌组织中的阳性表达率高于高-中分化喉癌组织中的阳性表达率（c2=5.761,P=0.016）。（2）TNM分期:HPV16/18在T3+T4期喉癌组织中的阳性率高于T1+T2期喉癌组织中的阳性率（c2=6.330,P=0.012）;RUNX3蛋白在T3+T4期喉癌组织中的阳性表达率低于T1+T2期喉癌组织中的阳性表达率（c2=10.147,P=0.001）;TGF-β1蛋白在T3+T4期喉癌组织中的阳性表达率高于T1+T2期喉癌组织中的阳性表达率（c2=7.585,P=0.006）。（3）临床分期:HPV16/18在晚期（Ⅲ+Ⅳ）喉癌组织中的阳性率高于早期（Ⅰ+Ⅱ）喉癌组织中的阳性率（c2=5.354,P=0.021）;RUNX3蛋白在晚期（Ⅲ+Ⅳ）喉癌组织中的阳性表达率低于早期（Ⅰ+Ⅱ）喉癌组织中的阳性表达率（c2=7.357,P=0.007）;TGF-β1蛋白在晚期（Ⅲ+Ⅳ）喉癌组织中的阳性表达率高于早期（Ⅰ+Ⅱ）喉癌组织中的阳性表达率（c2=7.290,P=0.007）。（4）转移:HPV16/18在发生转移的喉癌组织中的阳性率高于未发生转移的喉癌组织中的阳性率（c2=5.650,P=0.017）;RUNX3蛋白在发生转移喉癌组织中的阳性表达率低于未发生转移喉癌组织中的阳性表达率（c2=5.043,P=0.025）;TGF-β1蛋白在发生转移喉癌组织中的阳性表达率高于未发生转移喉癌组织中的阳性表达率（c2=5.808,P=0.016）。（3）HPV16/18感染和RUNX3蛋白表达之间为负相关（c2=7.767,r=-0.306,P=0.005）,HPV16/18感染和TGF-β1蛋白表达之间为正相关（c2=4.073,r=0.222,P=0.044）。结论:1.喉癌组织中HPV16/18的感染率高于癌旁组织及声带息肉组织。相较于HPV16/18感染的阴性喉癌,HPV16/18感染的阳性喉癌的组织病理学分化较差、临床分期较晚、转移率较高。2.喉癌组织中RUNX3蛋白阳性表达率低于癌旁组织及声带息肉组织,而TGF-β1蛋白阳性表达率高于癌旁组织及声带息肉组织。RUNX3蛋白在低分化喉癌组织、晚期喉癌组织以及有转移喉癌组织中的阳性表达率较低,而TGF-β1蛋白在低分化喉癌组织、晚期喉癌组织以及有转移喉癌组织中的阳性表达率较高。3.HPV16/18感染与RUNX3蛋白阳性表达负相关,HPV16/18感染与TGF-β1蛋白阳性表达正相关,提示RUNX3蛋白的低表达、TGF-β1蛋白的高表达可能与HPV16/18阳性喉癌的组织病理学分化差、临床分期晚、转移率高等临床特性有关,但仍待基础实验进一步验证。
刘昶[5]（2020）在《三种天然产物的抗喉癌活性及分子机制研究》文中认为喉癌作为头颈部最普遍的恶性肿瘤之一,其致死率在头颈部肿瘤中排名第三。喉癌的治疗手段在过去的几年里发生了很大的改变。尽管其治疗已经取得了突破性的进展,但在过去20年中,预后并没有显着的改善。为了更深入的了解和增加原发性喉癌的治疗效果和生存率,深层次的了解喉癌的发生机制起到了关键的作用。天然产物是具有不同生物活性的各种结构新化合物的重要来源,作为化疗使用的天然产物具有高效低毒的特点,为肿瘤的治疗提供了更多的可能,具有很高的开发利用价值。因此,从天然资源中寻找新的抗喉癌药物是可行的,可以满足化疗发展的医疗需求。本论文采用MTT法筛选出天然产物中的活性成分,发现其中柯里拉京（Corilagin）、Aspernolide A和Ozoroalide均显示出较好的抑制喉癌活性;运用形态学观察和流式细胞术等技术进行更加的深入研究;采用免疫印迹法进一步确定作用于喉癌细胞的活性成分的特异性信号途径和靶点,并选择活体动物实验进一步验证其体外实验活性和机制,为更有效地寻找和开发抗癌中药提供了新的手段。本文的主要研究结果如下所示:1.柯里拉京的抗喉癌活性及其作用机制研究天然没食子酸衍生物柯里拉京是从“药食同源”的余甘子成熟果实（Phmllanthi Fructus）中分离得到的。细胞活力测定实验结果表明,柯里拉京对喉癌Hep-2和TU212细胞具有明显的体外抗喉癌作用,并且对人支气管上皮样细胞株HBE毒性不明显。进一步的实验表明,柯里拉京以浓度依赖性的方式抑制喉癌细胞Hep-2和TU212的增殖和迁移,并且抑制裸鼠中喉癌移植肿瘤的生长,且没有明显的毒性迹象。研究了柯里拉京的抗喉癌机制后的结果表明,柯里拉京可以通过上调Bax、cleaved Caspase-9和Caspase-3的表达以及下调Bcl-2的表达激活线粒体凋亡通路;柯里拉京可以通过上调cleaved Caspase-12和Caspase-7的表达以及下调GRP78的表达激活内质网应激信号通路;柯里拉京可以通过下调p-Akt、p-GSK-3和p-Bad的表达抑制Akt通路;柯里拉京可以通过下调p-STAT3的表达抑制STAT3通路,从而抑制人喉癌的增殖。2.Aspernolide A的抗喉癌活性及其作用机制研究从喜树根内生真菌枝孢样枝孢霉（Cladosporium cladosporioides）中分离纯化出一种丁内酯次级代谢产物aspernolide A。药理实验结果表明,aspernolide A能明显抑制Hep-2和TU212细胞的生长、迁移和集落成群,且呈浓度和时间依赖性。Bax、cleaved Caspase-9、Caspase-3和PARP的表达随着剂量的增加而增加,而Bcl-2的表达下降,提示凋亡机制可能与线粒体凋亡途径有关。并且,随着剂量的增加,磷酸化的STAT3表达降低,提示其凋亡机制可能与STAT3信号通路有关。这些结论表明aspernolide A具有潜在的抗喉癌作用。3.Ozoroalide的抗喉癌活性及其作用机制研究从草龙（Ludwigia hyssopifolia）中提取分离得到化合物ozoroalide,其对人喉癌细胞株具有细胞毒性,并且对人胚胎肾细胞株HEK293没有明显毒性。倒置显微镜下可观察到Hep-2凋亡细胞的形态变化,如边缘不规则、粘附能力降低、染色质浓缩等。流式细胞仪和荧光显微镜下,经过Annexin V-FITC/PI染色后,可以发现ozoroalide以剂量依赖性的方式诱导Hep-2细胞凋亡。通过对ozoroalide进一步检测,发现其通过影响凋亡相关蛋白Caspase-3对Hep-2细胞株的癌细胞生长具有剂量依赖性的抑制作用。上述研究结果表明柯里拉京、aspernolide A和ozoroalide均有一定的抗喉癌活性。MTT法为寻找新的抗喉癌药物提供简捷的方法;Western blot法能快速检测抗喉癌信号通路;同时,体外细胞实验与体内动物实验的有益结合,能很好的相互验证抗喉癌活性。
高冬雪[6]（2019）在《GOLIM4在人头颈部癌中的表达及其机制的研究》文中提出目的:探讨GOLIM4（高尔基体整合膜蛋白4）在人头颈癌细胞中的表达,及其对人头颈癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:1.培养下咽鳞癌FaDu细胞和舌鳞癌Tca-8113细胞,根据实验目的对其进行相应的慢病毒感染,两种细胞中加候选基因shRNA慢病毒感染的细胞组是实验组,经sh-Ctrl阴性对照慢病毒感染的细胞组是对照组。2.通过高内涵筛选法选出阳性基因,并使用Celigo实验测试候选基因（包括GOLIM4）敲减后对FaDu细胞生长的影响,及GOLIM4敲减后对Tca-8113细胞生长的影响。3.利用Real time PCR和Western blot检测基因在mRNA和蛋白水平的慢病毒感染效率。4.使用PI染色后FACS分析检测GOLIM4敲减后FaDu细胞和Tca-8113细胞的细胞周期变化。5.进一步应用BrdU实验来测试GOLIM4敲减后对两种细胞S期细胞数量的影响。6.最后使用Annexin V染色后FACS分析检测GOLIM4敲减后对两种细胞凋亡的影响。7.应用SPSS 16.0软件进行统计学分析。结果:1.GOLIM4为筛选出的增殖相关的阳性基因,根据Celigo实验数据分析显示,从第4天起,在两种细胞中shGOLIM4组的活性细胞比shCtrl组的低,活性细胞数量显着下降（P<0.001）,证明GOLIM4可以维持细胞增殖活性,GOLIM4的低表达可以抑制人头颈癌细胞的生长。2.细胞在被慢病毒感染后,利用Real time PCR检测出,在FaDu细胞中shCtrl组的表达量为1.000±0.038,shGOLIM4组的表达量为0.180±0.000,表明GOLIM4基因在mRNA水平的表达量受到抑制（P<0.01）,敲减效率达到82.0%;Tca-8113细胞中,shCtrl组的表达量为1.010±0.179,shGOLIM4组的表达量为0.431±0.051,表明GOLIM4基因在mRNA水平的表达量受到抑制（P<0.01）,敲减效率达到56.9%;利用Western blot实验检测出,在FaDu细胞和Tca-8113细胞中shGOLIM4组的GOLIM4基因在蛋白水平的表达均显着受到抑制（P<0.001）。3.使用PI染色后FACS分析发现,GOLIM4敲减后,在FaDu细胞中shCtrl组与shGOLIM4组G2/M期的细胞百分比分别为15.45±0.382和10.51±0.1665,在Tca-8113细胞中shCtrl组与shGOLIM4组G2/M期的细胞百分比分别为19.88±0.3214和10.77±0.4325,两种细胞的实验组G2期细胞数量均减少（P<0.01）。4.应用BrdU实验发现在FaDu细胞中,shCtrl组与shGOLIM4组day4的增殖倍数分别为1.412±0.007和1.076±0.059,在Tca-8113细胞中,shCtrl组与shGOLIM4组day4的增殖倍数分别为2.805±0.044和1.707±0.027,即敲减GOLIM4可以显着减少两种细胞S期细胞的数量（P<0.01）。5.使用Annexin V染色后FACS分析发现在FaDu细胞中shCtrl组与shGOLIM4组凋亡率分别是4.45±0.1684和17.97±0.4258,在Tca-8113细胞中shCtrl组与shGOLIM4组凋亡率分别是4.23±0.275和10.43±0.4965,两种细胞的shGOLIM4组的细胞凋亡率均显着增加（P<0.01）。结论:GOLIM4的低表达可以抑制人头颈癌细胞的生长,提示GOLIM4可能具有促肿瘤作用,为人头颈癌的靶向治疗提供了新的靶点。
孙朋[7]（2019）在《MicroRNA-1225-5p在喉癌中的功能及机制研究》文中研究表明目的:本研究旨在探讨microRNA-1225-5p（miR-1225-5p）在喉癌（LC）中的作用及机制。方法:通过qPCR分析收集的20例喉癌患者样本miR-1225-5p表达情况。使用miR-1225-mimic 和 miR-1225 inhibitor 对 Hep-2 细胞进行 miR-1225-5p 的过表达和干扰实验,并使用MTT法检测miR-1225-5p对于细胞增殖的影响,使用克隆增殖实验检测不同组克隆形成数,使用BrdU免疫荧光法检测细胞增殖活力,采用流式细胞仪（FC）检测miR-1225-5p在Hep-2细胞周期进展中的作用,Hoechst 33342染色实验和AnnexinV-FITC/PI FC 检测 miR-1225-5p 对于 Hep-2 细胞凋亡的影响,qPCR 及 western blot检测Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达水平变化,western blot检测Caspase-3蛋白变化;生物信息学方法寻找miR-1225-5p的靶标基因,并确定CDC14B为潜在靶标。荧光素酶报告基因检测miR-1225-5p与CDC14B 3’ UTR相互作用,qPCR及western blot检测CDC14B在Hep-2细胞及对照骨肉瘤U20S细胞中的表达水平;过表达及干扰miR-1225-5p情况下,qPCR及western blot检测CDC14B mRNA及蛋白表达变化,用于证明miR-1225-5p对CDC14B的调控作用;CDC14B干扰载体与miR-1225 inhibitor共转染、CDC14B过表达载体与miR-1225mimic在Hep-2细胞中共转染后,观察CDC14B表达水平逆转后,细胞水平恶性表型变化,westem blot检测CDC14B蛋白表达水平变化,MTT检测细胞增殖能力变化,采用流式细胞仪（FC）检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果:人喉癌样本中miR-1225-5p表达水平低于癌旁组织,喉癌细胞中miR-1225-5p表达水平显着低于U20S;miR-1225-5p过表达导致Hep-2细胞增殖能力下降,抑制miR-1225-5p促进Hep-2细胞增殖;miR-1225-5p过表达可提高Hep-2细胞在G0/G1期的比例,降低G2/M期细胞的百分率,反之亦然;Hoechst 33342染色和Annexin V-FITC/PI FC均显示,在过表达miR-1225-5p情况下,Hep-2凋亡细胞数量显着提高;提高miR-1225-5p情况下,Bcl-2表达降低,Bax表达升高,抑制miR-1225-5p,Bcl-2表达升高,Bax表达降低;提高miR-1225-5p情况下,活性caspase3表达升高,抑制miR-1225-5p,活性caspase3表达降低。生物信息学及荧光素酶报告基因分析提示,喉癌细胞Hep-2中,miR-1225-5p与CDC14B 3’UTR区能够结合并调控CDC14B的表达水平,CDC14B可能是喉癌中miR-1225-5p调控细胞恶性表型的潜在靶点;miR-1225-5p过表达及抑制后,Western blot及qPCR实验证实,miR-1225-5p过表达可抑制CDC14B表达水平,而miR-1225-5p干扰可上调CDC14B表达水平;CDC14B干扰载体与miR-1225 inhibitor共转染、CDC14B过表达载体与miR-1225mimic在Hep-2细胞中共转染实验证实,受miR-1225-5p调控的CDC14B表达的改变可以逆转喉癌细胞的增殖、细胞周期改变及细胞凋亡。结论:miR-1225-5p在喉癌标本中表达水平较低,提示miR-1225-5p可能在喉癌的恶性表型中发挥重要作用。增强miR-1225-5p的表达可以使喉癌细胞的增殖和生存受损,导致细胞分裂停滞在G1/S期;相反,抑制miR-1225-5p的表达促进了细胞的增殖及生存。因此miR-1225-5p导致喉癌细胞G1/S期周期阻滞,增加细胞凋亡率。miR-1225-5p可靶向作用于CDC14B 3’ UTR。抑制CDC14B的表达可逆转miR-1225-5p对喉癌细胞的抑制作用。本研究为miR-1225-5p在喉癌发展中的作用提供了直接证据,并初步探讨了 miR-1225-5p在喉癌发展中的机制。
马长宏[8]（2019）在《染料木黄酮调控miRNA-1469发挥促喉癌细胞凋亡作用的分子生物学机制研究》文中研究说明目的:喉癌是常见的头颈部恶性肿瘤,其中96-98%以上是喉鳞状细胞癌。喉癌具有较强的侵袭与转移性,尽管目前针对喉癌的手术、放化疗以及靶向治疗技术明显进步,但其五年生存率仍约为60.9%,较过去无明显提高。为了提高喉癌患者的生存率,目前寻找治疗喉癌新的治疗靶点和治疗手段有重要意义。染料木黄酮属于大豆异黄酮复合物,它可以通过多种分子生物学机制发挥抗肿瘤作用,包括丝裂原活化蛋白激酶MAPK,Akt以及JAK/STAT等。之前的研究显示,染料木黄酮可以抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,然而其抑制喉癌细胞的分子生物学机制仍未见研究报道。MicroRNAs是内源性的小分子非编码RNA,它通过序列特异性来调控基因的表达。这种调控主要是通过与靶基因mRNA的3’端非编码区域结合从而降解mRNA或者抑制mRNA的翻译。研究显示,染料木黄酮可以调控多种肿瘤细胞内miRNA的表达,但是在喉癌细胞中,染料木黄酮对miRNA表达的影响尚未见研究报道。P53基因人类发现的最重要的抑癌基因之一,它可以通过细胞周期阻滞、衰老和促凋亡来抑制肿瘤的发生。研究显示染料木黄酮可以通过抑制P53蛋白的泛素化,上调其在乳腺癌细胞、非小细胞肺癌细胞及宫颈癌细胞中的表达水平,进而发挥抑制肿瘤的作用。而另一方面,研究显示P53蛋白则可以在转录水平和转录后加工水平调控部分miRNA的表达,然而染料木黄酮调控miRNA的表达是否与P53蛋白的作用有关目前未见研究报道。本实验分为三个部分,第一部分为检测喉癌细胞中表达水平受染料木黄酮影响的miRNAs,第二部分研究染料木黄酮调控目标miRNA表达发挥促喉癌细胞凋亡作用的下游靶基因,第三部分研究染料木黄酮上调miRNA表达的分子生物学机制。本实验目的为明确染料木黄酮调控喉癌细胞内miRNA表达的机制,从而阐明染料木黄酮调控miRNA发挥促进喉癌细胞凋亡作用的分子生物学机制,为临床应用染料木黄酮作为抗喉癌治疗药物提供理论与实验依据。研究方法:采用基因芯片分析,检测经染料木黄酮处理后的喉癌细胞中miRNAs表达情况,筛选出表达明显受染料木黄酮影响的miRNA,并检测其对染料木黄酮促凋亡作用的影响。通过基因预测软件TargetScan预测miR-1469的靶基因,并通过westernblot、双荧光素酶基因报告、靶蛋白挽救实验明确其靶向调控关系,最后研究染料木黄酮上调miR-1469表达是否与P53蛋白的作用有关。第一部分:1.通过流式细胞仪检测染料木黄酮对喉癌细胞凋亡的影响。2.将TU212细胞用染料木黄酮处理48h后行芯片分析显示,筛选表达水平明显受染影响的miRNA。3.Real-timePCR证实芯片分析结果。4.建立miR-1469低表达喉癌细胞系,westernblot及流式细胞仪检测染料木黄酮对其凋亡的影响。第二部分:1.通过miRNA靶基因预测软件对miR-1469的靶基因进行预测。2.建立miRNA-1469低表达喉癌细胞系,Westernblot检测染料木黄酮对其Mcl1和Bcl2表达的影响。3.建立miRNA-1469过表达喉癌细胞系,Westernblot检测其Mcl1和Bcl2的表达水平。4.双荧光素酶报告实验明确miR-1469与靶基因的调控关系。5.Westernblot检测染料木黄酮对Mcl1过表达喉癌细胞凋亡的影响。6.Westernblot检测染料木黄酮对miRNA-1469和Mcl1双低表达喉癌细胞凋亡的影响。第三部分:1.Westernblot检测染料木黄酮对喉癌细胞内P53蛋白表达的影响。2.Real-timePCR法检测染料木黄酮对P53低表达喉癌细胞中miR-1469的影响。3.Westernblot检测染料木黄酮对P53低表达喉癌细胞凋亡的影响。4.Westernblot检测染料木黄酮对P53过表达喉癌细胞凋亡的影响。5.Westernblot检测染料木黄酮对P53低表达、miRNA-1469过表达的喉癌细胞的凋亡的影响。6.Westernblot检测染料木黄酮对P53和Mcl1双低表达的喉癌细胞的凋亡的影响。结果:第一部分1.流式细胞仪检测细胞凋亡情况,结果显示随着genistein作用时间的延长,Hep-2与TU212细胞的凋亡率逐渐增加（P<0.05）。2.基因芯片分析显示经染料木黄酮处理后TU212细胞中miRNA-1469表达水平明显上调。3.Real-timePCR检测结果显示,结果显示随着genistein作用时间的延长,Hep-2与TU212细胞中miR-1469的表达水平逐步增加（P<0.05）。4.Westernblot检测显示,与对照组相比,miR-1469低表达的Hep-2及TU212细胞经染料木黄酮处理后,喉癌细胞凋亡水平明显下降。5.流式细胞仪检测细胞凋亡显示,与对照组相比,miR-1469低表达的TU212细胞经染料木黄酮处理后,细胞凋亡率显着下降（P<0.05）。第二部分1.通过miRNA靶基因预测软件TargetScan,我们预测到miR-1469与凋亡抑制基因Bcl2和Mcl1的3’-UTR可能存在结合位点。2.Westernblot检测显示,染料木黄酮可以下调喉癌细胞中Mcl1和Bcl2蛋白的表达,而下调细胞中miR-1469的表达后,Mcl1表达升高,而Bcl2表达仍降低。3.Westernblot检测显示,miR-1469过表达后,与对照组相比,Mcl1蛋白表达降低,而Bcl2蛋白表达无明显改变。4.双荧光素酶报告显示,miR-1469可以与Mcl1的3’-UTR结合。5.Westernblot检测显示,经染料木黄酮处理后,转染空白质粒的Hep2细胞与TU212细胞的凋亡水平升高,而转染Mcl1过表达质粒的Hep2细胞与TU212细胞的凋亡水平降低。6.Westernblot检测显示,经染料木黄酮处理后,与空转对照组相比,单转miR-1469inhibitor组PARP剪切蛋白表达降低,说明其凋亡被抑制,而双转miR-1469inhibitor+Mcl1shRNA组喉癌细胞凋亡水平再次升高。第三部分1.Westernblot检测显示随着染料木黄酮作用时间的延长,喉癌细胞系中P53表达增加。2.Real-timePCR检测显示,与对照组相比,P53低表达TU212和Hep2细胞经染料木黄酮处理后,miR-1469表达水平明显降低（P<0.05）。3.Westernblot检测显示,与空转对照组相比,P53低表达的TU212细胞和Hep2细胞经染料木黄酮处理后,喉癌细胞凋亡水平明显降低。4.Westernblot检测显示,经染料木黄酮处理后,与空转对照组相比,转染P53过表达质粒的TU212细胞和Hep2细胞中喉癌细胞凋亡水平升高。5.Westernblot检测显示,经染料木黄酮处理后,与空转对照组相比,单转P53shRNA组喉癌细胞凋亡水平降低,而双转miR-1469mimic+P53shRNA组细胞凋亡水平再次升高。6.Westernblot检测显示,经染料木黄酮处理后,与空转对照组相比,单转P53shRNA组的细胞凋亡水平降低,而双转Mcl1shRNA+P53shRNA组的凋亡水平再次升高。结论:1.染料木黄酮可以上调喉癌细胞中miR-1469的表达。2.miR-1469对喉癌细胞具有促凋亡作用,染料木黄酮通过上调miR-1469表达促进喉癌细胞的凋亡。3.Mcl1是miR-1469的下游靶基因。4.染料木黄酮通过上调miR-1469表达,进而下调Mcl1表达,发挥促进喉癌细胞凋亡作用。5.染料木黄酮可以通过上调P53表达进而上调miR-1469表达。6.染料木黄酮通过上调P53表达进而上调miR-1469的表达,miR-1469通过抑制其下游靶基因Mcl1的表达,从而发挥促进喉癌细胞凋亡的作用。
陈倩倩[9]（2018）在《不同生存期喉癌患者的18F-FDG PET/CT SUVmax值的变化与SET8蛋白表达的相关性研究》文中指出目的:本研究通过对术前喉癌患者18F-FDG PET/CT影像结果的分析,计算肿瘤病灶的SUVmax值,并检测术后喉癌病理组织中SET8及野生型p53蛋白的表达情况,探讨喉癌患者18F-FDG PET/CT SUVmax值与SET8、野生型p53蛋白表达之间的关系及对生存期的影响;并通过建立人喉癌细胞模型探讨SET8基因对喉癌细胞的增殖、凋亡及侵袭转移等作用的影响。方法:选取我院耳鼻喉科确诊为喉癌拟行手术患者25例,术前均未接受放、化疗及靶向治疗;术前一周内行18F-FDG PET/CT检查并记录肿瘤病灶SUVmax值;术后病理组织通过免疫组化方法检测喉癌组织SET8和野生型p53蛋白的表达情况,并对术后患者规范治疗后进行定期随访,分析SUVmax与术后病理SET8、野生型p53蛋白表达的关系及对生存期的影响。构建人喉癌细胞系（TU212）,并通过慢病毒感染,将小干扰RNA（sh RNA）转入喉癌TU212细胞,构建下调SET8基因表达的稳定sh-SET8-TU212细胞系;采用细胞划痕修复实验检测SET8基因对TU212细胞的迁移能力的影响;通过Brd U细胞增殖实验检测SET8基因对TU212细胞增殖能力的影响;采用流式细胞术观察下调SET8基因后TU212细胞凋亡的变化;最后通过Western blot技术观察下调SET8基因后细胞内野生型p53蛋白表达变化。结果:我院耳鼻喉科确诊喉癌手术患者25例,其中男性患者21例,女性患者4例,平均年龄59.6岁,术前均未接受放、化疗及靶向治疗并行FDG PET/CT检查,临床分期按照AJCC-2010标准分期系统:Ⅰ期患者3人,Ⅱ期患者10人,Ⅲ期患者5人,Ⅳ期患者7人;全部患者根据NCCN指南进行手术治疗及术后放化疗,术后病理类型全部为鳞状细胞癌,并按照肿瘤细胞分化程度进行病理学分级:高分化鳞状细胞癌G1期,中分化鳞状细胞癌G2期及低分化鳞状细胞癌G3期;其中G1期患者8人,G2期患者9人,G3期患者8人;所有患者中位生存时间25个月,生存率56%。SUVmax、SET8、野生型p53蛋白表达均与患者性别、年龄、原发部位、治疗方式无关,而与临床分期及肿瘤病理分级相关,统计有差异（P<0.05）;且总生存率与患者性别、年龄、原发部位、治疗方式也无相关性。SET8蛋白在喉癌组织中表达具有显着增加,差异有统计学意义（P<0.01）,肿瘤分化程度越低,SET8蛋白表达量越高;通过计算喉癌细胞野生型p53蛋白相对表达量可以看到,喉癌细胞组野生型p53蛋白表达总量较正常喉癌细胞明显减少（P<0.01）,差异有统计学意义;SUVmax与肿瘤病理分级的关系:与高分化G1期SUVmax的平均值7.76相比,中分化G2、低分化G3期SUVmax的平均值分别为11.67、15.21,均有显着性增加（P<0.01）;低分化G3期SUVmax平均值也显着高于中分化G2期SUVmax平均值（P<0.05）;从SUVmax、SET8、野生型p53蛋白表达三者之间的关系可以看出:SET8与SUVmax呈正性相关（P<0.01）,而与野生型p53呈负性相关（P<0.01）,统计学有意义。在生存分析中:早期喉癌（临床Ⅰ+Ⅱ期）生存率为84.6%,而局部晚期喉癌（临床Ⅲ+Ⅳ期）生存率仅为25%。二者差异有意义（p<0.01）;将患者按照肿瘤细胞分化程度不同分为两组,高分化鳞状细胞癌（G1期）为一组,另一组为中低分化鳞状细胞癌（G2、G3期）,病理高分化喉癌生存率为87.5%,病理中低分化喉癌生存率为41.2%（p<0.05）;将SUVmax平均值11.6为临界点,SUVmax<11.6的生存率75.0%较SUVmax≥11.6的生存率22.2%高（p<0.05）;将SET8蛋白表达情况按照低表达（阴性、+）和高表达（++、+++）分为2组,其低表达组生存率为75%,而高表达组生存率为22.2%,统计有差异,（P<0.05）;将野生型p53蛋白表达情况按照低表达（阴性、+）和高表达（++、+++）分为2组,其低表达组生存率为33.4%,而高表达组生存率为90%,统计有差异,（P<0.05）。通过检测SET8基因在喉癌细胞水平结果显示:经过慢病毒转染后的细胞,Western blot检测结果显示:与阴性对照组sh Control组比较,sh SETD8细胞内SETD8表达水平显着降低（P<0.01）;Brd U细胞增殖检测下调SET8后的TU212细胞增殖能力的变化。与阴性对照组shcontrol比较,下调SETD8后,喉癌TU212 S期细胞百分率从1.81降低至0.77,差异有统计学意义（P<0.01）;划痕实验中,SET8基因下调后的喉癌细胞的迁移距离较对照组的迁移距离分别为:6小时0.015毫米vs 0.25毫米;12小时0.05毫米vs 0.485毫米、24小时0.085毫米vs 0.63毫米明显减少（P<0.01）;经过流式细胞仪检测细胞凋亡:阴性对照组sh Control凋亡率分别为:24小时2.93%、48小时5.07%;sh SETD8组细胞凋亡率,24小时15.2%和48小时13.1%均明显增高（P<0.01）;Western blot方法检测野生型p53蛋白表达发现,与阴性对照组sh Control组比较,sh SETD8细胞内p53表达处于高水（P<0.01）。结论:SET8可作为患者术后对于肿瘤预后的评估指标,其蛋白高表达提示喉癌预后较差;SET8基因通过调控喉癌细胞的增殖、迁移及凋亡而影响喉癌的转归;SET8蛋白表达与SUVmax值密切相关,SUVmax可以作为患者术前预测肿瘤预后的有效指标,高SUVmax值提示喉癌预后不良。
凌航,廖前进,钟外生,崔捷,王季轩,陈杰[10]（2015）在《p53、p73与生存素及caspase-7蛋白酶在喉癌组织中的表达及临床意义》文中认为目的探讨p53、p73、生存素（survivin）及caspase7蛋白酶在喉癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化（SP法）检测49例喉癌组织和42例喉正常组织中突变型p53、p73、survivin及caspase-7蛋白的表达水平,并分析其与喉癌临床病理参数和预后的关系。结果突变型p53、p73、survivin及caspase-7蛋白在喉癌组织中有较高阳性表达率,分别为71.4%、87.8%、91.8%、95.9%,而在喉正常组织中其阳性表达率明显降低（P<0.05）,分别为21.4%、23.8%、76.2%、47.6%。四种蛋白表达与喉癌临床病理参数和预后分析显示,突变型p53、p73蛋白表达随着喉癌临床分期的演进而增加,且喉癌中有淋巴结转移的p53、p73蛋白表达显着高于无淋巴结转移组（P<0.05）,p73蛋白表达还与喉癌病理分级和临床不良预后密切相关（P<0.05）;survivin蛋白表达与喉癌临床分期和病理分级相关（P<0.05）;caspase-7蛋白高表达患者,其病理分级和预后较好（P<0.05）。相关性分析发现喉癌组织中Survivin蛋白表达分别与p73（r=0.372,P<0.01）、caspase-7（r=0.476,P<0.01）蛋白表达呈正相关。结论突变型p53、p73、survivin及caspase-7蛋白在喉癌组织中均存在高表达,Survivin蛋白表达分别与p73、caspase-7蛋白表达正相关,p73、survivin、caspase-7蛋白表达均与患者临床预后有关,可成为喉癌治疗、预后判断的潜在生物学指标。
二、P53蛋白在喉癌细胞中的表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、P53蛋白在喉癌细胞中的表达（论文提纲范文）
（1）喉高分化鳞状细胞癌临床特征与治疗策略初步探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 喉癌的病理与临床特征 |
| 2.1 喉的临床解剖概述 |
| 2.2 喉癌的病理类型 |
| 2.3 喉癌的临床特征 |
| 2.4 喉癌的治疗概述 |
| 第三章 临床资料与方法 |
| 3.1 临床资料 |
| 3.2 治疗方式 |
| 3.3 随访和统计方法 |
| 第四章 结果 |
| 4.1 首诊病史 |
| 4.2 生存分析 |
| 4.3 术后复发率 |
| 第五章 讨论 |
| 5.1 HDLSCC的临床流行病学 |
| 5.2 HDLSCC的病程演进 |
| 5.3 HDLSCC的侵袭与扩散 |
| 5.4 HDLSCC的生存分析 |
| 5.5 HDLSCC的临床与分子病理 |
| 5.6 HDLSCC与辅助放化疗 |
| 5.7 HDLSCC与单纯手术治疗 |
| 5.8 HDLSCC的治疗策略 |
| 第六章 结论 |
| 第七章 存在问题与未来展望 |
| 7.1 存在问题 |
| 7.2 展望未来 |
| 参考文献 |
| 综述 喉高分化鳞状细胞癌的研究近况 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）HTR7致喉鳞状细胞癌患者不良预后的相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 背景与前言 |
| 第一章 喉鳞癌组织标本中HTR7的表达情况及与患者预后的相关性分析 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二章 HTR7调控喉癌细胞增殖的体内及体外实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2.结果 |
| 3 讨论 |
| 第三章 HTR7调控喉癌细胞增殖的机制研究 |
| 1.主要仪器和试剂 |
| 2.方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 本文结论 |
| 本文不足及展望 |
| 参考文献 |
| 附录1 中英文对照缩略词 |
| 附录2 实验所用仪器和器皿 |
| 附录3 实验所用试剂和耗材 |
| 附录4 主要溶液配制 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及主持的科研项目 |
| 致谢 |
（3）miR-552通过靶向p53调控喉癌细胞生长、转移和干性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 细胞 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 化学和生物试剂 |
| 2.1.4 抗体 |
| 2.1.5 引物 |
| 2.1.6 病毒、质粒以及寡聚核糖核酸 |
| 2.1.7 喉癌组织样本 |
| 2.1.8 主要缓冲液 |
| 2.2 主要仪器设备 |
| 2.2.1 实验装置 |
| 2.2.2 测量软件 |
| 2.2.3 统计学分析软件 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞培养 |
| 2.3.2 构建稳定细胞株 |
| 2.3.3 抽提总RNA |
| 2.3.4 逆转录 PCR(Reverse-Transcription PCR) |
| 2.3.5 实时荧光定量 PCR(Real-Time PCR) |
| 2.3.6 细胞增殖实验 |
| 2.3.7 流式细胞仪分选(Flow Cytometry, FCM) |
| 2.3.8 流式细胞仪检测细胞周期 |
| 2.3.9 细胞低粘附成球培养 |
| 2.3.10 体外有限稀释实验 |
| 2.3.11 体内有限稀释实验 |
| 2.3.12 细胞迁移和侵袭实验 |
| 2.3.13 荧光素酶报告基因检测 |
| 2.3.14 蛋白质电泳(Western blot) |
| 2.3.15 siRNA干扰实验 |
| 2.3.16 异种移植瘤形成实验 |
| 2.3.17 裸鼠尾静脉注射肺转移模型实验 |
| 2.3.18 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 miR-552 在喉癌组织和细胞中表达上调 |
| 3.2 miR-552 促进喉癌细胞增殖 |
| 3.3 miR-552 促进喉癌细胞迁移和侵袭 |
| 3.4 miR-552 促进喉癌干细胞的自我更新和体内成瘤 |
| 3.5 miR-552 在喉癌细胞中直接靶向调控p53 的表达 |
| 3.6 p53 沉默可减弱miR-552 敲减喉癌细胞与其对照喉癌细胞生长、转移和自我更新能力的差异 |
| 3.7 p53 过表达可减弱miR-552 敲减喉癌细胞与其对照喉癌细胞生长、转移和自我更新能力的差异 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 肿瘤中 miRNAs 表达失调机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 1 略缩词表 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）喉癌中HPV16/18感染与RUNX3、TGF-β1蛋白之间的相关性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）三种天然产物的抗喉癌活性及分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写索引 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 喉癌简述 |
| 1.1.1 喉癌的病因 |
| 1.1.2 喉癌的诊断 |
| 1.1.3 喉癌的治疗 |
| 1.2 天然产物治疗喉癌的研究进展 |
| 1.3 喉癌与凋亡相关蛋白的研究进展 |
| 1.4 天然产物治疗喉癌的信号通路简述 |
| 1.5 天然产物的抗喉癌意义及展望 |
| 第二章 柯里拉京的抗喉癌活性及其作用机制研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 仪器与试剂 |
| 2.2.1 试验用细胞株 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 柯里拉京的制备 |
| 2.3.2 细胞活力测定及形态学变化 |
| 2.3.3 细胞划痕实验 |
| 2.3.4 Western blot |
| 2.3.5 体内实验 |
| 2.3.6 Hoechst33258 染色实验 |
| 2.3.7 流式细胞术(FACS) |
| 2.3.8 统计分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 柯里拉京对喉癌细胞生长及迁移的抑制作用 |
| 2.4.2 柯里拉京对Hep-2裸鼠移植瘤的抑制作用 |
| 2.4.3 柯里拉京诱导喉癌凋亡的体内外研究 |
| 2.4.4 柯里拉京对内质网应激相关蛋白的体内外抑制作用 |
| 2.4.5 柯里拉京抑制蛋白Akt和 STAT3 的体内外活性 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 Aspernolide A的抗喉癌活性及其作用机制研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 仪器与试剂 |
| 3.2.1 试验用细胞株 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 实验试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 细胞活力测定及细胞凋亡的形态学观察 |
| 3.3.2 细胞划痕实验及集落形成实验 |
| 3.3.3 流式细胞术(FACS) |
| 3.3.4 Western blot |
| 3.3.5 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 Aspernolide A对喉癌细胞活力的影响 |
| 3.4.2 Aspernolide A对喉癌细胞迁移和集落形成的影响 |
| 3.4.3 Aspernolide A对喉癌细胞形态变化及凋亡的影响 |
| 3.4.4 Aspernolide A对喉癌细胞线粒体凋亡途径的影响 |
| 3.4.5 Aspernolide A对喉癌细胞STAT3 信号通路的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 Ozoroalide的抗喉癌活性及其作用机制研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 仪器与试剂 |
| 4.2.1 试验用细胞株 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 实验试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞活力测定及细胞凋亡的形态学观察 |
| 4.3.2 流式细胞术(FACS) |
| 4.3.3 Western blot |
| 4.3.4 统计分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 Ozoroalide对喉癌细胞活力的影响 |
| 4.4.2 Ozoroalide对喉癌Hep-2 细胞形态变化的影响 |
| 4.4.3 Ozoroalide对喉癌Hep-2 细胞凋亡的影响 |
| 4.4.4 Ozoroalide对喉癌Hep-2 细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响 |
| 4.5 讨论 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 化合物图谱 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（6）GOLIM4在人头颈部癌中的表达及其机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1.材料和方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（7）MicroRNA-1225-5p在喉癌中的功能及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 MIR-1225-5P对喉癌细胞生物学行为的影响 |
| 引言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 MIR-1225-5P对喉癌细胞生物学行为的影响的机制研究 |
| 引言 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词 |
| 研究生在读期间发表的论文 |
| 致谢 |
（8）染料木黄酮调控miRNA-1469发挥促喉癌细胞凋亡作用的分子生物学机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分：检测喉癌细胞中表达水平受染料木黄酮影响的miRNAs |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 流式细胞仪检测染料木黄酮对hep-2和TU212细胞凋亡的影响 |
| 2.2.3 芯片分析 |
| 2.2.4 Real-time PCR：测定染料木黄酮处理Hep-2和 TU212细胞后的miRNA-1469表达水平，验证芯片分析结果 |
| 2.2.5 细胞转染 |
| 2.2.6 Western blot检测染料木黄酮对miRNA-1469低表达喉癌细胞的促凋亡作用 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测染料木黄酮对miRNA-1469低表达喉癌细胞的促凋亡作用 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 染料木黄酮可以促进喉癌细胞的凋亡 |
| 3.2 基因芯片分析显示，经染料木黄酮处理后，TU212细胞中miRNA-1469表达水平上调最为明显 |
| 3.3 Real-time PCR证实染料木黄酮可以上调Hep-2与TU212细胞中miR-1469的表达水平 |
| 3.4 下调miR-1469的表达可以抑制染料木黄酮对喉癌细胞的促凋亡作用 |
| 3.5 流式细胞仪检测染料木黄酮对miRNA-1469低表达喉癌细胞的促凋亡作用 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分：染料木黄酮上调miRNA-1469表达发挥促喉癌细胞凋亡作用的下游靶基因研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 miR-1469靶基因的生物信息学预测 |
| 2.2.2 Western blot检测染料木黄酮对miRNA-1469低表达喉癌细胞内Mcl1和Bcl2表达的影响 |
| 2.2.3 Western blot检测miRNA1469过表达对喉癌细胞内Mcl1和Bcl2表达的影响 |
| 2.2.4 荧光素酶报告载体的构建 |
| 2.2.5 双荧光素酶报告实验 |
| 2.2.6 双荧光素酶检测miR-1469低表达的TU212细胞经染料木黄酮处理后的荧光素酶活性 |
| 2.2.7 Western blot检测染料木黄酮对过表达Mcl1蛋白的喉癌细胞的凋亡作用 |
| 2.2.8 Western blot检测染料木黄酮对miRNA-1469和Mcl1双低表达喉癌细胞凋亡的影响 |
| 2.2.9 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 miR-1469靶基因的生物信息学预测 |
| 3.2 下调miR-1469表达可以抑制染料木黄酮对喉癌细胞中Mcl1的负调控作用 |
| 3.3 上调miR-1469表达可以抑制喉癌细胞中Mcl1表达 |
| 3.4 双荧光素酶报告载体的构建 |
| 3.5 双荧光素酶报告实验证实miR-1469与Mcl1-3’UTR存在结合位点 |
| 3.6 双荧光素酶报告实验证实下调miR-1469可以抑制染料木黄酮对喉癌细胞中Mcl1负调控作用 |
| 3.7 上调Mcl1表达可以抑制染料木黄酮对喉癌细胞的促凋亡作用 |
| 3.8 下调Mcl1表达可以逆转miR-1469 inhibitor对染料木黄酮促喉癌细胞凋亡的抑制作用 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分：染料木黄酮通过P53上调miRNA-1469表达的分子生物学机制研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 Western blot测定染料木黄酮对喉癌细胞内P53蛋白表达的影响 |
| 2.2.2 Western blot 检测染料木黄酮对稳定转染pLKO.1-P53shRNA的喉癌细胞的P53表达影响，以检测转染效率 |
| 2.2.3 Real-time PCR法检测染料木黄酮对P53低表达喉癌细胞中miRNA-1469表达的影响 |
| 2.2.4 Western blot检测染料木黄酮对P53低表达喉癌细胞凋亡的影响 |
| 2.2.5 Western blot检测染料木黄酮对P53过表达喉癌细胞凋亡的影响 |
| 2.2.6 Western blot 检测染料木黄酮对P53低表达、miRNA-1469过表达的TU212细胞的凋亡的影响 |
| 2.2.7 Western blot检测染料木黄酮对P53、Mcl1双低表达的TU212细胞的凋亡的影响 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 染料木黄酮可以上调喉癌细胞内P53蛋白的表达 |
| 3.2 下调P53的表达可以抑制染料木黄酮对喉癌细胞中miR-1469表达的上调 |
| 3.3 下调P53的表达可以抑制染料木黄酮对喉癌细胞的促凋亡作用 |
| 3.4 上调P53的表达可以增强染料木黄酮对喉癌细胞的促凋亡作用 |
| 3.5 上调miR-1469的表达可以逆转P53低表达对染料木黄酮促喉癌细胞凋亡的抑制作用 |
| 3.6 下调Mcl1表达可以逆转P53低表达对染料木黄酮促喉癌细胞凋亡的抑制作用 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）不同生存期喉癌患者的18F-FDG PET/CT SUVmax值的变化与SET8蛋白表达的相关性研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 喉癌的研究现状 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 喉癌相关基因研究 |
| 1.2.1 p53基因 |
| 1.2.2 VEGF基因 |
| 1.2.3 EGFR基因 |
| 1.2.4 p16基因 |
| 1.2.5 Cyclin D1基因 |
| 1.2.6 ras基因 |
| 1.2.7 Survivin基因 |
| 1.2.8 耐药基因 |
| 1.3 组蛋白单甲基化酶的结构和功能及与肿瘤的关系 |
| 1.3.1 引言 |
| 1.3.2 SET8对组蛋白的修饰作用 |
| 1.3.3 SET8对细胞周期的调控 |
| 1.3.4 SET8调节基因表达 |
| 1.3.5 SET8与肿瘤 |
| 1.3.6 调控SET8的micro RNA |
| 1.3.7 展望 |
| 1.4 PET/CT在喉癌中的作用 |
| 第2章 喉癌患者 ~(18)F-FDG PET/CT SUV值与SET8蛋白表达的相关性研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要仪器试剂 |
| 2.1.2 临床资料及分组 |
| 2.1.3 ~(18)F-FDG PET/CT扫描及图像处理 |
| 2.1.4 标本采集 |
| 2.1.5 标本染色 |
| 2.1.6 结果判断 |
| 2.1.7 随访 |
| 2.1.8 统计分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 一般临床资料及特征 |
| 2.2.2 SET8与肿瘤病理分级的关系 |
| 2.2.3 SUVmax与病理分级的关系 |
| 2.2.4 野生型p53蛋白表达的变化 |
| 2.2.5 SUVmax、SET8、p53之间的关系 |
| 2.2.6 生存分析 |
| 2.2.7 临床分期与生存率 |
| 2.2.8 病理分级与生存率 |
| 2.2.9 SUVmax与生存率 |
| 2.2.10 SET8与生存率 |
| 2.2.11 p53与生存率 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 FDG吸收与病理分级的关系 |
| 2.3.2 野生型p53、SET8蛋白表达与病理分级的关系 |
| 2.3.3 SUVmax与SET8，p53蛋白表达的关系 |
| 2.3.4 生存分析 |
| 第3章 SET8基因对喉癌生长、侵袭及转移的影响 |
| 3.1 实验对象 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 喉癌细胞（TU212）培养 |
| 3.2.2 Sh-SETD8序列设计 |
| 3.2.3 sh-SETD8-TU212细胞系构建及实验分组 |
| 3.2.4 细胞划痕修复实验 |
| 3.2.5 Brd U(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)细胞增殖检测 |
| 3.2.6 流式细胞术检测细胞凋亡：磷脂酰丝氨酸分析(Annexin V 法) |
| 3.2.7 SETD-8、p53蛋白水平变化检测 |
| 3.2.8 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 sh RNA对TU212细胞SET8蛋白表达的作用 |
| 3.3.2 下调SETD8对喉癌细胞增殖能力影响 |
| 3.3.3 下调SET8对细胞迁移的影响-划痕实验 |
| 3.3.4 SET8对细胞凋亡的影响-流式细胞术检测下调SETD8对TU212细胞凋亡的影响 |
| 3.3.5 下调SETD8后p53在TU212细胞系内表达水平变化 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（10）p53、p73与生存素及caspase-7蛋白酶在喉癌组织中的表达及临床意义（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1. 1 临床资料 |
| 1. 2 试剂与方法 |
| 1. 3 结果判断 |
| 1. 4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2. 1p53、p73、survivin及caspase-7 蛋白在喉癌组织中的表达 |
| 2. 2p53、p73、survivin及caspase-7 蛋白表达喉癌临床病理参数的关系 |
| 2. 3 突变型p53、p73 与survivin及caspase-7 蛋白表达间的相关性分析 |
| 2. 4 突变型p53、p73 与survivin及caspase-7 蛋白表达与喉癌生存分析 |
| 3 讨论 |
四、P53蛋白在喉癌细胞中的表达（论文参考文献）
- [1]喉高分化鳞状细胞癌临床特征与治疗策略初步探讨[D]. 黄镇楷. 汕头大学, 2021(02)
- [2]HTR7致喉鳞状细胞癌患者不良预后的相关机制研究[D]. 盛晓丽. 南方医科大学, 2021(02)
- [3]miR-552通过靶向p53调控喉癌细胞生长、转移和干性的研究[D]. 谷佳. 中国医科大学, 2021
- [4]喉癌中HPV16/18感染与RUNX3、TGF-β1蛋白之间的相关性研究[D]. 钟庆瑶. 遵义医科大学, 2020(12)
- [5]三种天然产物的抗喉癌活性及分子机制研究[D]. 刘昶. 中南民族大学, 2020(07)
- [6]GOLIM4在人头颈部癌中的表达及其机制的研究[D]. 高冬雪. 内蒙古医科大学, 2019(03)
- [7]MicroRNA-1225-5p在喉癌中的功能及机制研究[D]. 孙朋. 苏州大学, 2019(04)
- [8]染料木黄酮调控miRNA-1469发挥促喉癌细胞凋亡作用的分子生物学机制研究[D]. 马长宏. 中国医科大学, 2019(01)
- [9]不同生存期喉癌患者的18F-FDG PET/CT SUVmax值的变化与SET8蛋白表达的相关性研究[D]. 陈倩倩. 吉林大学, 2018(12)
- [10]p53、p73与生存素及caspase-7蛋白酶在喉癌组织中的表达及临床意义[J]. 凌航,廖前进,钟外生,崔捷,王季轩,陈杰. 中国耳鼻咽喉颅底外科杂志, 2015(06)