一、猪囊尾蚴细胞疫苗区域试验报告（论文文献综述）
殷静[1]（2016）在《猪带绦虫HSP70-4真核表达及其免疫佐剂效应研究》文中提出猪囊尾蚴病是猪带绦虫的幼虫—囊尾蚴所引起的一种重要的人畜共患寄生虫病,被世界卫生组织列为17种最易被忽略的热带病之一。该病呈世界性分布,不仅给养殖业造成了巨大的损失,同时还威胁着人类的身体健康。虽然广谱抗蠕虫药吡喹酮、丙硫咪唑对猪囊尾蚴病有一定的治疗效果,但其副作用严重,长期使用还会产生耐药性。因此,疫苗的研究显得尤为重要。猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白作为主要的候选抗原之一,具有较好的免疫保护力,但稳定性较差,分子量小（仅为16ku）,对其免疫效果造成了一定影响。热休克蛋白70（Heat shock Protein70,HSP70）是一类在结构和功能上高度保守的蛋白,具有分子伴侣、抗原递呈、抗感染免疫、抑制细胞凋亡等作用,现已被广泛用作佐剂或抗原载体来增强疫苗的免疫保护力。为了提高猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白的稳定性以及免疫保护力,我们开展了将猪带绦虫HSP70-4（TsHSP70-4）作为免疫佐剂的研究,目的是为猪带绦虫基因工程疫苗免疫佐剂的选择提供新的思路。研究取得了如下结果:1.参考GeneDB中猪带绦虫基因组注释信息,设计特异性引物,RT-PCR获得TsHSP70-4 ORF序列,全长为1953bp。根据毕赤酵母密码子偏好性,对TsHSP70-4基因密码子进行优化,连接载体pPIC9K,在毕赤酵母中进行高效表达,获得大小约为95kD的重组蛋白。Western-blot检测及质谱分析表明,获得的重组蛋白即为TsHSP70-4。2.将TsHSP70-4用柔性linker与猪带绦虫六钩蚴TSOL18的N端相连,在毕赤酵母中诱导表达,获得了大小约为115kD的融合蛋白TsHSP70-4-TSOL18。3.以TsHSP70-4作为佐剂,与TSOL18混合免疫（即TsHSP70-4+TSOL18免疫组）可以延长其在小鼠体内的作用时间;在免疫的第18天,该免疫组小鼠血清中IL-4、IFN-γ的浓度与TSOL18免疫组相比较,存在显着提高（P<0.05）;在第21天,该免疫组小鼠血清中IL-10的浓度与TSOL18免疫组比较,有明显增强（P<0.01）;在第21天和第28天,对全血T淋巴细胞亚群测定分析,该免疫组CD3+CD4+的百分率均有显着提高（P<0.05）。由此可知,TsHSP70-4与TSOL18混合免疫,可以延长TSOL18在体内的滞留时间,增强机体的免疫应答能力,特别是体液免疫水平。4.用TsHSP70-4-TSOL18融合蛋白免疫小鼠,获得的免疫效果远低于TsHSP70-4+TSOL18免疫组和TSOL18免疫组。综合上述,TsHSP70-4可以作为TSOL18重组蛋白潜在的免疫佐剂。TsHSP70-4-TSOL18融合蛋白免疫效果较差,推测可能与融合的方向和方式有关,具体原因有待进一步研究。
刘明远,刘全,方维焕,尹继刚,王学林,李建华,姜宁,张西臣,白雪,吴秀萍[2]（2014）在《我国的食源性寄生虫病及其相关研究进展》文中指出1食源性寄生虫病在食品安全中的战略作用和地位食源性寄生虫病是指所有能够经口随食物（水源）感染的寄生虫病的总称,分为食物寄生性（内源性）寄生虫病与食物污染性（外源性）寄生虫病。根据食物种类可分为六大类,包括肉源性寄生虫病、植物源性寄生虫病、淡水甲壳动物源性寄生虫病、鱼源性寄生虫病、螺源性寄生虫病、水源性寄生虫病。在我国流行和危害严重的食源性寄生虫病有包虫病、肉孢子虫病、带绦虫/囊尾蚴病、弓形虫病、旋毛虫
范希萍[3]（2013）在《豆状带绦虫不同发育阶段的结构特征及其致病机理的研究》文中认为兔豆状囊尾蚴病呈世界性分布，严重威胁着养兔业的发展，对该病的研究有重要的兽医公共卫生学意义。为明确豆状带绦虫不同发育阶段的结构特点及其致病机理，本研究通过人工感染的方法成功建立了犬豆状带绦虫感染模型和家兔豆状囊尾蚴感染模型,并采用电子显微技术和病理组织学技术等研究方法对豆状带绦虫、六钩蚴及豆状囊尾蚴的超微结构和组织学结构进行了系统观察；同时对家兔感染豆状囊尾蚴后的病理学变化规律进行了研究与探讨。1)驱虫后的犬人工感染豆状囊尾蚴，发现感染后42d开始排出孕卵节片，收集孕卵节片。感染70d后剖杀犬，收集完整成虫，取头节、颈节、成节和孕节分别制备电镜样品，透射电镜观察；取头节、颈节、成节和孕节制备石蜡切片，分别采用HE常规染色法、Masson氏特殊染色法和Langhan氏特殊染色法染色，光镜观察。结果显示豆状带绦虫的基本结构与猪带绦虫结构相似，而豆状带绦虫小钩芯髓不均质，与猪带绦虫存在差异。2)分离六钩蚴，用人工肠液激活，制备电镜样品，透射电镜观察。结果显示豆状带绦虫六钩蚴可分为皮质层、皮下层和实质层几部分，基本结构与猪带绦虫六钩蚴结构相似，但小钩基部直径小于端部，芯髓不均质，与猪带绦虫六钩蚴存在差异；在实质层观察到含有9个核的合胞体，其周围的结构与合胞体结构相同，证实了六钩蚴的基本结构由合胞体组成。3)血清学检测豆状囊尾蚴抗体阴性的家兔，人工感染六钩蚴并隔离饲养两个月，取成熟豆状囊尾蚴，采用上述相同方法，观察其组织结构和超微结构。结果显示豆状囊尾蚴与猪囊尾蚴、羊脑多头蚴结构基本相似，但豆状囊尾蚴主要寄生于大网膜和肠系膜表面，肌肉中未发现；另外，在豆状囊尾蚴囊壁上未见微绒毛。表明带科绦虫囊尾蚴的基本结构相似，但存在种间差异。4)血清学检测豆状囊尾蚴抗体阴性的家兔人工感染六钩蚴，根据感染数量将试验动物分为高剂量组（6只）和低剂量组（6只），设对照组（6只）。于感染后第7d、30d和60d分别采取试验组和对照组家兔的肝脏、脾脏、肾脏，制作石蜡切片，HE染色，光镜观察；同时，每周耳缘静脉采血，进行血液学检查。结果显示：感染初期，不同试验组家兔的肝脏、脾脏和肾脏均呈急性出血性炎症变化，肝细胞空泡变性，间质可见六钩蚴，肉芽肿初步形成。感染一个月后，可见囊尾蚴移行道，肝细胞严重空泡变性，间质中有未成熟囊尾蚴。感染后期，肝细胞空泡变性和颗粒变性，可见寄生虫性特殊肉芽肿。血液学检查结果显示，试验组家兔外周血中的中性粒细胞和淋巴细胞在感染一周后明显高于对照组，一个月后开始下降，感染两个月时基本接近对照组。同对照组相比，试验组单核细胞和嗜酸性粒细胞的变化规律为感染一周后明显增多，一个月后继续上升，感染两个月时下降，趋于稳定。
齐文娟[4]（2011）在《囊尾蚴病多期复合基因疫苗的构建及免疫效应评价》文中指出目的：（1）构建包含猪带绦虫六钩蚴期和囊尾蚴期特异性疫苗候选分子的囊尾蚴病多期复合基因疫苗。（2）评价该复合基因疫苗的免疫效应。方法：（1）分别提取猪带绦虫六钩蚴和囊尾蚴总RNA，应用RT-PCR方法分别扩增六钩蚴期特异性抗原TSOL18和囊尾蚴期特异性抗原cC1编码基因，另外设计引物应用重叠延伸PCR技术通过一柔性接头（linker）（Gly4Ser）3串联这两个基因，使TSOL18基因在前，cC1基因在后，即融合基因TSOL18+linker+cC1（简写为TSOL18/L/cC1）。将TSOL18/L/cC1融合基因装载至pMD18-T载体中，并测序验证。提取pMD18-TSOL18/L/cC1质粒DNA，经Xho I和Nhe I双酶切，纯化后的酶切产物TSOL18/L/cC1基因通过T4连接酶与经Xho I和Nhe I双酶切并纯化的pVAX1真核表达质粒连接，构建pVAX1-TSOL18/L/cC1重组质粒，同时构建pVAX1-TSOL18, pVAX1-cC1。将所构建的重组质粒通过阳离子聚合物介导转染293T细胞，设转染pVAX1空载体组和未转染组转染；转染72h后分别收集细胞，提取转染后的细胞总RNA，通过RT-PCR、间接免疫荧光、Western-blot鉴定融合基因在真核细胞中的表达状态；以构建的重组质粒肌肉注射小鼠，以免疫组化检测融合基因在小鼠骨骼肌的真核表达效果。（2）以pVAX1-TSOL18、pVAX1-cC1、pVAX1-TSOL18/L/cC1经肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠，以流式细胞术检测免疫后小鼠脾淋巴细胞胞内细胞因子等细胞免疫指标，并以间接ELISA法检测相应的特异性抗体及特异性抗体动态变化等体液免疫指标。结果：（1）构建的pVAX1-TSOL18/L/cC1重组质粒经酶切电泳和测序结果与预期设计的基因序列一致。真核细胞转染后通过RT-PCR检测显示除转染pVAX1空载体组和未转染组外，其余各组均有相应mRNA的表达。真核细胞转染后通过间接免疫荧光、Western-blot检测表明能够在293T细胞中表达出目的蛋白。免疫组化染色后在重组质粒注射部位肌肉组织的肌纤维内显示棕黄色阳性分泌颗粒，并且pVAX1-TSOL18/L/cC1组比pVAX1-TSOL18组棕黄色阳性分泌颗粒多，空载体组与空白对照组骨骼肌组织未见明显的棕黄色颗粒。（2）pVAX1-TSOL18/L/cC1组小鼠血清IgG抗体均显着高于pVAX1-TSOL18、pVAX1-cC1组及PBS组和pVAX1组（P<0.05）。 pVAX1-TSOL18/L/cC1组、pVAX1-TSOL18、pVAX1-cC1组分泌IFN-γ的CD4+T及CD8+T细胞各亚群比例均显着高于PBS组和pVAX1组（P<0.05）， pVAX1-TSOL18/L/cC1组又显着高于pVAX1-TSOL18、pVAX1-cC1组（P<0.05）；pVAX1-TSOL18/L/cC1组、pVAX1-TSOL18、pVAX1-cC1组分泌IL-4的CD4+T细胞亚群比例显着高于PBS组和pVAX1组（P<0.05），而pVAX1-TSOL18/L/cC1组、pVAX1-TSOL18、pVAX1-cC1组与PBS组和pVAX1组组间无显着差异（P＞0.05）；pVAX1-TSOL18、pVAX1-cC1组分泌IL-4的CD8+T细胞亚群比例显着高于PBS组和pVAX1组（P<0.05），而pVAX1-TSOL18/L/cC1组与与PBS组和pVAX1组组间无显着差异（P＞0.05）。结论：（1）成功构建包含猪带绦虫六钩蚴和囊尾蚴期特异性疫苗候选分子的囊尾蚴病多期复合基因疫苗pVAX1-TSOL18/L/cC1。并且初步揭示了其在体内和体外的表达。（2）囊尾蚴病多期复合基因疫苗pVAX1-TSOL18/L/cC1较单基因疫苗pVAX1-TSOL18、pVAX1-cC1诱导更为全面的免疫应答效应。
巩伟[5]（2010）在《猪囊尾蚴pVAX1-AgB重组质粒的免疫效果研究》文中研究表明猪囊尾蚴病是由猪带绦虫（Taenia Solium）幼虫寄生于人或猪等中间宿主引起的人畜共患寄生虫病。虽然传统的驱虫药物在囊虫病的治疗方面仍发挥着重要的作用,但是长期、多次用药因药物残留所致的食品安全问题直接影响着人体健康。这使得我们不得不改变思路,采用经济、安全、高效的疫苗防治该病的流行。猪囊尾蚴B抗原又叫副肌球蛋白,是由囊尾蚴体壁细胞产生并分泌到虫体外的一种蛋白质,该抗原可通过抑制补体激活途径,在囊尾蚴与宿主的免疫作用中对虫体起保护性作用,是WHO提出的血吸虫疫苗候选抗原之一,是一种最有希望的蠕虫疫苗候选抗原。本研究根据GenBank中登录的AgB基因序列设计引物,利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴总RNA扩增出AgB基因,连接到pGEM-T Easy载体并进行序列测定。结果表明,获得的AgB基因完整的开放阅读框（ORF）大小为2590bp,与GenBank中登陆的基因同源性达99.7%。同时,设计原核表达引物,以重组质粒pGEM-AgB为模板进行PCR扩增,经EcoR I、Not I双酶切,回收目的片段并与pGEX-4T-1载体连接,构建原核表达载体pGEX-AgB,在大肠杆菌中进行表达及纯化,表达产物经SDS-PAGE电泳检测,结果在121ku处出现了清晰的目的蛋白条带,与预期的分子量大小相一致,经Western blot检测发现,表达产物能被猪囊尾蚴阳性血清所识别,说明表达的外源蛋白具有良好的免疫反应性。设计哺乳动物表达载体引物,以重组质粒pGEM-AgB为模板,经PCR扩增,BamHⅠ、HindⅢ双酶切后连接哺乳动物表达载体pVAX1,构建重组质粒pVAX1-AgB。大量提取重组质粒,以100μg/只的剂量肌肉注射免疫5周龄健康BALB/c小鼠,同时设PBS和pVAX1质粒对照组,在免疫后不同时间采血进行ELISA抗体检测。结果显示小鼠免疫后2w即可检测到抗体,免疫后6 w达到高峰,且维持在一个较高水平,之后逐渐下降,38w后基本消失,抗体持续时间达8个月之久,而PBS组和pVAX1对照组则没有检测到抗体。为了进一步研究pVAX1-AgB重组质粒的免疫效果,本实验以pVAX1-AgB重组质粒1000μg/头的剂量经肌肉免疫健康家猪,同时以AgB原核表达重组蛋白组（200μg/头）、pVAX1组（1000μg/头）和PBS组作为不同的对照组对该核酸疫苗进行全面评价,用ELISA测定各组的抗体水平,同时检测血清中IL-4和IFN-γ的表达水平。结果显示,pVAX1-AgB重组质粒组免疫后第4w即检测到抗体,第8w达到峰值;AgB重组蛋白组免疫后的2w即可检测到抗体,第6w达到峰值;pVAX1-AgB质粒组抗体水平明显低于AgB重组蛋白组。实验猪一免后pVAX1-AgB质粒组和AgB重组蛋白组IL-4、IFN-γ表达水平均升高,二免后又高于一免,两次免疫后IL-4、IFN-γ水平明显都高于免疫前（P<0.01）;pVAX1-AgB质粒组和AgB重组蛋白组的IL-4、IFN-γ表达水平无明显差异,说明pVAX1-AgB重组质粒和AgB重组蛋白均有效诱导猪产生免疫应答,其中重组质粒组产生抗体的时间晚于重组蛋白组。pVAX1-AgB核酸疫苗与AgB重组蛋白疫苗实际免疫效果还有待于通过猪带绦虫虫卵攻击试验进一步验证,但本研究为研制基于AgB的安全、高效的猪囊尾蚴疫苗奠定了基础。
李滋睿[6]（2010）在《我国重大动物疫病区划研究》文中认为我国是世界上畜牧业大国,肉类总产量居世界第一,畜产品具有明显的价格优势。但我国肉类出口量仅占世界肉类出口总量的3.6%,动物疫病是影响着我国畜牧业持续发展和畜产品国际竞争力的主要因素之一。动物疫病区域化管理是国际上通行的动物疫病管理模式,世界上已有60多个国家和地区被OIE认可为无口蹄疫等重大动物疫病的国家和地区,这些国家和地区在畜产品国际贸易中得到了实惠。新修订的动物防疫法提出我国要实行动物疫病区域化管理,因此,从我国动物疫病发生和流行规律入手,研究动物疫病区划,对于确定无规定动物疫病区和指导动物疫病区域化管理具有重要的现实意义。本研究从动物疫病区划的角度出发,通过系统分析我国动物防疫工作现状的基础上,研究提出了动物疫病区划的方法体系。重点探讨了动物重大疫病区域划分和各区域重大动物疫病防控策略。在动物疫病区域化管理方面,研究了我国无规定动物疫病区建设的发展战略。首先,全面分析和总结了我国动物疫病流行特点、防疫体系建设情况和防疫技术措施发展情况。目前我国动物疫情还不断发生,重大动物疫病还未得到有效遏制,无规定动物疫病区还没有得到国际社会的认可。通过与发达国家比较,提出我国动物防疫工作还存在动物疫情应急反应机制不够完善、部分地区防疫技术手段比较落后、基层动物防疫机构不健全、贫困地区基层防疫队伍人员素质不高和动物防疫法律法规体系不够健全等问题。其次,较系统地研究了动物疫病区划的目标、原则、分类体系、区划方法及区划程序。动物疫病的发生和发展是自然因素和社会因素共同作用的产物,它呈现区域性特点,遵循自然分离规律。通过计算动物疫病流行指数对我国重大动物疫病进行了区划。重大动物疫病的流行区域分成五个等级,分别是洁净区、散发区、中度流行区、较重流行区和严重流行区。分析了各个区的地理分布和疫病流行特点。第三,研究提出了不同流行区重大动物疫病防制策略。洁净区是消灭重大动物疫病和建设无规定动物疫病区的首选区域,要严格采取扑杀措施防控和净化重大动物疫病;散发区动物疫病的防控策略是建立动物重大疫病隔离带,保证周边的动物疫情不传播到本区域内。同时,通过免疫等技术手段使散发区逐步转化为洁净区;中度流行区要适度发展畜牧业,严禁动物和畜禽产品外调和出口,控制疫病的发展和扩散;动物疫病较重区和严重区主要分布在我国的边界地区,国外疫病影响、经济落后、民族习惯和生活方式以及大都市的国际交流和人员往来是动物疫病发生的主要原因。这些地区的防疫工作要依靠国家来完成。第四,研究了口蹄疫、禽流感、猪瘟、新城疫和猪蓝耳病等五种重大动物疫病在我国的流行特点、区域分布,总结了国外防制经验和消灭净化方法,提出了我国消灭这五种动物疫病的思路和措施。最后,研究了我国无规定动物疫病区发展战略。主要战略措施是调整无规定动物疫病区域,鼓励大型养殖企业建设“生物安全小区”;转变无疫区畜禽饲养管理模式,提高畜禽规模化和集约化饲养程度;强无疫区动物疫病的监测能力,摸清疫病流行情况;建立和完善无规定动物疫病区追溯体系建设,强化区内动物及动物产品标识工作;积极推进我国无疫区的国际认证和认可工作。本文的主要政策建议有尽快制定和实施重大动物疫病扑灭计划、进一步加强重大动物疫病应急反应能力、不断深化兽医管理体制改革和完善国家兽医官制度、进一步完善无规定动物疫病区建设工作、制定和完善动物防疫法律法规等。
宋军科[7]（2010）在《猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的原核表达及生物学特性研究》文中进行了进一步梳理猪囊尾蚴（Cysticercus cellulosae）是猪带绦虫的中绦期,是造成猪囊尾蚴病的病原。在人体内,猪带绦虫与两个明显的感染阶段有关:肠道感染（这是由于猪带绦虫的成虫在宿主肠道寄生所致,也称绦虫病）和肌肉或组织感染（是由于猪带绦虫的幼虫――囊尾蚴进入宿主肌肉或者组织内所致,也称囊虫病）。因此,该病是一种危害严重、分布广泛的人兽共患寄生虫病。半胱氨酸蛋白酶方泛分布于从病毒至脊椎动物生物体中,在细胞凋亡和肿瘤发生中具有重要作用。在寄生虫的发育和生存过程中,半胱氨酸蛋白酶除具有催化和蛋白加工功能外,还在寄生虫成囊、组织侵袭、营养摄取、免疫逃避和致病性等方面起重要作用。尤其值得注意的是,该酶具有较好种特异性,既可作为寄生虫病的诊断抗原和疫苗候选分子,同时,也是药物治疗寄生虫病的靶标。鉴于此,本研究针对猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶开展研究。1.将猪囊尾蚴半胱氨蛋白酶pGEX-4T-TsCL-1重组质粒转化的BL21（DE3）宿主菌进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明:猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶在大肠埃希菌中得到高效表达,重组蛋白以可溶性和包涵体两种表达形式存在,重组TsCL-1蛋白相对分子量约为61Ku。与预期的结果相符。2.对重组蛋白诱导条件进行了优化,发现在28℃,IPTG浓度0.1 mmol/L诱导10h后融合蛋白的表达量较高。通过蛋白质分析专家系统（Expert Protein Analysis, ExPASY）对猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶的结构与功能分析预测。结果表明该序列保守性较强,为偏碱性的蛋白,在氨基酸组成中,以非极性疏水性氨基酸数量居多;PI值为8.17,蛋白质的二级结构中有30.0%的α-螺旋结构,24.5%的β-折叠,无规则卷曲19.5%,转角31.0%。3.用GST琼脂糖凝胶亲和层析法纯化重组TsCL-1可溶性蛋白。SDS-PAGE后薄层扫描分折,纯化后的目的蛋白纯度可达90%以上。利用明胶电泳对蛋白的活性进行分析,发现纯化蛋白由于聚丙烯酰胺凝胶内的明胶产生了水解。导致染色液中的色素没有蛋白与之相结合。经染色、脱色后,在目的蛋白相应迁移位置出现了白色条带,其他位置则呈蓝色。将半胱氨酸蛋白酶用特异性抑制剂E-64处理后经SDS-PAGE分析发现,在凝胶内相应的迁移位置呈现与背景色一致的蓝色,这说明样品中酶的活性被抑制,失去了水解明胶的活性。由此可知所纯化的可溶性重组TsCL-1蛋白具有生物活性,其水解活性能被半胱氨酸蛋白酶特异性抑制剂E-64所抑制。4.开展了重组蛋白的免疫原性研究。用表达的目的蛋白免疫5周龄的雌性昆明系小鼠后,分离小鼠的血清并用间接ELISA法测定效价,抗体滴度可达1:12 800;用Western blot对抗体的特异性分析发现,在61ku位置出现特异的蛋白杂交带,而与阴性血清没有杂交条带产生,证明制备的抗体能与TsCL-1重组蛋白特异性结合。以上研究说明TsCL-1重组蛋白有较好的免疫原性和抗原性。为猪囊尾蚴病的诊断与检测提供了一种简便﹑快捷﹑价格低廉的技术手段。通过以上研究,初步明确了猪囊尾蚴半胱氨蛋白酶的生物学特性和免疫原性,为明确寄生虫与宿主相互关系及进一点开展猪囊尾蚴病的免疫诊断和治疗的研究奠定了基础。
刘斌[8]（2008）在《猪囊尾蚴TSOL18核酸疫苗表达载体构建、免疫原性及安全性研究》文中认为囊虫病（Cysticercosis）是由猪带绦虫（Taenia solium）的幼虫猪囊尾蚴寄生于人或猪等中间宿主而引起的人畜共患寄生虫病,在中国大部分地区广泛流行,严重威胁着当地居民的身体健康,是一个重要的公共卫生问题。不仅如此,该病也是制约养猪业发展的重要因素,还给畜牧业生产造成重大经济损失,囊虫病的广泛存在还造成畜牧业的重大经济损失,极大影响了我国畜产品在国际市场上的竞争力,因而是公认的社会经济病之一。1.本实验将猪带绦虫六钩蚴阶段TSOL18基因定向克隆于真核表达质粒pVAX1,经筛选、鉴定及DNA序列分析正确后,将重组质粒pVAX1/TSOL18转染BHK-21细胞,通过SDS-PAGE、Western blotting、荧光抗体染色,检测细胞中表达的TSOL18抗原。结果表明,重组真核质粒pVAX1/TSOL18可在BHK-21细胞中表达,表达的TSOL18目的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。动物免疫试验表明,真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫和体液免疫应答,这为猪囊尾蚴病核酸疫苗的研究奠定了良好的基础。2.探讨pVAX1/TSOL18重组表达质粒作为DNA疫苗在小鼠体内的组织分布和生物安全性。将pVAX1/TSOL18重组质粒经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,免疫后不同时间剖杀小鼠,分别采集各种组织样品,抽提gDNA,利用PCR技术分析pVAX1/TSOL18在组织内的分布及残留时间;同时,以PCR技术检测免疫动物粪便,分析pVAX1/TSOL18重组表达质粒在外界环境中的释放情况。结果显示,免疫pVAX1/TSOL18重组表达质粒1d和5d后,在小鼠组织gDNA均扩增出目的片段,但不同个体的小鼠,扩增出的目的片段的组织也不完全相同,但在血液中均扩增出了目的片段,第5d较第1d扩增出的目的片段明显变暗;免疫后15d,仅在一只小鼠的血液中检测到TSOL18基因;免疫后30d在所有动物组织中均未检测到重组表达质粒;同时,免疫1d、5d小鼠的粪便中均未检测到TSOL18基因。pVAX1/TSOL18重组表达质粒作为疫苗对动物和环境是安全的。
陈晓宇[9]（2008）在《表达TsoL18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建》文中研究指明囊尾蚴病（Cysticercosis）是由猪带绦虫（Taenia solium）的幼虫囊尾蚴（Cysticercus cellulose）寄生于人或猪等而引起的人畜共患寄生虫病,是公认的世界经济病之一。囊尾蚴病在中国大部分地区尤其在少数民族地区是一个重要的公共卫生问题,严重威胁着人体健康,不仅如此,猪囊尾蚴病的广泛存在极大影响了我国畜产品在国际市场上的竞争力,给畜牧业造成重大经济损失,猪囊尾蚴病的免疫防治势在必行,然而在猪囊尾蚴病疫苗研究中,疫苗抗原的选择和来源一直困扰着兽医工作者。Tsol18是猪带绦虫六钩蚴（T. solium oncosphere）阶段特异性表达的抗原,主要在六钩蚴感染中间宿主的早期阶段分泌,其免疫血清在体外试验中能杀死六钩蚴,是猪囊尾蚴病疫苗研制的主要候选抗原之一。在已有的研究中,Tsol18重组蛋白在原核系统中多以包涵体形式表达,给蛋白质的复性和纯化带来许多困难,并且包涵体活性较低、保存期短、降解快,因而限制了Tsol18在猪囊尾蚴病疫苗研制上的应用。鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）是一种常见的侵袭性胞内菌,通过基因工程方法减毒后对宿主致病性显着降低,但仍保留良好的侵袭力,可将免疫抗原直接递呈给免疫细胞而诱导特异性的免疫应答反应,减毒鼠伤寒沙门氏菌作为口服疫苗载体是目前疫苗免疫研究的热点之一。为了优化猪囊尾蚴病疫苗候选抗原Tsol18重组蛋白,探索猪囊尾蚴病口服重组活载体疫苗的免疫机制,研究其在猪囊尾蚴病免疫预防上的作用,进行了本项研究。收集成熟的猪带绦虫虫卵,经孵化和激活后,提取六钩蚴总RNA,设计特异性引物RT-PCR扩增Tsol18基因片段,并同义突变Tsol18基因片段中四个大肠杆菌低利用率密码子,截去其N端的16个氨基酸的信号肽编码序列,构建原核表达载体pGEX-4T-Tsol18并表达,进行GST-Tsol18重组蛋白的SDS-PAGE、Western-blot及稳定性分析,并以GST-Tsol18重组蛋白为抗原制备兔高免血清;将改造的Tsol18基因片段插入Asd+的组成型表达载体pYA3341,构建重组载体pYA3341-Tsol18,将重组载体电转化入缺失腺苷酸环化酶（Δcya）、环腺苷酸受体蛋白基因（Δcrp）以及天冬氨酸-β-半醛脱氢酶（Δasd）的减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,研究重组活载体疫苗X4550（pYA3341-Tsol18）表达Tsol18重组蛋白的免疫原性、生长稳定性、口服安全性及ELISA检测免疫小鼠血清中抗Tsol18抗体的产生情况,评价重组疫苗X4550（pYA3341-Tsol18）的免疫效果。结果显示改造后的GST-Tsol18重组蛋白多以可溶性形式表达,蛋白表达量占菌体总蛋白的24%,Western-blot证明GST-Tsol18重组蛋白具有良好的抗原性,4℃保存120d只有20.1%降解,显示重组蛋白稳定性有很大改善。重组疫苗X4550（pYA3341-Tsol18）在没有选择压力的情况下连续培养100代后,随机挑选的重组疫苗株全部都能生长和表达Tsol18重组蛋白,表明重组疫苗生长稳定;BALB/c鼠口服重组疫苗株2.0×1012cfu30天后,存活率100%,证实重组疫苗口服安全可靠。ELISA检测显示在二免后四周小鼠血清中抗Tsol18IgG抗体的OD值达到0.645,表明重组疫苗能激发机体产生免疫应答反应。本研究获得了具有高效表达、良好免疫原性和稳定性的猪囊尾蚴病疫苗候选抗原GST-Tsol18重组蛋白,构建了携带Tsol18重组蛋白的减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗X4550（pYA3341-Tsol18）,初步评价了重组疫苗的免疫效果,为猪囊尾蚴病基因工程疫苗的研制开拓了新的思路。
鲁琨[10]（2008）在《猪囊尾蚴10kD基因的克隆、表达及重组蛋白ELISA方法的建立》文中提出猪囊尾蚴病是一种重要的人畜共患寄生虫病,不但引起猪肉品质下降,而且给人类健康造成重大危害。目前,猪囊尾蚴病的免疫诊断和免疫预防是国内外学者的关注的热点。本研究通过基因工程方法克隆猪囊尾蚴囊液10kD基因,构建重组表达载体,得到高效表达;利用镍亲和层析方法纯化高效表达蛋白;利用蛋白建立间接ELISA方法来检测猪囊尾蚴病抗体。为猪囊尾蚴病检测试纸条、试剂盒的研制提供重要参考依据。1、利用PCR技术对猪囊尾蚴囊液10kD基因进行扩增,得到258bp的基因片断。将10kD基因克隆入表达载体pET32a中,构建载体PET32a-TS10-1;经过PCR扩增和双酶切鉴定及测序分析,证明该基因正确插入到克隆载体中,且阅读框正确;序列分析证明该基因与排泄分泌抗原B抗原基因同源性为100%,从而证明该基因与排泄分泌抗原之间存在较近的亲缘关系。重组的pET32a-TS10-1质粒转化至BL21（DE3）宿主菌中;经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达后,在SDS-PAGE鉴定中可见表达产物分子质量约为29kD,与理论推测蛋白分子量一致;经Western blot证明该表达蛋白可以被兔抗囊尾蚴囊液多抗血清特异性识别,该表达蛋白可作为基因工程诊断抗原。2、经过收集诱导表达菌体、超声波裂解后,证明该蛋白属于可溶性表达;通过经过镍鳌合层析柱对于该蛋白进行纯化。通过改变咪唑浓度﹑调整流速、作用温度等极大地提高了纯化蛋白的纯度和回收量;在Western blot试验中,不需经过酶切的可溶性蛋白可与兔抗囊尾蚴多抗血清表现特异性结合,说明融合蛋白具有较好的反应性,为囊尾蚴病快速诊断提供研究基础。3、用纯化的表达蛋白作为包被抗原包被酶标板,初步建立快速检测猪囊尾蚴病的间接ELISA方法。抗原包被浓度为3.145μg?mL-1;抗体稀释度为1:20,37℃作用45min;羊抗猪酶标二抗稀释度为1:2000,37℃作用45min;底物溶液室温显色10min;经过特异性﹑敏感性试验进一步表明,建立的间接ELISA方法特异性强﹑灵敏度高。为进一步组装诊断试纸条﹑试剂盒奠定了物质基础,也为囊尾蚴病的诊断与检测提供一种简便﹑快捷﹑价格低廉的技术手段。
二、猪囊尾蚴细胞疫苗区域试验报告（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、猪囊尾蚴细胞疫苗区域试验报告（论文提纲范文）
（1）猪带绦虫HSP70-4真核表达及其免疫佐剂效应研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 引言 |
| 1.1 猪带绦虫概述 |
| 1.1.1 猪带绦虫及猪囊尾蚴病 |
| 1.1.2 猪囊尾蚴病免疫学诊断的研究进展 |
| 1.1.3 猪囊尾蚴病的治疗与预防 |
| 1.2 热休克蛋白70概述 |
| 1.2.1 热休克蛋白发现及分类 |
| 1.2.2 HSP70家族的结构特征及分类 |
| 1.2.3 HSP70的生物学功能 |
| 1.2.4 HSP70在寄生虫中的研究进展 |
| 1.3 研究目的与意义 |
| 第二章 TsHSP70-4 基因克隆及序列分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 虫株、菌株及试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 引物的设计与合成 |
| 2.1.4 猪带绦虫总RNA的提取 |
| 2.1.5 c DNA的合成 |
| 2.1.6 TsHSP70-4 基因的扩增 |
| 2.1.7 TsHSP70-4 生物信息学分析 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 总RNA的提取 |
| 2.2.2 TsHSP70-4 基因的扩增与测序 |
| 2.2.3 TsHSP70-4 生物信息学分析 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 TsHSP70-4 真核表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 载体、菌株与试剂 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 重组质粒p PIC9K-TsHSP70-4 的构建 |
| 3.1.4 重组质粒p PIC9K-TsHSP70-4 线性化 |
| 3.1.5 酵母感受态细胞的制备 |
| 3.1.6 电击转化与菌落筛选 |
| 3.1.7 TsHSP70-4 重组蛋白的诱导表达 |
| 3.1.8 TsHSP70-4 重组蛋白的纯化与鉴定 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 重组质粒p PIC9K-TsHSP70-4 线性化 |
| 3.2.2 TsHSP70-4 重组蛋白的诱导表达 |
| 3.2.3 TsHSP70-4 重组蛋白的纯化 |
| 3.2.4 纯化后的TsHSP70-4 的Western-blot及质谱鉴定 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 TsHSP704TSOL18真核表达 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 载体、菌株与试剂 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.1.3 重组质粒p PIC9K-TsHSP704TSOL18的构建 |
| 4.1.4 重组质粒p PIC9K-TsHSP704TSOL18线性化 |
| 4.1.5 酵母感受态细胞的制备 |
| 4.1.6 电击转化与菌落筛选 |
| 4.1.7 TsHSP704TSOL18重组蛋白的诱导表达 |
| 4.1.8 TsHSP704TSOL18重组蛋白的纯化与鉴定 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 重组质粒p PIC9K-TsHSP704TSOL18线性化 |
| 4.2.2 TsHSP704TSOL18重组蛋白的诱导表达 |
| 4.2.3 TsHSP704TSOL18重组蛋白的纯化 |
| 4.2.4 TsHSP704TSOL18重组蛋白的Western-blot鉴定 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 TsHSP70-4 的免疫佐剂效应 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 主要试剂 |
| 5.1.2 主要仪器 |
| 5.1.3 实验动物 |
| 5.1.4 实验小鼠分组 |
| 5.1.5 实验小鼠免疫与采血 |
| 5.1.6 实验小鼠血清TSOL18抗体的检测 |
| 5.1.7 实验小鼠IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ 的检测 |
| 5.1.8 实验小鼠全血T淋巴细胞亚群的测定 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 实验小鼠血清TSOL18抗体的检测 |
| 5.2.2 实验小鼠IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ 的检测 |
| 5.2.3 实验小鼠全血T淋巴细胞亚群的测定 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）我国的食源性寄生虫病及其相关研究进展（论文提纲范文）
| 1 食源性寄生虫病在食品安全中的战略作用和地位 |
| 1.1 造成大量原因不明公共卫生事件频发 |
| 1.2 隐性感染人数攀升 |
| 1.3 中间宿主广泛,感染率升高 |
| 1.3.1 包虫方面 |
| 1.3.2 肉孢子虫方面 |
| 1.3.3 带绦虫/囊尾蚴方面 |
| 1.3.4 弓形虫方面 |
| 1.3.5 旋毛虫方面 |
| 1.3.6 华支睾吸虫方面 |
| 1.3.7 异尖线虫方面 |
| 1.3.8 姜片吸虫方面 |
| 1.4 经济损失巨大 |
| 1.4.1 包虫病方面 |
| 1.4.2 带绦虫/囊尾蚴病方面 |
| 1.4.3 弓形虫病方面 |
| 1.4.4 旋毛虫病方面 |
| 1.5 对人类身体健康造成严重威胁 |
| 1.5.1 包虫病 |
| 1.5.2 肉孢子虫病 |
| 1.5.3 囊尾蚴病与带状绦虫病 |
| 1.5.4 弓形虫病 |
| 1.5.5 旋毛虫病 |
| 1.5.6 华支睾吸虫病 |
| 1.5.7 广州管圆线虫病 |
| 1.5.8 异尖线虫病 |
| 1.5.9 姜片吸虫病 |
| 1.6造成食源性寄生虫病流行的主要原因 |
| 1.6.1 不良饮食习惯 |
| 1.6.2 食物种类的增加 |
| 1.6.3 气候环境的变化 |
| 1.6.4 独特的膳食习俗 |
| 1.7 研究投入与水平存在诸多短板 |
| 1.7.1 带绦虫/囊尾蚴病研究方面 |
| 1.7.2 弓形虫病研究方面 |
| 1.7.3 诊断检测方面 |
| 1.7.4 旋毛虫病研究方面 |
| 1.7.5 广州管圆线虫病研究方面 |
| 1.7.6 隐孢子虫病研究方面 2 发达国家食源性寄生虫病防控策略 |
| 2.1 欧盟等发达国家食源性寄生虫病防控的策略 |
| 2.1.1欧盟 |
| 2.1.2 美国 |
| 2.1.3 日本 |
| 2.1.4 澳大利亚 |
| 2.2 国外食源性寄生虫病总体控制策略 |
| 2.2.1 改善环境卫生条件 |
| 2.2.2 动物饲养及监督 |
| 2.2.3 腌制、浸酸、烟熏和发酵处理 |
| 2.2.4 烹调和加热处理 |
| 2.2.5 冷冻 |
| 2.2.6 过滤、氯化及其他消毒剂 |
| 2.2.7 其他的物理方式处理 |
| 2.2.8 破坏寄生虫的生活史 |
| 2.3 国外食源性吸虫病防控的战略 |
| 2.3.1 食源性吸虫病的诊断 |
| 2.3.2 食源性吸虫病的预防、治疗和控制 3 国内食源性寄生虫病防控的现状与存在问题 |
| 3.1 国内食源性寄生虫防控研究现状 |
| 3.1.1 流行病学现状 |
| 3.1.2 防控技术研究现状 |
| 3.1.3 政策法规 |
| 3.2 食源性寄生虫防控存在的问题 |
| 3.2.1 食源性寄生虫病分布的改变 |
| 3.2.2 食源性寄生虫病的感染群体有较大的改变 |
| 3.2.3人们防范意识薄弱是导致食源性寄生虫病感染的主要因素 |
| 3.2.4 食源性寄生虫病的诊断技术有待创新 |
| 3.2.5 寄生虫病防治专业人才匮乏 |
| 3.2.6 防治经费紧缺 4 我国食源性寄生虫病防治面临的机遇与挑战 |
| 4.1 挑战 |
| 4.1.1 人们对食品安全的需求 |
| 4.1.2 打破贸易壁垒的需要 |
| 4.1.3 技术层面的短板 |
| 4.2 机遇 |
| 4.2.1 政府高度重视 |
| 4.2.2 经济发展水平提高 |
| 4.2.3 科学技术发展有诸多突破 5 食源性寄生虫防控的科学发展方向 |
| 5.1 技术层面科学发展方向 |
| 5.1.1 深入开展全国范围食源性寄生虫病流行病学调查研究与分析、建立食源性寄生虫病数据库及地理信息系统 |
| 5.1.2大力推进食源性寄生虫快速、敏感和特异检测技术科技创新及应用 |
| 5.1.3 加强食源性寄生虫病防控体系建设 |
| 5.1.4 加大食源性寄生虫基础研究 |
| 5.2 政策与管理层面科学发展方向 |
| 5.2.1 加大经费投入 |
| 5.2.2 建立有效的国家食源性寄生虫病监测和预警体系,制定切实可行的应急措施 |
| 5.2.3 加强国际合作 |
| 5.2.4 培养一批食源性寄生虫病的监测及防治科研人才 |
| 5.2.5 做好宣传、教育和培训,多层次提高人民对食源性寄生虫病的认识 |
| 5.2.6 完善管理体制建设 6 建议与对策 |
| 6.1 技术层面 |
| 6.1.1 开展大规模全国性的、深入的流行病学调查,摸清本底 |
| 6.1.2 加大我国重要食源性寄生虫病检测与防控技术研究 |
| 6.2 政策与管理层面 |
| 6.2.1 设立重要病种参考实验室与工作实验室 |
| 6.2.2 建立完备及完善的监测、预警网络信息系统及上报制度 |
| 6.2.3 加强媒体教育 |
（3）豆状带绦虫不同发育阶段的结构特征及其致病机理的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 带科绦虫不同发育阶段的结构研究进展 |
| 1 猪带绦虫及其幼虫的结构特点 |
| 1.1 猪带绦虫及六钩蚴的结构特点 |
| 1.2 猪囊尾蚴的结构特点 |
| 2 牛带绦虫及其幼虫的结构特点 |
| 2.1 牛带绦虫与六钩蚴结构特点 |
| 2.2 牛囊尾蚴的结构特点 |
| 3 豆状带绦虫的结构特点 |
| 3.1 豆状带绦虫的结构 |
| 3.1.1 豆状带绦虫的组织结构 |
| 3.1.2 豆状带绦虫的超微结构 |
| 3.2 豆状囊尾蚴的结构 |
| 3.2.1 豆状囊尾蚴的组织结构 |
| 3.2.2 豆状囊尾蚴的超微结构 |
| 3.3 六钩蚴的结构 |
| 3.3.1 六钩蚴的小钩 |
| 3.3.2 六钩蚴的肌肉系统 |
| 3.3.3 六钩蚴的破壳与侵袭 |
| 第二章 囊尾蚴病的研究进展 |
| 1 猪囊尾蚴病概述 |
| 2 牛囊尾蚴病概述 |
| 3 兔豆状囊尾蚴病概述 |
| 本研究的目的和意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 豆状带绦虫及其六钩蚴结构的观察 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 仪器与设备 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 动物模型建立与样品采集 |
| 1.3.2 电镜样品的制备与观察 |
| 1.3.3 石蜡切片的制备与观察 |
| 2 结果 |
| 2.1 豆状带绦虫的超微结构 |
| 2.1.1 头节 |
| 2.1.2 颈节 |
| 2.1.3 成节 |
| 2.1.4 孕节 |
| 2.2 豆状带绦虫六钩蚴的超微结构 |
| 2.2.1 六钩蚴的外膜 |
| 2.2.3 六钩蚴的小钩 |
| 2.3 豆状带绦虫的组织结构 |
| 2.3.1 头节 |
| 2.3.2 颈节 |
| 2.3.3 成节 |
| 2.3.4 孕节 |
| 3 讨论 |
| 3.1 成虫的超微结构 |
| 3.2 六钩蚴的超微结构 |
| 3.3 成虫的组织结构 |
| 4 小结 |
| 附图 1：豆状带绦虫及其六钩蚴结构 |
| 第二章 兔豆状囊尾蚴结构的观察 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 仪器与设备 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 动物模型建立与样品采集 |
| 1.3.2 电镜样品的制备与观察 |
| 1.3.3 石蜡切片的制作与观察 |
| 2 结果 |
| 2.1 豆状囊尾蚴的超微结构 |
| 2.1.1 头节 |
| 2.1.2 颈节 |
| 2.1.3 囊壁 |
| 2.2 豆状囊尾蚴的组织结构 |
| 2.2.1 囊壁 |
| 2.2.2 囊腔 |
| 2.2.3 虫体 |
| 3 讨论 |
| 3.1 豆状囊尾蚴的超微结构 |
| 3.1.1 囊壁 |
| 3.1.2 虫体 |
| 3.2 豆状囊尾蚴的组织结构 |
| 3.2.1 囊壁 |
| 3.2.2 虫体 |
| 4 小结 |
| 附图 2：兔豆状囊尾蚴结构 |
| 第三章 家兔实验性豆状囊尾蚴病不同感染时期病变规律的研究 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试剂与设备 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 建立感染模型 |
| 1.4 样品采集 |
| 1.5 切片制备 |
| 2 结果 |
| 2.1 临床症状 |
| 2.2 病理学变化 |
| 2.2.1 大体剖检变化 |
| 2.2.2 病理组织学变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 感染方法 |
| 3.2 临床症状 |
| 3.3 实质器官的病理变化 |
| 4 小结 |
| 附图 3：家兔人工感染豆状囊尾蚴后病理组织学变化 |
| 第四章 家兔实验性豆状囊尾蚴病不同感染时期的血液病理学研究 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂与设备 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 建立感染模型 |
| 1.4 病料采集 |
| 2 结果 |
| 2.1 中性粒细胞的变化结果 |
| 2.2 淋巴细胞的变化结果 |
| 2.3 单核细胞的变化结果 |
| 2.4 嗜酸性粒细胞的变化结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 中性粒细胞的变化 |
| 3.2.2 淋巴细胞的变化 |
| 3.2.3 单核细胞的变化 |
| 3.2.4 嗜酸性粒细胞的变化 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 附件 1 透射电镜超薄切片的制作方法 |
| 附件 2 石蜡切片的制作方法 |
| 附件 3 HE.染色法 |
| 附件 4 MASSON 氏三色染色法 |
| 附件 5 LANGHAN 氏碘染色法 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 导师简介 |
（4）囊尾蚴病多期复合基因疫苗的构建及免疫效应评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录 A 英中文术语缩略语对照表 |
| 附录 B 常用试剂配制 |
| 附录 C 个人简历及发表论文 |
| 附录 D 综述 |
| 参考文献 |
（5）猪囊尾蚴pVAX1-AgB重组质粒的免疫效果研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 研究目的意义 |
| 1.2 猪囊尾蚴疫苗的研究进展 |
| 1.3 提高囊虫病疫苗的免疫保护水平的策略 |
| 第2章 猪囊尾蚴AgB 基因的克隆、原核表达及纯化 |
| 2.1 材料和试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 猪囊尾蚴AgB 基因真核表达载体的构建及质粒的大量提取 |
| 3.1 材料和试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 重组质粒pVAX1-AgB 对小鼠的免疫效果研究 |
| 4.1 材料和试剂 |
| 4.2 小鼠免疫试验 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第5章 重组质粒pVAX1-AgB 和 AgB 重组蛋白对猪的免疫效果比较- |
| 5.1 材料和试剂 |
| 5.2 猪免疫试验 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 第6章 研究结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）我国重大动物疫病区划研究（论文提纲范文）
| 摘要 Abstract 第一章 绪论 |
| 1.1 区域管理理论发展 |
| 1.2 农业区划的主要理论和方法 |
| 1.2.1 农业区划的主要理论 |
| 1.2.2 农业区划的一般分区方法 |
| 1.3 国内外动物疫病区域化管理现状 |
| 1.3.1 国外动物疫病区域化管理现状 |
| 1.3.2 我国动物疫病区域化管理的实践 |
| 1.3.3 动物疫病区域化管理研究进展 |
| 1.4 研究目标和内容 |
| 1.4.1 研究目标 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.5 研究方法和技术路线 |
| 1.5.1 研究方法 |
| 1.5.2 技术路线 第二章 我国重大动物疫病流行特点和防制现状分析 |
| 2.1 我国动物疫病流行情况 |
| 2.1.1 我国动物疫病分类 |
| 2.1.2 我国动物疫病发生情况 |
| 2.1.3 我国动物疫病流行原因分析 |
| 2.2 我国动物防疫体系现状 |
| 2.2.1 动物防疫法律体系建设情况 |
| 2.2.2 国家动物防疫管理体系 |
| 2.3 我国动物防疫主要技术手段 |
| 2.3.1 动物防疫的基本内容 |
| 2.3.2 动物防疫主要技术手段 |
| 2.4 我国动物防疫体系存在的主要问题 |
| 2.5 本章小结 第三章 动物疫病区划方法体系研究 |
| 3.1 动物疫病的分区依据和原则 |
| 3.1.1 动物疫病的分区依据 |
| 3.1.2 动物疫病分区的原则 |
| 3.2 动物疫病分区方法和指标体系 |
| 3.2.1 动物疫病区划方法 |
| 3.2.2 动物疫病区划指标体系 |
| 3.2.3 动物疫病流行指数 |
| 3.2.4 动物疫病区划步骤 |
| 3.3 本章小结 第四章 我国重大动物疫病综合区划 |
| 4.1 我国重大动物疫病区划指标的确定 |
| 4.2 我国重大动物疫病区划 |
| 4.3 我国重大动物疫病综合区划区域特征分析 |
| 4.3.1 动物疫病洁净区 |
| 4.3.2 动物疫病散发区 |
| 4.3.3 动物疫病中度流行区 |
| 4.3.4 动物疫病较重流行区和严重流行区 |
| 4.4 重大动物疫病区域化防控措施 |
| 4.5 本章小结 第五章 我国主要重大动物疫病防控区划 |
| 5.1 口蹄疫防控区划 |
| 5.1.1 口蹄疫概况 |
| 5.1.2 国外口蹄疫流行及防制情况 |
| 5.1.3 我国口蹄疫流行规律与防控区划 |
| 5.1.4 我国口蹄疫区域化防控措施 |
| 5.1.5 口蹄疫区域化扑灭计划 |
| 5.2 禽流感防控区划 |
| 5.2.1 疫病基本情况 |
| 5.2.2 国外流行及防制情况 |
| 5.2.3 国内禽流感流行规律与防控区划 |
| 5.2.4 我国禽流感区域化防控措施 |
| 5.2.5 禽流感区域化扑灭计划 |
| 5.3 新城疫防控区划 |
| 5.3.1 流行特点 |
| 5.3.2 国外流行及防制情况 |
| 5.3.3 我国新城疫流行规律与防控区划 |
| 5.3.4 我国新城疫区域化防控措施 |
| 5.3.5 新城疫区域化扑灭计划 |
| 5.4 猪瘟防控区划 |
| 5.4.1 疫病基本情况 |
| 5.4.2 国外流行及防治情况 |
| 5.4.3 我国国猪瘟流行规律与防控区划 |
| 5.4.4 我国猪瘟病区域化防控措施 |
| 5.4.5 猪瘟病区域化扑灭计划 |
| 5.5 猪蓝耳病防控区划 |
| 5.5.1 疫病基本情况 |
| 5.5.2 国外流行及防制情况 |
| 5.5.3 我国猪蓝耳病流行规律与防控区划 |
| 5.5.4 我国猪蓝耳病区域化防控措施 |
| 5.5.5 猪蓝耳病区域化扑灭计划 |
| 5.6 本章小结 第六章 我国无规定动物疫病区管理 |
| 6.1 无规定动物疫病区建设的重要性和必要性 |
| 6.1.1 动物疫病区域化管理是国际通行做法 |
| 6.1.2 疫病区域化管理是促进动物性产品国际贸易的必然选择 |
| 6.1.3 我国动物疫病区域化管理已取得明显成效 |
| 6.1.4 我国动物疫病区域化管理存在的主要问题 |
| 6.2 我国无规定动物疫病区建设 |
| 6.2.1 海南省无规定动物疫病示范区建设 |
| 6.2.2 吉林省无规定动物疫病示范区建设 |
| 6.2.3 辽东半岛无规定动物疫病示范区建设 |
| 6.2.4 山东省无规定动物疫病示范区建设 |
| 6.2.5 四川省无规定动物疫病示范区建设 |
| 6.2.6 重庆市无规定动物疫病示范区建设 |
| 6.3 我国无规定动物疫病区管理政策 |
| 6.4 本章小结 第七章 研究结论与展望 |
| 7.1 研究结论 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 研究展望 参考文献 致谢 作者简介 |
（7）猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的原核表达及生物学特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 猪囊尾蚴病的诊断与防治研究进展 |
| 1.1 猪囊尾蚴病概述 |
| 1.1.1 猪囊尾蚴病的流行病学 |
| 1.1.2 猪带绦虫生活史 |
| 1.1.3 猪囊尾蚴病的危害 |
| 1.2 猪囊虫病诊断的研究进展 |
| 1.2.1 猪囊尾蚴病诊断方法的研究进展 |
| 1.2.2 猪囊尾蚴病诊断抗原的研究进展 |
| 1.3 猪囊尾蚴病防治的研究进展 |
| 1.3.1 猪囊尾蚴病的治疗 |
| 1.3.2 猪囊尾蚴病的免疫预防 |
| 第二章 寄生虫半胱氨酸蛋白酶的研究进展 |
| 2.1 寄生虫半胱氨酸蛋白酶的来源及存在的部位 |
| 2.2 寄生虫半胱氨酸蛋白酶的分泌机制 |
| 2.3 半胱氨酸蛋白酶在寄生虫免疫逃避，营养获得与移行方面的研究 |
| 2.3.1 半胱氨酸蛋白酶在寄生虫免疫逃避中的作用 |
| 2.3.2 半胱氨酸蛋白酶在寄生虫获取营养与移行中的作用 |
| 2.4 其他方面 |
| 2.4.1 半胱氨酸蛋白酶对寄生虫生殖力的影响 |
| 2.4.2 半胱氨酸蛋白酶在寄生虫脱包囊、脱鞘和羽化中的作用 |
| 2.4.3 半胱氨酸蛋白酶的免疫原性 |
| 试验研究 |
| 第三章 猪囊尾蚴TSCL-1 基因诱导表达条件的优化及表达蛋白的结构预测 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 重组质粒和菌种 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 仪器与设备 |
| 3.1.4 培养基和溶液的配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 重组质粒pGEX-4T-TsCL-1 诱导表达 |
| 3.2.2 表达产物的SDS-PAGE 检测 |
| 3.2.3 表达条件的优化 |
| 3.2.4 TsCL-1 基因编码蛋白组成及结构的预测 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 TsCL-1 基因表达产物SDS-PAGE 分析 |
| 3.3.2 不同诱导条件下重组蛋白诱导表达情况 |
| 3.3.3 猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶氨基酸组成分析 |
| 3.3.4 编码蛋白的三级结构预测 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TSCL-1 的纯化及其酶活分析 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 菌种和试剂 |
| 4.1.2 培养基和溶液的配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 GST- pGEX-4T-TsCL-1 高效表达产物的纯化 |
| 4.2.2 纯化蛋白的浓缩 |
| 4.2.3 纯化GST- pGEX-4T-TsCL-1 蛋白分析 |
| 4.2.4 重组表达蛋白的水解活性和抑制性检测 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 GST- pGEX-4T-TsCL-1 高效表达产物的纯化 |
| 4.3.2 纯化蛋白的浓缩结果 |
| 4.3.3 重组表达蛋白的水解活性和抑制性检测 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TSCL-1 免疫活性分析 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 抗原及实验动物 |
| 5.1.2 试剂和耗材 |
| 5.1.3 溶液 |
| 5.1.4 仪器设备 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 pGEX-4T-TsCL-1 融合蛋白的制备 |
| 5.2.2 蛋白含量的测定 |
| 5.2.3 抗体的制备 |
| 5.2.4 抗体效价的测定 |
| 5.2.5 pGEX-4T-TsCL-1 可溶性蛋白的Western blot 分析 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 蛋白含量 |
| 5.3.2 抗体的鉴定及效价测定 |
| 5.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）猪囊尾蚴TSOL18核酸疫苗表达载体构建、免疫原性及安全性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 第一章 文献综述 |
| 引言 |
| 1 猪囊尾蚴的概况 |
| 1.1 猪囊尾蚴的发展史 |
| 1.2 猪囊尾蚴的危害 |
| 2 猪囊尾蚴病的流行现状 |
| 2.1 国外流行现状 |
| 2.2 国内流行现状 |
| 3 猪囊尾蚴药物防治 |
| 4 猪囊尾蚴免疫预防研究进展 |
| 4.1 传统的疫苗研究 |
| 4.1.1 囊尾蚴虫体抗原疫苗 |
| 4.1.2 六钩蚴虫体抗原疫苗 |
| 4.1.3 异源性抗原 |
| 4.1.4 分泌/代谢抗原疫苗 |
| 4.2 新型猪囊尾蚴疫苗 |
| 4.2.1 猪囊尾蚴组织细胞苗 |
| 4.2.2 基因工程疫苗 |
| 4.2.3 核酸疫苗 |
| 4.2.4 多肽疫苗 |
| 4.2.5 其他新型疫苗的研究 |
| 5 展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 猪囊尾蚴TSOL18 核酸疫苗表达载体的构建及其免疫原性研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物与实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 重组表达质粒、菌株、引物和主要试剂 |
| 1.1.3 溶液 |
| 1.1.4 仪器与设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 引物的设计和合成 |
| 1.2.2 目的基因TSOL18 的获得 |
| 1.2.3 真核表达质粒的构建 |
| 1.2.4 重组质粒的提取与鉴定 |
| 1.2.5 序列测定及分析 |
| 1.3 间接免疫荧光试验 |
| 1.3.1 BHK-21 细胞的复苏与传代 |
| 1.3.2 BHK-21 细胞的转染 |
| 1.3.3 间接免疫荧光检测 |
| 1.3.4 SDS-PAGE 检测 |
| 1.3.5 Western blotting 检测 |
| 1.4 质粒大量提取 |
| 1.4.1 pVAX1/TSOL18 重组真核表达质粒的大量扩增 |
| 1.4.2 细菌的收获 |
| 1.4.3 质粒的大量提取（碱裂解法） |
| 1.5 动物免疫试验 |
| 1.5.1 动物免疫试验分组 |
| 1.5.2 间接ELISA 分别检测抗猪囊尾蚴抗体 |
| 1.5.3 T 淋巴细胞增殖试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 目的基因的获得 |
| 2.2 真核表达质粒的构建及鉴定 |
| 2.3 重组质粒的序列测定及分析 |
| 2.4 间接免疫荧光检测结果 |
| 2.5 SDS-PAGE 及Western blotting 检测结果 |
| 2.6 核酸疫苗表达载体免疫鼠血清抗体检测 |
| 2.7 核酸疫苗免疫鼠淋巴细胞转化试验 |
| 3 讨论 |
| 第三章 猪囊尾蚴核酸疫苗pVAX1/TSOL18 的安全性研究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物与材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 重组表达质粒、菌株、引物和主要试剂 |
| 1.2 溶液 |
| 1.3 仪器与设备 |
| 1.4 pVAX1/TSOL18 重组表达质粒的大量提取 |
| 1.4.1 pVAX1/TSOL18 重组真核表达质粒的大量扩增 |
| 1.4.2 细菌的收获 |
| 1.4.3 质粒的大量提取（碱裂解法） |
| 1.5 试验动物及其分组 |
| 1.6 临床观察 |
| 1.7 免疫鼠组织DNA 的提取 |
| 1.7.1 组织中动物基因组提取 |
| 1.7.2 粪便中动物基因组提取 |
| 1.8 pVAX1/TSOL18 重组表达质粒在小鼠体内的残留时间和分布范围 |
| 2 结果 |
| 2.1 pVAX1/TSOL18 重组表达质粒的大量提取 |
| 2.2 临床观察 |
| 2.3 基因组的DNA 提取 |
| 2.4 pVAX1/TSOL18 重组质粒在小鼠体内的残留时间及分布范围 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究结论 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（9）表达TsoL18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 第一章 文献综述 |
| 一 猪带绦虫/囊尾蚴病研究进展 |
| 1.1 猪带绦虫/囊尾蚴病概述 |
| 1.2 猪带绦虫病和囊尾蚴病的流行现状及危害 |
| 1.2.1 流行现状 |
| 1.2.2 囊尾蚴病所导致的经济损失 |
| 1.3 国内外研究进展 |
| 1.3.1 传统的疫苗研究 |
| 1.3.2 猪囊尾蚴组织细胞疫苗 |
| 1.3.3 基因工程重组抗原疫苗 |
| 1.3.4 核酸疫苗 |
| 1.3.5 多肽疫苗 |
| 1.3.6 其他新型疫苗的研究 |
| 1.4 猪囊尾蚴病免疫诊断技术研究进展 |
| 1.4.1 囊尾蚴病常用辅助检查 |
| 1.4.2 囊尾蚴病免疫诊断技术 |
| 二 减毒沙门氏菌作为口服疫苗载体的研究进展 |
| 1.5 沙门氏菌进入机体免疫系统的可能机制 |
| 1.5.1 沙门氏菌通过粘膜上皮M 细胞进入机体 |
| 1.5.2 沙门氏菌被树突细胞直接从肠腔摄取进入机体 |
| 1.5.3 减毒的胞内菌作为DNA 疫苗载体具有很多的优势 |
| 1.5.4 减毒沙门氏菌作为口服疫苗载体潜在的危险性 |
| 参考文献 |
| 第二章 Tsol18 基因的克隆、优化表达及高免血清的制备 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌种和试剂 |
| 2.1.2 仪器与设备 |
| 2.1.3 培养基 |
| 2.1.4 溶液的配制 |
| 2.1.5 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 猪带绦虫虫卵的活化 |
| 2.2.2 六钩蚴总RNA 的提取 |
| 2.2.3 Tsol18 基因的RT-PCR 扩增 |
| 2.2.4 pGEX-4T-Tsol18 表达载体的构建 |
| 2.2.5 重组质粒的诱导表达 |
| 2.2.6 表达产物的检测 |
| 2.2.7 表达产物的表达形式分析 |
| 2.2.8 表达蛋白纯化和稳定性分析 |
| 2.2.9 Tsol18 高免血清的制备 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 Tsol18 的 RT-PCR 扩增 |
| 2.3.2 表达载体的鉴定与序列分析 |
| 2.3.3 表达产物的检测 |
| 2.3.4 表达蛋白纯化和稳定性分析 |
| 2.3.5 免疫兔血清的效价 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 选择Tsol18 作为免疫保护基因的原因 |
| 2.4.2 Tsol18 的表达形式和稳定性 |
| 第三章 表达猪带绦虫六钩蚴 Tsol18 抗原的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株的构建 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 菌种和质粒 |
| 3.1.2 实验动物 |
| 3.1.3 主要试剂和耗材 |
| 3.1.4 培养基 |
| 3.1.5 溶液的配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 TsoL18 目的基因的制备 |
| 3.2.2 pYA3341-Tsol18 重组质粒的构建和筛选 |
| 3.2.3 pYA3341-Tsol18 重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X3730 和X4550 |
| 3.2.4 X4550（pYA3341-Tsol18）重组菌表达蛋白的测定 |
| 3.2.5 重组菌的体外稳定性试验 |
| 3.2.6 重组菌生长曲线的测定 |
| 3.2.7 重组菌的安全性试验 |
| 3.2.8 重组疫苗免疫效果评价 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 Tsol18 目的基因的制备 |
| 3.3.2 pYA3341-Tsol18 重组质粒的鉴定 |
| 3.3.3 Tsol18 重组蛋白的表达及 Westren blot 分析 |
| 3.3.4 重组菌X4550（pYA3341-Tsol18）的体外稳定性 |
| 3.3.5 重组菌生长曲线的测定 |
| 3.3.6 重组菌的安全性实验 |
| 3.3.7 免疫小鼠血清抗Tsol18 抗体的检测 |
| 3.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（10）猪囊尾蚴10kD基因的克隆、表达及重组蛋白ELISA方法的建立（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 缩略词表 |
| 摘要 |
| 文献综述 |
| 综述一 猪带绦虫 |
| 1. 猪带绦虫的起源 |
| 2. 猪带绦虫及其幼虫（囊尾蚴）的研究历史 |
| 3. 猪带绦虫成虫、幼虫（囊尾蚴）及虫卵 |
| 4. 猪带绦虫生活史 |
| 5、流行病学 |
| 6. 症状 |
| 7. 病变 |
| 8. 囊尾蚴病的危害 |
| 综述二 囊尾蚴病免疫预防 |
| 1. 虫体抗原疫苗 |
| 2. 合成疫苗 |
| 3. 结论与讨论 |
| 综述三 囊尾蚴病诊断研究进展 |
| 1. 病原学检测 |
| 2. 抗原检测 |
| 3. 抗体检测 |
| 4. 结论与讨论 |
| 试验一 猪囊尾蚴10kD 基因在大肠杆菌中的克隆及序列分析 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果与分析 |
| 3. 结论与讨论 |
| 试验二 猪囊尾蚴10KD 基因编码蛋白在大肠杆菌中的表达、鉴定及纯化 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果与分析 |
| 3. 结论与讨论 |
| 试验三 10kD重组蛋白抗体检测方法的初步建立 |
| 1. 材料和方法 |
| 2. 结果与分析 |
| 3. 结论与讨论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
四、猪囊尾蚴细胞疫苗区域试验报告（论文参考文献）
- [1]猪带绦虫HSP70-4真核表达及其免疫佐剂效应研究[D]. 殷静. 中国农业科学院, 2016(02)
- [2]我国的食源性寄生虫病及其相关研究进展[J]. 刘明远,刘全,方维焕,尹继刚,王学林,李建华,姜宁,张西臣,白雪,吴秀萍. 中国兽医学报, 2014(07)
- [3]豆状带绦虫不同发育阶段的结构特征及其致病机理的研究[D]. 范希萍. 甘肃农业大学, 2013(07)
- [4]囊尾蚴病多期复合基因疫苗的构建及免疫效应评价[D]. 齐文娟. 蚌埠医学院, 2011(01)
- [5]猪囊尾蚴pVAX1-AgB重组质粒的免疫效果研究[D]. 巩伟. 新疆农业大学, 2010(06)
- [6]我国重大动物疫病区划研究[D]. 李滋睿. 中国农业科学院, 2010(10)
- [7]猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的原核表达及生物学特性研究[D]. 宋军科. 西北农林科技大学, 2010(11)
- [8]猪囊尾蚴TSOL18核酸疫苗表达载体构建、免疫原性及安全性研究[D]. 刘斌. 甘肃农业大学, 2008(09)
- [9]表达TsoL18抗原的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建[D]. 陈晓宇. 甘肃农业大学, 2008(09)
- [10]猪囊尾蚴10kD基因的克隆、表达及重组蛋白ELISA方法的建立[D]. 鲁琨. 河南农业大学, 2008(07)