Cyclin D1反义寡脱氧核苷酸对胃癌细胞G_1期调节因子生长和表达的影响

一、Effects of Cyclin D1 Antisense Oligodeoxyneucleotides on the Growth and Expression of G_1 Phase Regulators in Gastric Carcinoma Cells（论文文献综述）

张海容^[1]（2021）在《LncRNA-cCSC1调控结直肠癌细胞增殖的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:探讨lncRNA-cCSC1调控结直肠癌细胞增殖的作用及其机制。方法:利用TCGA与GEPIA数据库分析结直肠癌患者中lncRNA-cCSC1的表达水平。对比正常的结肠上皮细胞（NCM460）,在常用的结直肠癌细胞株（SW480、SW620、HT29、HCT116）中测定lncRNA-cCSC1的表达水平,筛选表达量相对高的两个细胞株,并构建慢病毒稳转株,分为敲低组（sh-cCSC1）及敲低空载组（sh-Control）、过表达组（oe-cCSC1）及过表达空载组（oe-Control）。用miR-124-3p模拟物（mimics）和抑制剂（inhibitor）分别构建miR-124-3p的过表达和敲低水平,mimics空载（mimics NC）和inhibitor空载（inhibitor NC）分别作为相应的对照组。运用DIANA TOOLS和star Base2.0数据库进行生物信息学分析筛选lncRNA-cCSC1调控的下游分子miRNA,并用star Base2.0数据库分析miRNA调控的靶基因。双荧光素酶报告基因实验（luciferase reporter assay）验证lncRNA-cCSC1与下游分子miR-124-3p的结合、miR-124-3p与CD44的结合及它们之间的竞争性内源RNA（ceRNA）机制。进一步通过拯救实验,将oe-cCSC1与mimics或mimics NC共转染、sh-cCSC1与inhibitor或inhibitor NC共转染,探讨lncRNA-cCSC1的下游分子miR-124-3p在结直肠癌细胞增殖中的作用及miR-124-3p作用下对lncRNA-cCSC1调控CD44的影响。CCK-8、克隆形成、流式细胞术和EdU实验检测lncRNA-cCSC1调控结直肠癌细胞增殖的生物学功能。RT-PCR测定目的基因表达情况。Western Blot测定增殖有关蛋白CDK2、Cyclin D1、CDK4和Cyclin E1以及蛋白CD44的表达情况。结果:（1）通过GEPIA和TCGA数据库分析结果显示,lncRNA-cCSC1在结直肠癌组织中显着上调（P<0.05）。同时,RT-PCR结果显示人类结直肠癌细胞株中lncRNA-cCSC1的表达水平较NCM460细胞明显增高,且HCT116和HT29表达量相对较高。我们首先在结直肠癌细胞HCT116和HT29中过表达和敲低lncRNA-cCSC1,用RT-PCR检测转染效率,结果显示:与oe-Control组相比,oe-cCSC1组lncRNA-cCSC1的表达水平显着升高（P<0.01）;与sh-Control组相比,sh-cCSC1组lncRNA-cCSC1的表达量显着下降（P<0.01）。同时,上述检测lncRNA-cCSC1调控结直肠癌细胞增殖的生物学功能实验,结果发现:在HCT116和HT29细胞中,与oe-Control组相比,oe-cCSC1组的CCK-8实验结果发现细胞增殖活力明显上升（P<0.05）;细胞克隆形成能力得到增强（P<0.01）;EdU实验检测细胞增殖显示oe-cCSC1组EdU阳性细胞的比例明显增多（P<0.01）;细胞周期发现oe-cCSC1组G1期细胞占比明显降低,S期细胞占比相对增加（P<0.05）;Western Blot结果显示oe-cCSC1组增殖相关蛋白CDK2、CDK4、Cyclin D1和Cyclin E1表达上调（P<0.01）。与上述相反的是,与sh-Control组相比,sh-cCSC1组的CCK-8实验结果显示细胞增殖活力减慢（P<0.05）;细胞周期结果提示sh-cCSC1组G1期细胞占比明显增多,S期细胞占比相对减少（P<0.05）;细胞克隆形成能力相对下降（P<0.01）;EdU实验显示EdU阳性细胞的比例大大降低（P<0.01）;Western Blot结果表明sh-cCSC1组细胞增殖相关蛋白CDK2、CDK4、Cyclin D1和Cyclin E1蛋白的表达减少（P<0.01）。（2）通过使用DIANA TOOLS以及star Base2.0数据库对lncRNA-cCSC1与CD44共同作用的miRNA进行预测,取得交集后发现lncRNA-cCSC1调控的下游miRNA共有5个,分别为miR-124-3p、miR-506-3p、miR-2114-3p、miR-450b-5p、miR-4766-5p。RT-PCR检测各miRNA的表达量,结果显示在HCT116和HT29细胞系中敲低lncRNA-cCSC1后,miR-124-3p表达水平均增加（P<0.01）。随后,经双荧光素酶实验和RT-PCR进一步验证,发现miR-124-3p是lncRNA-cCSC1的下游分子。同时,双荧光素酶实验还发现miR-124-3p与下游靶基因CD44的结合及lncRNA-cCSC1通过吸附miR-124-3p释放靶基因CD44的作用。RT-PCR结果显示:与sh-Control相比,sh-cCSC1组miR-124-3p的表达量升高,CD44表达降低;与oe-Control组相比,oe-cCSC1时miR-124-3p的表达量降低,CD44表达升高（P<0.01）。采用miR-124-3p的抑制剂和模拟物共表达处理后,与sh-cCSC1+inhibitor NC组相比,sh-cCSC1+inhibitor组miR-124-3p的表达量降低,CD44表达升高;与oe-cCSC1+mimics NC组相比,oe-cCSC1+mimics组miR-124-3p的表达量升高,CD44表达降低（P<0.01）。此外,lncRNA-cCSC1调控结直肠癌细胞增殖受miR-124-3p的影响,相关结果显示:与oe-cCSC1+mimics NC组相比,oe-cCSC1+mimics组CCK-8结果表明细胞增殖活力降低（P<0.05）;EdU实验显示EdU阳性细胞的比例大大降低（P<0.01）;Western Blot结果显示,加入miR-124-3p mimics显着逆转了oe-cCSC1对CDK2、CDK4、Cyclin D1、Cyclin E1增殖相关蛋白及靶基因CD44蛋白的促进作用（P<0.01）。而与sh-cCSC1+inhibitor NC组相比,sh-cCSC1+inhibitor组则产生相反的作用,即加入miR-124-3p抑制剂逆转了lncRNA-cCSC1敲低对结直肠癌细胞增殖的抑制作用。结论:本研究结果提示,lncRNA-cCSC1可能是通过海绵结合miR-124-3p和上调CD44从而促进结直肠癌细胞的增殖。

张玺^[2]（2020）在《苦参碱抗肿瘤作用分子机制研究》文中研究指明背景:卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌。由于早期无明显症状,缺乏有效的早期检测筛查手段,约70%患者在诊断时已是晚期。目前,手术联合化疗是卵巢恶性肿瘤的主要治疗手段,但化疗对患者身体毒副作用大,且容易复发并产生耐药性。磷酸化是目前研究最广泛的翻译后修饰（post-translational modifications,PTMs）,能够调节细胞生长、分化、凋亡等多种细胞功能。磷酸化信号通路的改变与癌症密切相关,同时它们也可作为抗癌药物开发的潜在靶点。蛋白质组学研究表明,由磷酸化等蛋白翻译后修饰介导的信号通路在卵巢癌的发生和耐药过程中起着关键作用。苦参碱是从中药苦参中提取的有效生物活性成分,具有广泛的生物学活性,比如抗炎、抗病毒、抗癌、镇痛、抗菌、抗氧化、降血脂、抗肝纤维化等。大量研究表明,苦参碱在肺癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌等多种类型的癌症中具有明确的抗癌效果。然而,苦参碱对卵巢癌的影响及其潜在的分子机制尚未见报道。目的:本研究旨在探究苦参碱对卵巢癌的作用及其分子机理,为苦参碱作为新型抗癌药物的深入研究提供线索和依据。方法:1.MTT法和平板克隆形成实验检测苦参碱对卵巢癌细胞A2780、SKOV3和卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP增殖能力的影响。2.流式细胞术检测苦参碱对卵巢癌细胞A2780、SKOV3和卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP细胞周期和凋亡的影响。3.透射电子显微镜和荧光显微镜观察苦参碱对卵巢癌细胞A2780、SKOV3和卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP自噬的影响。4.划痕实验、Transwell侵袭实验和免疫荧光技术评估苦参碱对卵巢癌细胞A2780、SKOV3和卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP细胞迁移和侵袭的影响。5.体外血管生成试验探讨苦参碱对肿瘤血管生成的影响。6.酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测苦参碱对卵巢癌细胞A2780、SKOV3分泌血管内皮生成因子VEGFA的影响。7.逆转录-聚合酶链反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）检测苦参碱对血管内皮生成因子VEGFA和血管生成素ANG-1m RNA水平的影响。8.Western blot检测苦参碱对卵巢癌细胞A2780、SKOV3增殖、凋亡、自噬、迁移和侵袭、血管生成相关蛋白的表达及肿瘤相关磷酸化信号通路的影响。9.分别建立卵巢癌细胞A2780和卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP裸鼠皮下移植瘤和尾静脉小鼠模型,定期腹腔注射苦参碱,观察苦参碱对体内卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响。10.苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin,H&E）染色观察苦参碱对小鼠肿瘤组织坏死、肿瘤转移及肝脏损伤的影响;末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记技术（terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL）染色观察苦参碱对小鼠肿瘤组织凋亡的影响。11.Western blot分别检测苦参碱对卵巢癌细胞A2780和小鼠肿瘤组织总的蛋白质磷酸化水平的影响以及肿瘤组织中增殖、凋亡、自噬、迁移和侵袭、血管生成相关信号通路蛋白磷酸化水平的影响。12.免疫组织化学技术（Immunohistochemistry,IHC）进一步验证苦参碱对小鼠肿瘤组织中信号通路蛋白磷酸化水平的影响。13.全自动生化分析仪测定小鼠血清中丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）和天冬氨酸转氨酶（aspartic aminotransferase,AST）含量,评估苦参碱对小鼠肝功能的影响。结果:1.苦参碱抑制卵巢癌细胞A2780和SKOV3增殖,且呈浓度和时间依赖性。2.苦参碱阻滞卵巢癌细胞A2780和SKOV3细胞周期在G0/G1期,上调p21蛋白表达,下调cyclin D1和CDK4蛋白表达;同时降低ERK1/2和MEK1/2蛋白磷酸化水平。3.苦参碱诱导卵巢癌细胞A2780和SKOV3发生凋亡,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达;同时降低PI3K和Akt蛋白磷酸化水平。4.苦参碱诱导卵巢癌细胞A2780和SKOV3自噬,上调LC3-II蛋白表达,下调SQSTM1蛋白表达;同时降低Akt和m TOR蛋白磷酸化水平。5.苦参碱抑制卵巢癌细胞A2780和SKOV3迁移和侵袭,降低FAK和Rho A蛋白活性及磷酸化水平。6.苦参碱抑制卵巢癌细胞对血管生成的促进作用,降低卵巢癌细胞A2780和SKOV3分泌VEGFA水平,同时降低卵巢癌A2780和SKOV3细胞中VEGFA m RNA和蛋白表达水平。7.苦参碱降低HUVEC/A2780和HUVEC/SKOV3共培养体系中内皮细胞HUVECs中ANG-1 m RNA和蛋白表达水平,同时下调VEGFR2和Tie2蛋白磷酸化水平。8.苦参碱抑制卵巢癌细胞A2780体内肿瘤增殖和转移能力,降低卵巢癌细胞和肿瘤组织中总的蛋白质磷酸化水平。9.Western blot和IHC结果表明,苦参碱下调肿瘤组织中信号通路相关蛋白ERK1/2、MEK1/2、PI3K、Akt、m TOR、FAK、Rho A、VEGFR2、Tie2蛋白磷酸化水平。10.苦参碱对肝脏组织无损伤作用,对小鼠血清中ALT和AST含量变化无显着影响。11.苦参碱抑制卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP细胞增殖,诱导细胞凋亡和自噬,抑制细胞迁移和肿瘤血管生成。12.苦参碱抑制卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP体内肿瘤增殖和转移能力。结论:苦参碱能够抑制卵巢癌细胞A2780、SKOV3和卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP细胞增殖、诱导细胞凋亡和自噬、抑制细胞迁移和侵袭、抑制肿瘤血管生成,同时降低ERK1/2、MEK1/2、PI3K、Akt、m TOR、FAK、Rho A、VEGFR2和Tie2蛋白磷酸化水平。苦参碱通过抑制肿瘤相关磷酸化信号通路调控细胞增殖、凋亡、自噬、迁移和侵袭、血管生成,从而抑制卵巢癌的发生发展。背景:近几十年来,分子靶向治疗已在许多癌症类型的临床治疗中取得了良好的疗效,如乳腺癌、胃癌、结肠癌、肺癌和卵巢癌等。确定理想的靶点是肿瘤分子靶向治疗成功的关键。分子靶向治疗的靶点可作用于细胞表面抗原、受体和生长因子,能够调控细胞增殖和转移、细胞周期和血管生成相关信号转导通路。靶向治疗可与过表达的分子结合,调节该分子调控的信号转导通路,从而抑制肿瘤细胞增殖,最终导致细胞死亡。原癌基因c-Src（Src）是一种非受体酪氨酸激酶,与多种人类癌症的发生、维持、进展和转移扩散密切相关。Src通过与多种蛋白和蛋白复合物相互作用并使其磷酸化,在细胞信号传导过程中起关键作用。苦参碱是从传统中药苦参中提取的生物碱之一,具有抗炎、抗肿瘤和抗纤维化等广泛的药理学活性。研究表明,苦参碱对多种癌症类型包括肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、白血病等均具有抗肿瘤活性。苦参碱发挥抗肿瘤作用主要是通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡和自噬、抑制肿瘤细胞迁移和侵袭、抑制血管生成等途径实现的。目前,有关苦参碱抗肿瘤作用的研究颇为广泛,然而其发挥抗癌活性的直接作用靶点尚未见报道。目的:本研究旨在寻找苦参碱抑制癌细胞增殖的分子靶点并探讨其作用机制,为开发肿瘤靶向药物提供实验依据。方法:1.选取人结肠癌细胞HT-29、人乳腺癌细胞MCF7、人非小细胞肺癌细胞A549、人胰腺癌细胞Bx PC-3、人卵巢癌细胞SKOV3、人宫颈癌细胞He La六种癌细胞为研究对象,MTT法检测苦参碱对癌细胞增殖能力的影响。2.分别建立人非小细胞肺癌细胞A549、人胰腺癌细胞Bx PC-3、人卵巢癌细胞SKOV3皮下移植瘤模型,定期腹腔注射苦参碱或生理盐水,观察苦参碱对体内肿瘤增殖能力的影响。3.以槐果碱和乙醇胺为原料进行化学反应,合成苦参碱修饰物13α-（2-氨基）乙氧基苦参碱。红外光谱和质谱对13α-（2-氨基）乙氧基苦参碱进行结构表征。4.13α-（2-氨基）乙氧基苦参碱与氨基偶联树脂进行偶联反应,制备苦参碱偶联树脂。紫外-可见光吸收光谱检测偶联反应前后13α-（2-氨基）乙氧基苦参碱浓度变化,间接反映偶联反应效率。5.提取卵巢癌细胞SKOV3总蛋白,利用苦参碱偶联树脂进行Pull down实验,考马斯亮蓝染色寻找苦参碱特异性结合蛋白。液相色谱-串联质谱法（Liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS）鉴定苦参碱特异性结合蛋白。6.细胞热转变分析（Cellular thermal shift assay,CETSA）实验验证苦参碱作用靶点;构建GST-Src重组蛋白,Pull down实验进一步验证苦参碱作用靶点。7.构建Src分段质粒,转染HEK293T细胞,Pull down实验验证苦参碱结合区域。8.构建GST-Kinase重组蛋白,Western blot进一步验证苦参碱结合区域。9.采用Discovery Studio 4.5软件,分子对接苦参碱与Src激酶结构域,探究苦参碱结合Src激酶结构域的氨基酸。10.选取苦参碱最佳作用浓度处理癌细胞,测定苦参碱对癌细胞中Src激酶活性的影响。11.Western blot分别检测苦参碱对MAPK/ERK、JAK2/STAT3、PI3K/Akt信号通路蛋白磷酸化水平的影响。结果:1.苦参碱抑制癌细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性。2.苦参碱抑制体内癌细胞增殖能力。3.化学合成苦参碱修饰物13α-（2-氨基）乙氧基苦参碱,产率为65%,红外光谱与质谱结构表征结果与13α-（2-氨基）乙氧基苦参碱结构一致。4.制备苦参碱偶联树脂,紫外-可见光吸收光谱检测偶联反应前后13α-（2-氨基）乙氧基苦参碱浓度,偶联反应效率为54%。5.利用苦参碱偶联树脂进行Pull down实验,考马斯亮蓝染色结果显示,分子量55-70 k Da之间有明显蛋白条带;且加入苦参碱后,此蛋白条带明显减弱,猜测此蛋白可能为苦参碱特异性结合蛋白。LC-MS/MS质谱定性分析发现,Src为苦参碱特异性结合蛋白。6.CETSA实验结果表明,与对照组相比,苦参碱处理组Src蛋白的热稳定性明显增强。同时,GST-Src重组蛋白进行Pull down实验,结果显示,苦参碱偶联树脂组检测到Src蛋白,且加入苦参碱后,Src蛋白明显减少,进一步证实Src为苦参碱作用靶点。7.分别构建Src分段质粒USH3、SH4-UD、SH3、SH2、Kinase,转染HEK293T细胞过表达后,提取总蛋白进行Pull down实验,Western blot结果分析显示,苦参碱结合Src激酶结构域。8.GST-Kinase重组蛋白进行Pull down实验,Western blot结果表明,苦参碱偶联树脂组检测到目的蛋白,且加入苦参碱后,目的蛋白明显减少,进一步证实Src激酶结构域为苦参碱结合区域。9.Discovery Studio 4.5软件预测苦参碱与Src激酶结构域3D分子对接情况,结果显示,苦参碱结合Src激酶结构域,主要作用可能是因为苦参碱与Ala392形成较强的氢键作用力;同时,苦参碱与周围氨基酸形成范德华力等其他作用力。10.苦参碱最佳作用浓度处理癌细胞后,细胞中Src激酶活性均显着降低。11.Western blot结果表明,苦参碱显着下调癌细胞中MAPK/ERK、JAK2/STAT3、PI3K/Akt信号通路蛋白磷酸化水平。结论:苦参碱抑制癌细胞增殖。苦参碱作用靶点为Src,Src激酶结构域为苦参碱结合区域。同时,苦参碱能够下调癌细胞中MAPK/ERK、JAK2/STAT3和PI3K/Akt信号通路蛋白磷酸化水平。因此,苦参碱通过靶向Src激酶结构域下调磷酸化信号通路进而抑制癌细胞增殖。

刘强^[3]（2020）在《基于Fas信号通路对姜黄素联合5-FU诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡作用机理的研究》文中认为一、研究背景胃癌（gastric cancer,GC）是临床上常见的消化系统恶性肿瘤,具有较高的发病率和死亡率,严重威胁到了人类的生命健康。目前,胃癌的主要治疗方法仍然是手术切除联合化疗,但由于现有的化疗药物对肿瘤的特异性不强,在杀死肿瘤细胞的同时会对正常细胞造成损伤,从而带来严重的毒副作用。因此,降低或消除化疗药物产生的毒副作用一直是临床上亟待解决的重要问题。众所周知,化疗药物的毒副作用与使用的剂量成正相关,如果在保证疗效的情况下,将具有增效作用而本身无毒的化合物与化疗药物联用,便可减少化疗药物的使用剂量,从而减少其毒副作用。氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）是临床上治疗胃癌等消化道恶性肿瘤最常用的经典化疗药物之一,其疗效显着、价格低廉。但胃癌患者使用该药后,容易出现恶心、呕吐、腹泻、口腔炎、胃炎等较为严重的胃肠道毒副反应,以及骨髓抑制等症状,严重影响患者的生活质量。因此。积极探索对5-FU具有减毒或增效的中药或中药有效成分是一件有重要意义的工作。姜黄素（curcumin,CUR）是来源于中草药植物姜黄的一种酚类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。近年来国内外多位研究者的体外实验研究表明,姜黄素对胃癌细胞具有生长抑制和诱导细胞凋亡的作用,另一方面,也有研究者通过一定剂量姜黄素与不同剂量5-FU联合作用于体外培养的胃癌SGC-7901细胞,结果显示姜黄素与5-FU具有协同抗肿瘤细胞的作用,姜黄素可以增强5-FU对SGC-7901细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,较低剂量5-FU与一定剂量的姜黄素联用后可以达到较高剂量5-FU的作用效果,但两药联用诱导SGC-7901细胞发生凋亡的具体作用机制还有待揭示。二、研究目的本课题将在细胞水平上观察CUR联合5-FU对胃癌SGC-7901细胞的影响,研究并验证CUR与5-FU联用在抑制胃癌SGC-7901细胞的生长和诱导该细胞凋亡的协同作用,了解CUR与5-FU联用对Fas介导死亡受体信号通路的影响,以初步揭示其发挥作用的可能机制,为临床上进行胃癌化疗时应用CUR来降低化疗药物5-FU的使用剂量、减少5-FU的毒副作用提供初步的理论依据。三、实验方法将胃癌SGC-7901细胞株接种到含9%新生牛血清1640培养基的培养瓶或培养皿中,置入二氧化碳培养箱,在37°C、5%CO2的条件下培养细胞,待进入对数生长期时,分别给予不同浓度梯度的CUR和5-FU共培养,使药物作用细胞24 h或48 h。然后采用下列不同的方法检测药物对胃癌SGC-7901细胞生长与凋亡影响的相关指标。1.采用MTT方法检测CUR和5-FU系列浓度对SGC-7901细胞生长的影响,计算出两种药物对SGC-7901细胞的半数抑制浓度（半数抑制率）IC50。2.采用MTT法检测CUR和5-FU对SGC-7901细胞生长的抑制作用,并计算细胞生长抑制率。3.采用平板克隆实验检测CUR和5-FU对SGC-7901细胞分裂增殖与克隆形成的影响。并计算细胞克隆形成率。4.采用荧光染料AO/EB双染法,在荧光显微镜下观察CUR和5-FU联用诱导胃癌SGC-7901细胞发生凋亡的形态学改变及其影响效应,并计算细胞凋亡率。5.采用基于Annexin V-FITC/PI双染的流式细胞术检测CUR和5-FU联用对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响,并计算细胞凋亡率。6.采用Western blot方法检测CUR和5-FU联用对SGC-7901细胞的死亡受体介导的凋亡通路关键蛋白Fas、FADD、caspase-8和caspase-3的表达水平。四、结果1.MTT实验结果显示,CUR和5-FU对胃癌SGC-7901细胞的IC50分别为44.08μM和60.13μM。2.MTT实验结果显示,各实验组CUR和/或不同剂量的5-FU作用于SGC-7901细胞24 h、36 h和48 h后,与对照组相比,细胞生长抑制率均有显着性差异（P<0.05）,且呈现出时间依赖效应;同时,CUR联合低剂量（L）5-FU组与中剂量（M）5-FU组相比、CUR联合中剂量（M）5-FU与高剂量（H）5-FU组相比,细胞的生长抑制率无显着性差异（P>0.05）。3.克隆形成实验结果显示,各实验组CUR和/或不同剂量的5-FU作用于SGC-7901细胞24 h后,与对照组相比,细胞克隆形成率均有显着性差异（P<0.05）;同时,CUR联合低剂量（L）5-FU组与中剂量（M）5-FU组相比、CUR联合中剂量（M）5-FU与高剂量（H）5-FU组相比,细胞的克隆形成率无显着性差异（P>0.05）。4.AO/EB荧光染色及凋亡流式结果显示,各实验组CUR和/或不同剂量的5-FU作用于SGC-7901细胞24 h、48 h后,与对照组相比,细胞凋亡率均有显着性差异（P<0.05）,且呈现出时间依赖效应;同时,CUR联合低剂量（L）5-FU组与中剂量（M）5-FU组相比、CUR联合中剂量（M）5-FU与高剂量（H）5-FU组相比,细胞的凋亡率无显着性差异（P>0.05）。5.Western blot实验结果显示,各实验组CUR和/或不同剂量的5-FU作用于SGC-7901细胞24 h后,与对照组相比,caspase-8、caspase-3、Fas、FADD的表达量有显着性差异（P<0.05）;同时,CUR联合低剂量（L）5-FU组与中剂量（M）5-FU组相比、CUR联合中剂量（M）5-FU与高剂量（H）5-FU组相比,Fas、FADD、caspase-8、caspase-3的表达量无显着性差异（P>0.05）。五、结论1.姜黄素可以显着增强5-FU对体外培养的胃癌SGC-7901细胞生长与增殖的抑制作用,且呈剂量与时间的依赖性;2.姜黄素可以显着增强5-FU对体外培养的胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用;3.姜黄素与5-FU联用对体外培养的胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用的机理与细胞膜表面Fas介导的死亡受体信号通路有关,两药联用可以促进胃癌SGC-7901细胞Fas、FADD、caspase-8、caspase-3等凋亡相关蛋白表达上调,提示姜黄素与5-FU联用诱导SGC-7901细胞的凋亡可通过Fas信号通路实现。

王明娟^[4]（2020）在《基于计算机模拟分子对接技术筛选Survivin抑制剂及其抗胃癌活性初步研究》文中认为[目的]Survivin是肿瘤特异性凋亡抑制蛋白,在肿瘤形成和维持过程中发挥重要作用,被认为是一种理想的抗癌靶点。然而,近年来开发的Survivin的抑制剂数量有限,这些抑制剂大多通过与其他生物分子相互作用而不是直接与survivin蛋白相互作用来降低Survivin水平。尽管存在这些挑战,开发更有效的、选择性好的Survivin抑制剂对于更好的抑制Survivin抗凋亡的功能和开发潜在的更有效的抗癌药物的研究具有重要意义。因此,本研究针对Survivin蛋白,利用计算机高通量筛选和分子对接等方法,从百灵威天然及半天然多样性小分子数据库中筛选出高亲和力结合Survivin的小分子抑制剂,通过体外实验和体内实验,对其抗胃癌效果进行验证,为开发新的以Survivin为靶点的抗胃癌药物奠定理论基础。[方法]1.虚拟筛选:以Survivin蛋白为靶点,在PDB数据库中确定Survivin蛋白的三维结构,利用薛定谔对接方法,预测Survivin蛋白结合位点并进行分子对接,筛选出对接打分较高（即高亲和力）的小分子化合物。2.小分子化合物与Survivin蛋白实际结合能力验证:将Survivin蛋白固定在CM5芯片表面,采用Biacore X100蛋白互作系统进行SPR检测,观察小分子化合物与Survivin蛋白的实际结合能力。3.体外实验:采用免疫荧光法检测胃癌细胞株SGC 7901和MKN45细胞及人正常胃粘膜上皮细胞GES 1中Survivin蛋白的表达情况;MTT法检测筛选出的2个小分子抑制剂对上述三种细胞株增殖情况的影响;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期;划痕实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测各组细胞侵袭能力;Western blot实验检测各组细胞Survivin、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9、Cyclin B1、CDK1 蛋白表达情况。4.体内实验:建立人胃癌细胞SGC-7901 BABL/c裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、溶媒对照组和药物干预组;每日观察小分子抑制剂对裸鼠移植瘤生长的影响,并计算抑瘤率;利用HE染色观察各组移植瘤及裸鼠全部脏器的病理学改变;免疫组织化学染色方法检测各组瘤组织中Survivin、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平。[结果]1.以 Survivin（PDB ID 4A0I）为靶标,使用Virtual Screening Workflow 工具,从百灵威天然及半天然多样性小分子数据库（http://jkchemical.com/）进行虚拟筛选,通过3轮筛选,共筛选出50个对接打分较高的小分子化合物。再次诱导契合对接,从中选出两个小分子化合物:STOCK1N-52340十一烷基灵菌红素（Undecylprodigiosin,UP）和 N17-X9570-357 马钱子碱（Brucine,BRU）。2.SPR技术验证上述两个小分子与Survivin蛋白的实际结合能力,结果表明小分子抑制剂UP和BRU与Survivin蛋白具有较强的结合能力,与计算机模拟结果一致。3.免疫荧光法检测出胃癌SGC7901和MKN45细胞均明显表达Survivin蛋白,正常胃粘膜上皮细胞GES1中Survivin蛋白无明显表达。4.利用MTT实验检测上述筛选出的2个小分子化合物UP和BRU对SGC 7901细胞和MKN 45细胞的毒性作用,结果表明:小分子抑制剂UP和BRU能够抑制SGC 7901细胞和MKN45细胞生长,呈浓度和时间依赖性（P<0.05）。UP和BRU对GES 1细胞无明显毒性作用。5.TUNEL实验结果表明:UP和BRU作用SGC7901细胞和MKN45细胞48 h后,凋亡细胞数量显着增多,表明UP和BRU均可促进SGC 7901细胞和MKN45细胞的凋亡（P<0.01）,对GES 1细胞则无明显作用。6.流式细胞术检测细胞周期结果表明:小分子化合物UP和BRU作用SGC 7901细胞和MKN 45细胞48 h后,均可将细胞周期阻滞在G2/M期,对GES 1细胞则无明显作用。7.划痕实验结果表明:UP和BRU均可以抑制SGC 7901细胞和MKN 45细胞的迁移能力,对GES1细胞则无明显作用;Transwell小室实验结果表明:UP和BRU均可以抑制SGC 7901细胞和MKN 45细胞的侵袭能力,对GES 1细胞则无明显作用。8.对 SGC 7901 细胞和 MKN45 细胞中 Survivin、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9、Cyclin B1、CDK1的表达水平进行检测。Western blot结果证实上述两种细胞中Survivin、Bcl-2、CDK1和cyclin B1蛋白表达水平显着下降（P<0.01）,Caspase-3、Caspase-9和Bax蛋白表达水平显着增高（P<0.01）。9.胃癌SGC 7901细胞裸鼠异种移植瘤模型,经腹腔注射UP和BRU进行治疗,每日观察移植瘤生长情况,结果表明:UP和BRU干预对裸鼠肿瘤生长具有显着的抑制作用,抑瘤率分别为28.09%和18.47%(P<（0.01）。10.裸鼠移植瘤组织和主要脏器病理学解剖及HE染色观察结果表明:与空白对照组和溶媒组比较,UP和BRU治疗组裸鼠移植瘤生长较慢,UP组和BRU组移植瘤裸鼠心、肝、脾、肺、肾等主要脏器组织形态无明显病理学改变。11.免疫组织化学染色法检测 Survivin、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9蛋白在肿瘤组织中的表达情况,结果表明:与空白对照组相比,UP组和BRU组的 Survivin 和 Bcl-2 蛋白表达显着降低（P<0.01）,而 Caspase-3、Caspase-9 和Bax蛋白表达水平显着增高（P<0.01）。[结论]1.计算机高通量筛选和分子模拟对接虚拟筛选出两个具有潜在的生物活性的天然小分子化合物:STOCK1N-52340（UP）和 N17-X9570-357（BRU）。UP和BRU与Survivin蛋白的实际结合能力与计算机模拟的结果相一致。2.UP和BRU对两种人胃癌细胞株均具有显着的增殖抑制作用,这与计算机模拟预测的结果相一致。UP和BRU能显着抑制裸鼠人胃癌细胞异种移植瘤的生长,并且模型裸鼠各脏器形态无明显病理改变。3.经体外、体内实验验证。UP和BRU具有抗胃癌活性,其可能的机制与诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞有关。UP和BRU具有高选择性和高亲和力等优点,具备可开发潜力和价值。

王祥财,郭蒸,黄莉,涂福平,徐雪明,叶建明,赖小强^[5]（2019）在《ERβ增加胃癌细胞氟尿嘧啶化疗敏感性的机制研究》文中研究表明目的:探索雌激素受体β（ERβ）表达与胃癌细胞氟尿嘧啶（5-FU）化疗敏感性的相关性及可能的机制。方法:IHC观察胃癌及癌旁组织中ERα、ERβ表达,q PCR和WB观察胃癌细胞及正常肠上皮细胞ERβ表达。以生理盐水为对照组,不同浓度的5-FU为实验组处理ERβ表达水平不同的胃癌细胞,WST-1观察ERβ表达对氟尿嘧啶抑制胃癌细胞增殖的影响。以转染空白质粒为对照组,转染ERβ表达载体为实验组,流式细胞术和免疫印迹观察ERβ表达对胃癌细胞周期的影响。结果:胃癌组织中ERβ高表达,ERα不表达;胃癌细胞KatoⅢ、AGS中ERβ高表达,且以KatoⅢ表达更高。5-FU对AGS和KatoⅢ细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,KatoⅢ细胞对5-FU更为敏感（P <0. 05）。过表达ERβ使AGS细胞对5-FU的敏感性升高（P <0. 05）;敲低ERβ可降低KatoⅢ对5-FU的敏感性（P <0. 05）。过表达ERβ可抑制周期蛋白D1、E的表达,促进胸苷磷酸化酶的表达,阻滞细胞于G1期。结论:ERβ可通过调节细胞周期、促进TP来改变胃癌细胞对5-FU化疗敏感性。

胡晓晖^[6]（2019）在《miR-221在骨肉瘤细胞中的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理第一部分miR-221在骨肉瘤细胞中的表达情况目的:1.研究不同骨肉瘤细胞系中miR-221相对于人成骨细胞（对照）的表达水平,观察是否有一致性的上调或下降。2.从多种骨肉瘤细胞系中筛选出合适的细胞系进一步实验研究。方法:1.对人骨肉瘤HOS,SaOS2,MG63,U-20S细胞,人类成骨细胞系（hFOB1.19）进行细胞培养。2.通过qRT-PCR测定各骨肉瘤细胞系和人类成骨细胞系miR-221的表达水平。结果:1.人类成骨细胞系（hFOB1.19）miR-221表达的相对值:0.031759±0.004444;HOS 细胞 miR-221 表达的相对值:0.037717±0.003754;SaOS2 细胞 miR-221 表达的相对值:0.056151±0.003706;MG63 细胞 miR-221 表达的相对值:0.104026+0.013724;U-20S细胞miR-221表达的相对值:0.144812±0.010018。各组骨肉瘤细胞miR-221表达的相对值与对照组比较均有统计学差异（P<0.05）。2.MG63,U-20S细胞的miR-221表达的相对值与对照组比较均有显着的统计学差异（P<0.01）,MG63和U-20S细胞miR-221的表达水平升高特别明显。结论:不同骨肉瘤细胞系的miR-221表达水平相较于人类成骨细胞系显着升高。MG63和U-20S细胞的miR-221表达水平升高特别明显,筛选出进行下一步实验。第二部分miR-221抑制剂对骨肉瘤细胞系的生物学行为的影响目的:研究miR-221抑制剂对骨肉瘤细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响,为进一步的机制研究提供依据。方法:1.通过qRT-PCR法检测miR-221抑制剂或NC抑制剂分别转染的MG63和U-20S细胞中miR-221的表达水平。2.MTT实验检测miR-221抑制剂或NC抑制剂分别转染的MG63和U-20S细胞在0,24,48和72小时的增殖情况。3.流式细胞仪检测分析miR-221抑制剂或NC抑制剂分别转染成功后MG63和U-20S细胞的周期和凋亡情况。4.通过transwell小室实验检测miR-221抑制剂或NC抑制剂分别转染成功后MG63和U-20S细胞的迁移、侵袭能力。结果:1.miR-221抑制剂显着下调MG63和U-20S细胞的miR-221表达水平（P<0.01）。miR-221表达的下降证明了细胞转染miR-221抑制剂的成功。2.与NC抑制剂转染相比较,miR-221抑制剂转染的MG63和U-20S细胞的增殖在24（P<0.01）,48（P<0.01）和72（P<0.01）小时3个时间点是显着下降的。3.miR-221抑制剂转染的MG63和U-20S细胞的G0-G1期细胞百分比和细胞凋亡率都是显着增加的（p<0.01）。4.miR-221抑制剂转染的MG63和U-20S细胞发生迁移和侵袭的数量显着下降（P<0.01）。结论:miR-221表达水平的下调能够显着抑制MG63和U-20S细胞的增殖,促进MG63和U-20S细胞的凋亡以及细胞周期停滞,能显着抑制MG63和U-20S细胞的迁移和侵袭能力。第三部分 miR-221在骨肉瘤细胞中作用的机制研究目的:1.寻找miR-221的靶基因。2.通过改变靶基因表达,研究对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。3.找出miR-221在骨肉瘤细胞中的作用机制。方法:1.靶区扫描分析寻找miR-221的靶基因。2.将 pGL3-CDNK1B-3’-UTR（野生型或突变质粒）与 pRL-SV40 和 miR-NC（对照）或miR-221模拟物共转染到MG63和U-20S细胞中,检测相对荧光素酶活性。3.通过 qRT-PCR,Western blot 检测 miR-NC 或 miR-221 模拟物转染 MG63 和U-20S细胞后的CDKN1B/p27表达水平。4.下调CDKN1B表达水平,检测其对U-20S细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。5.Western blot 检测 p27,Cyclin E,Cyclin D1,Bax,Bcl-2,Caspase-3,Snail和Twist1的蛋白质表达。结果:1.CDKN1B/p27 是 miR-221 的结合靶标。2.miR-221模拟物转染组的相对荧光素酶活性显着降低（P<0.01）。荧光素酶活性测定显示miR-221的过表达通过结合后者3’-UTR位点抑制了 CDKN1B/p27的转录。3.转染miR-221模拟物后,CDKN1B mRNA在MG63和U-20S细胞的表达水平显着下调（P<0.01）,p27蛋白水平显着降低（P<0.05）。4.miR-221抑制剂+siCDKN1B转染显着增加U-20S细胞增殖能力（P<0.01）,显着抑制G0/G1停滞（P<0.01）,显着降低细胞凋亡率（P<0.01）,细胞发生迁移、侵袭的数量显着上升（p<0.01）。5.miR-221抑制剂显着增加U-20S细胞中Bax和Caspase-3的蛋白表达水平（P<0.01）,降低 Cyclin E,Cyclin D1,Bcl-2,Snail 和 Twist1 的蛋白表达水平（P<0.01）。然而,当U-20S细胞中CDKN1B的水平下调后,显着逆转了 miR-221抑制剂诱导的这些蛋白质表达（P<0.01）。结论:miR-221通过靶向作用于CDKN1B/p27调节骨肉瘤细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭,miR-221/CDKN1B/p27在骨肉瘤中起功能性作用,骨肉瘤细胞中miR-221下调的作用特别依赖于CDKN1B的增加。

周世卿^[7]（2019）在《基于STAT3信号通路探讨化痰祛瘀方对喉鳞癌的作用研究》文中指出目的:1.探究“化痰祛瘀方”对喉鳞癌Hep-2、TU212细胞增殖复制、细胞周期、细胞凋亡、细胞迁移和侵袭的细胞行为学影响。2.探究“化痰祛瘀方”对喉鳞癌Hep-2、TU212细胞内信号转导和转录活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3,STAT3）及受STAT3调控下游因子的影响,进一步阐释目的1中作用机制。3.建立痰凝血瘀证喉鳞癌移植瘤裸小鼠模型,从动物个体水平探究“化痰祛瘀方”对痰凝血瘀证喉鳞癌细胞增殖的影响。4.探究“化痰祛瘀方”对痰凝血瘀证喉鳞癌STAT3及受STAT3调控下游因子的影响,进一步验证体外实验作用机制。方法:1.采用CCK8法检测“化痰祛瘀方”干预喉鳞癌Hep-2、TU212细胞IC50,筛选最佳干预药物浓度和干预时间。2.运用倒置显微镜观察不同浓度“化痰祛瘀方”对喉鳞癌Hep-2和TU212细胞形态的影响。3.通过CCK8法检测“化痰祛瘀方”对喉鳞癌Hep-2和TU212细胞增殖活性的影响。4.使用PI流式细胞术检测不同浓度“化痰祛瘀方”对喉鳞癌Hep-2和TU212细胞周期的影响。5.采用荧光显微镜观察不同浓度“化痰祛瘀方”干预和Edu染色后Hep-2和TU212细胞DNA复制变化。6.运用Annexin-V-FITC流式细胞术检测不同浓度“化痰祛瘀方”对喉鳞癌Hep-2和TU212细胞凋亡的影响。7.通过荧光显微镜观察不同浓度“化痰祛瘀方”干预且经Hochest33342染色标记后喉鳞癌Hep-2和TU212细胞凋亡变化。8.运用倒置显微镜观察和记录不同浓度“化痰祛瘀方”干预喉鳞癌Hep-2和TU212细胞后细胞迁移能力变化。9.通过正置显微镜观察和记录不同浓度“化痰祛瘀方”干预后喉鳞癌Hep-2和TU212细胞对基质胶包被的Transwell小室侵袭能力变化。10.采用不同浓度“化痰祛瘀方”干预喉鳞癌Hep-2及TU212细胞48h,Western Blot检测药物干预后细胞内STAT3、磷酸化信号转导和转录活化因子3（phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3）、细胞周期因子D1（Cyclin D1）、细胞周期因子B1（Cyclin B1）、P27、Bcl-2、Bax、Caspase-3、E-cadherin及基质金属蛋白酶9（matrix metalloprotein,MMP9）蛋白表达。11.采用“病证结合”方式建立动物模型:通过高脂高胆固醇饲料喂养+0.1%盐酸肾上腺素腹部皮下注射+冰水游泳刺激,建立痰凝血瘀证裸小鼠模型,再皮下注射Hep-2喉鳞癌细胞,成为痰凝血瘀证喉鳞癌移植瘤裸小鼠。12.瘤体体积均匀的痰凝血瘀证喉鳞癌移植瘤裸小鼠随机分为对照组（Con）、“化痰祛瘀方”低剂量组（Low）、“化痰祛瘀方”中剂量组（Mid）、“化痰祛瘀方”高剂量组（Hi）和顺铂组（Cis）共5组,6只/组。其中Con组给予生理盐水0.2m L灌胃,1次/日,共3周;Low、Mid及Hi三组给予“化痰祛瘀方”中药灌胃,1次/日,干预3周;Cis组顺铂腹腔注射给药,1次/周,共3次。给药期间记录各组裸小鼠一般状态和体征、饮水进食量和体重变化,测量各组裸小鼠瘤体体积变化。13.药物干预结束后,麻醉处死各组裸小鼠,摘取喉鳞癌移植瘤,RT-PCR检测各组喉瘤组织内STAT3、Bcl-2、Bax、P27、Cyclin D1和Cyclin B1 m RNA表达;Western Blot检测STAT3、P27、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白表。结果:1.结合IC50结果,采用0、0.8、1.6和3.2mg/m L“化痰祛瘀方”干预喉癌Hep-2及TU212细胞48h后,随着药物浓度的上升,两株细胞数量逐渐减少、密度下降,细胞增殖减缓,细胞发生皱缩、体积变小。2.“化痰祛瘀方”分别干预喉鳞癌Hep-2及TU212细胞12h、24h、48h后,两株细胞增殖均受到抑制（P<0.05）,且呈现浓度-时间依赖效应。3.0、0.8、1.6和3.2mg/m L“化痰祛瘀方”分别干预喉鳞癌Hep-2及TU212细胞48h后,两株细胞G0/G1期细胞比例增加（P<0.05）,S期细胞比例下降（P<0.05）,G2/M期细胞比例下降（P<0.05）,两株细胞细胞周期均被抑制在G0/G1期。4.0、0.8、1.6mg/m L“化痰祛瘀方”分别干预喉鳞癌Hep-2及TU212细胞48h后,两株细胞中处于DNA复制阶段细胞比例下降（P<0.05）。5.0、0.8、1.6和3.2mg/m L“化痰祛瘀方”分别干预喉鳞癌Hep-2及TU212细胞48h后,凋亡细胞比例均随着药物浓度增加而增加（P<0.05）。6.0、0.8、1.6和3.2mg/m L“化痰祛瘀方”分别干预喉鳞癌Hep-2及TU212细胞48h后,两株细胞细胞核浓缩而染色呈亮蓝色,或核呈分叶、碎片状边集,或可见凋亡小体,且比例随着干预药物浓度的升高而增多。7.0、0.8、1.6和3.2mg/m L“化痰祛瘀方”分别干预喉鳞癌Hep-2及TU212细胞后,细胞迁移运动能力均受到抑制,抑制作用随着药物浓度升高而增大（P<0.05）。8.0、0.8、1.6和3.2mg/m L“化痰祛瘀方”分别干预喉鳞癌Hep-2及TU212细胞48h后,穿过基质胶包被的Transwell小室细胞数量随着干预药物浓度的增加而减少。9.0、0.8、1.6和3.2mg/m L“化痰祛瘀方”分别干预喉鳞癌Hep-2及TU212细胞后,细胞内STAT3、p-STAT3、Cyclin D1、Cyclin B1、Bcl-2和MMP-9蛋白表达下调,且下调程度随着药物浓度增加而增加（P<0.05）;化痰祛瘀方”上调P27、Bax、Caspase-3和E-cadherin蛋白表达,且调控程度随着药物浓度增加而增加（P<0.05）。10.痰凝血瘀证造模前,造模对照组和造模组裸小鼠体重、饮水及进食量比较未见明显差异（P>0.05）;造模后,两组裸小鼠体重、饮水及进食量比较同样未见明显差异（P>0.05）。造模后两组裸小鼠血脂功能有所差异,其中造模组总胆固醇高于造模对照组（P<0.05）;造模对照组高密度脂蛋白高于造模组（P<0.05）,而两组凝血功能比较未见明显差异（P>0.05）。11.药物干预后痰凝血瘀证喉鳞癌移植瘤生长速度受到抑制,与Con组比较,Hi组及Cis组有明显抑制作用（P<0.05）。12.Con组、Low组、Mid组、Hi组和Cis组喉鳞癌瘤体组织中STAT3、Bcl-2、Cyclin D1、Bax m RNA表达下调（P<0.05）,P27 m RNA表达上调（P<0.05）,而Cyclin B1 m RNA表达无明显变化（P>0.05）。13.与Con组比较,Low组、Mid组、Hi组和Cis组裸小鼠瘤体组织中STAT3、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白表达均下降（P<0.05）,而Low组、Mid组、Hi组P27蛋白表达上调（P<0.05）。结论:1.“化痰祛瘀方”以浓度依赖性抑制喉鳞癌Hep-2及TU212细胞增殖和DNA复制,期机制之一可能是通过抑制STAT3信号通路发挥作用。2.“化痰祛瘀方”以浓度依赖性将喉鳞癌Hep-2及TU212细胞周期抑制在G0/G1期,可能机制之一是通过下调STAT3信号通路下游因子Cyclin D1、Cyclin B1表达和上调P27表达实现。3.“化痰祛瘀方”可能通过浓度依赖性下调喉鳞癌Hep-2及TU212细胞STAT3信号通路下游因子Bcl-2表达但上调Bax和Caspase-3表达发挥诱导细胞凋亡作用。4.“化痰祛瘀方”以浓度依赖性抑制喉鳞癌Hep-2及TU212细胞迁移和侵袭,其机制之一可能是通过上调STAT3信号通路下游因子E-cadherin、下调MMP-9表达而发挥作用。5.体内实验证实“化痰祛瘀方”通过下调STAT3及其下游因子Cyclin D1和Cyclin B1表达而上调P27表达发挥抑制喉鳞癌增殖作用。

刘菲^[8]（2018）在《miR-17-92基因簇靶向调控TRAF3对胃癌细胞生物学行为的影响及机制探讨》文中认为胃癌（Gastric Cancer,GC）是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病率呈逐年上升趋势,严重威胁人类的健康。全球统计数据显示,其发病率在所有恶性肿瘤中排第四位,死亡率居第三位,仅次于肺癌和肝癌。尽管目前在胃癌的诊断和治疗上取得了重大进展,早期胃癌患者的生存率得到了明显提高,但是进展期胃癌的预后仍不是很理想,远处转移仍然是胃癌患者最主要的致死原因。大量研究表明多种癌基因和抑癌基因参与了胃癌的发生发展,但是其具体的分子调控机制仍不明确。因此,更好地了解这些调控分子在胃癌发生发展过程中的作用及机制,将对胃癌临床诊断和治疗的新策略提供重要的理论基础。微小RNA（micro RNA,简称为miRNA）是近年发现的一类在生物体内广泛表达的、长约22-24nt的、高度保守的非编码调节性小分子RNA。它们可以通过抑制其靶基因m RNA的翻译或直接将其降解,在转录后水平调控基因的表达,并可以进一步调控其靶基因参与的相关信号转导通路,参与调控哺乳动物多个器官的发育过程和人类疾病的发生。一个miRNA可以调控多个基因的表达,而几个miRNA也可以调控某一个基因的表达,这说明了miRNAs及其靶分子能够形成庞大、错综复杂的生物调控网络。研究表明,miRNAs在肿瘤的发生发展过程中发挥了重要作用。在胃癌中,已发现多种异常表达的miRNAs,其参与了胃癌的发生、侵袭、转移等生物学过程,并通过调控各自不同的靶基因影响胃癌细胞的恶性生物学行为。因此,研究miRNAs在胃癌发生发展过程中的作用及机制对探索胃癌防治新策略有重要意义。miR-17-92基因簇也称为oncomiR-1,位于人类基因组的第13号染色体上C13orf25基因初级转录本的第3个内含子区,其初级转录物编码六种成熟的miRNA:miR-17,miR-18a,miR-19a,miR-19b-1,miR-20a和miR-92a-1。已有研究发现,miR-17-92基因簇在多种肿瘤中高表达,并促进肿瘤的发生发展,发挥着类似于癌基因样的作用;也有一些研究报道称miR-17-92基因簇能抑制肿瘤的进展,发挥着类似于抑癌基因样的作用。然而,目前对于miR-17-92基因簇在胃癌发生发展中的研究报道尚不多。在本研究中,我们首先以人的胃癌组织标本作为研究对象,运用q RT-PCR法检测了miR-17-92基因簇各亚单位在胃癌组织中的表达情况,并分析了其表达与胃癌临床病理学指标之间的相互关系。接下来我们通过构建稳定过表达miR-17-92的MGC-803胃癌细胞株作为研究模型,系统地研究了miR-17-92基因簇对胃癌细胞生物学功能的影响并探讨了其潜在的作用机制。最重要的是,我们运用生物信息学软件预测了miR-17-92基因簇下游的靶基因,并运用双荧光素酶报告基因实验验证了其靶向关系。我们还运用免疫组化法检测了新发现的靶基因TRAF3在胃癌组织中的表达情况,并分析了其表达与胃癌患者临床病理特征及预后的关系。本研究为miR-17-92基因簇及其靶基因在未来是否有望成为胃癌临床诊断、治疗及预后监测的生物学指标提供了理论依据。第一部分miR-17-92基因簇在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理学特征的相关性分析目的明确miR-17-92基因簇在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系。方法收集2015年9月到2016年12月在苏州大学附属第一医院普外科接受胃癌根治术的患者新鲜组织标本,同时收集其临床病理资料。采用q RT-PCR方法检测miR-17-92基因簇各亚单位在胃癌组织中的表达情况。采用卡方检验分析miR-17-92基因簇各亚单位的表达与胃癌患者临床病理特征的关系。结果q RT-PCR检测结果显示miR-17-92基因簇的6个亚单位miR-17、miR-18、miR-19a、miR-19b、miR-20和miR-92在胃癌组织中的表达较其对应的癌旁正常组织均显着上调。其中,miR-17的表达水平与胃癌患者的分化程度（P=0.0031）、TNM分期（P=0.0020）相关;miR-18的表达水平与胃癌患者的TNM分期（P=0.0020）相关;miR-19a的表达水平与胃癌患者的肿瘤大小（P=0.0002）、TNM分期（P=0.0012）相关;miR-19b的表达水平与胃癌患者的肿瘤大小（P=0.0072）、TNM分期（P=0.0002）相关;miR-20的表达水平与胃癌患者的分化程度（P=0.0143）、TNM分期（P=0.0023）相关;miR-92的表达水平与胃癌患者的肿瘤大小（P=0.0374）、TNM分期（P=0.0035）相关。结论miR-17-92基因簇各亚单位在胃癌组织中的表达较其对应的癌旁正常组织均显着上调,预示着miR-17-92基因簇在胃癌的发生发展中可能扮演着癌基因样的角色。miR-17-92基因簇各个亚单位的表达水平均与胃癌患者的TNM分期呈正相关,而miR-17、miR-20的表达水平还与胃癌患者的肿瘤分化程度呈正相关,miR-19a、miR-19b、miR-92的表达水平还与胃癌患者的肿瘤大小呈正相关。第二部分miR-17-92基因簇对胃癌细胞生物学功能的影响及潜在机制探讨目的明确miR-17-92基因簇在胃癌细胞中的生物学功能及其作用机制。方法采用q RT-PCR方法检测胃癌细胞株中miR-17-92基因簇各亚单位的表达情况。采用慢病毒转染构建稳定过表达miR-17-92的MGC-803胃癌细胞株。采用CCK-8、Bru U、Cell Titer-Glo、克隆形成实验等方法检测细胞增殖;采用TUNEL实验方法检测细胞凋亡;采用流式细胞术检测细胞周期;采用划痕实验、Transwell实验方法检测细胞迁移及侵袭。采用裸鼠皮下移植瘤模型观察过表达miR-17-92对MGC-803细胞体内生长的影响。采用q RT-PCR方法检测相关基因在m RNA水平的表达。采用Western blotting方法检测相关基因在蛋白水平的表达。采用明胶酶谱实验方法检测细胞内基质金属蛋白酶的活性。采用Trans AM实验方法检测细胞内NF-κB信号通路相关分子的活性。采用Western blotting方法检测细胞内AKT、ERK1/2及NF-κB信号通路相关分子在蛋白水平的表达。结果在胃癌细胞系AGS、SGC-7901、BGC-823、MKN-45、MGC-803中,miR-17-92基因簇各亚单位在MGC-803细胞中表达量最低。在MGC-803细胞中过表达miR-17-92能够导致细胞体外生长及增殖加快、凋亡减少、迁移及侵袭能力增强。裸鼠皮下成瘤实验结果表明过表达miR-17-92能够促进MGC-803细胞的体内生长。Western blotting实验结果表明过表达miR-17-92的MGC-803细胞中p-AKT（Thr308）及p-ERK1/2表达水平较对照组细胞显着上调。Western blotting和Trans AM实验结果共同显示MGC-803-miR-17-92细胞胞核蛋白中Rel A、p50、Rel B、p52的表达活性均较MGC-803-control细胞显着上调。q RT-PCR及Western blotting实验结果显示无论是m RNA水平还是蛋白水平,MGC-803-miR-17-92细胞中促凋亡基因BIM和BID的表达水平较MGC-803-control细胞显着下调,而抑凋亡基因Bcl-2、Bcl-x L和Mcl-1的表达水平显着上调。明胶酶谱实验结果显示过表达miR-17-92能够显着增强MGC-803细胞中MMP-2的表达活性。Western blotting实验结果显示MGC-803-miR-17-92细胞中上皮细胞标志物E-cadherin、Claudin1、Ep CAM的表达水平较对照组细胞显着下调,而间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin的表达显着上调。结论过表达miR-17-92能够显着促进MGC-803胃癌细胞的生长与增殖能力,与AKT、ERK及NF-κB信号通路的活化有关。过表达miR-17-92能够显着抑制MGC-803胃癌细胞的凋亡能力,与促凋亡基因BIM、BID的表达下调及抑凋亡基因Bcl-2、Bcl-x L、Mcl-1的表达上调有关。过表达miR-17-92能够显着促进MGC-803胃癌细胞的迁移及侵袭能力,与细胞内MMP-2活性的增高及EMT的发生相关。过表达miR-17-92能够显着促进MGC-803胃癌细胞的体内生长。第三部分miR-17-92基因簇靶基因的预测和验证目的寻找并验证miR-17-92基因簇下游的靶基因。方法运用生物信息学软件对miR-17-92基因簇的靶基因进行预测。采用q RT-PCR及Western blotting实验方法检测过表达miR-17-92的MGC-803细胞中TRAF3在m RNA水平及蛋白水平的表达。采用分子克隆实验方法构建野生型及突变型pmir GLO-TRAF3-3’UTR重组质粒。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-17-92与TRAF3基因3’UTR区的结合情况。采用sh RNA干扰TRAF3基因的表达构建稳定低表达TRAF3的MGC-803胃癌细胞株,采用q RT-PCR及Western blotting实验方法鉴定MGC-803细胞中TRAF3基因的敲除情况。采用Western blotting实验方法检测细胞内NF-κB信号通路相关分子蛋白水平的表达。采用Trans AM实验方法检测细胞胞核蛋白中NF-κB信号通路相关分子的活性。采用CCK-8、Cell Titer-Glo细胞活力检测试剂盒检测细胞的生长及增殖能力,采用Transwell实验方法检测细胞的迁移及侵袭能力。结果运用Target Scan软件查询miR-17-92基因簇下游的靶基因信息,发现TRAF3为miR-17-92基因簇潜在的作用靶基因之一。测序结果显示我们成功构建了野生型与突变型的pmir GLO-TRAF3-3’UTR重组质粒。双荧光素酶报告基因实验结果显示在转染pmir GLO-TRAF3-3’UTR-wild type质粒的实验组中,同时加入miR-17-92质粒的实验组与加入空质粒的对照组相比,荧光素酶活性显着下调,而在转染pmir GLO-TRAF3-3’UTR-mutant type质粒的实验组中,同时加入miR-17-92质粒的实验组与加入空质粒的对照组相比,荧光素酶活性无显着差异。q RT-PCR及Western blotting实验结果显示MGC-803-si TRAF3细胞中TRAF3在m RNA水平及蛋白水平的表达较MGC-803-sictrl细胞显着降低。敲除TRAF3后MGC-803细胞内NF-κB信号通路的活性显着增强。在MGC-803胃癌细胞中敲除TRAF3能够增强细胞的增殖、迁移及侵袭能力。结论双荧光素酶报告基因实验结果证实了TRAF3是miR-17-92基因簇直接作用的靶基因。我们在MGC-803胃癌细胞中进一步证实了TRAF3与miR-17-92基因簇的靶向关系。第四部分TRAF3在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理学指标的相关性及预后分析目的明确TARF3在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征和预后的关系。方法胃癌组织芯片（HStm A030PG03）购自上海芯超生物科技有限公司。采用免疫组化方法检测TRAF3在胃癌组织及其对应的癌旁正常组织中的表达情况。采用卡方检验分析TRAF3与胃癌患者临床病理特征的关系。运用Kaplan-Meier分析TRAF3与胃癌患者预后的关系。采用单因素和多因素方差分析来确定影响胃癌患者的预后指标。结果免疫组化结果显示TRAF3在胃癌组织中的表达显着低于其对应的癌旁正常组织。TRAF3的表达与胃癌患者的肿瘤大小（P=0.036）、浸润深度（P=0.003）及TNM分期（P=0.009）相关。Kaplan-Meier生存分析结果提示TRAF3低表达组胃癌患者的总生存期显着短与TRAF3高表达组胃癌患者（P=0.002）。单因素方差分析结果提示胃癌患者的肿瘤大小（P=0.009）、分化程度（P=0.033）、淋巴转移（P=0.032）、远处转移（P=0.000）、TNM分期（P=0.001）及TRAF3的表达（P=0.002）均是影响胃癌患者预后的重要指标;多因素方差分析结果提示TRAF3（P=0.004）并不是影响胃癌患者预后的独立指标,其他指标包括肿瘤大小（P=0.010）、远处转移（P=0.000）及TNM分期（P=0.010）均是影响胃癌患者预后的重要指标。结论TRAF3在胃癌组织中的表达较癌旁正常组织呈相对低表达。TRAF3的表达与胃癌患者的肿瘤大小、浸润深度及TNM分期呈负相关。TRAF3的表达与胃癌患者的预后呈正相关,即TRAF3低表达组胃癌患者与TRAF3高表达组患者相比有较短的生存期。TRAF3可以作为胃癌患者预后判断的指标之一。

邹勇^[9]（2017）在《PHI对急性髓性白血病M2b细胞致凋亡的机制研究》文中研究指明目的:研究异硫氰苯已酸酯（PHI）对血液肿瘤细胞株抑制增殖作用,筛选出对PHI敏感的人急性髓性白血病M2b细胞株Kasumi-1;进一步了解PHI抑制Kasumi-1增殖及凋亡所参与的信号通路;了解PHI诱导Kasumi-1细胞凋亡和增殖的mRNA表达谱改变,并了解长链非编码RNA（lncRNA）在PHI作用下的表达谱改变,探讨可能药理机制。方法:在体外,采用CCK8法分析PHI对多种血液肿瘤细胞的抑制增殖作用;并筛选抑制能力较强的人急性髓性白血病M2b细胞株作为研究对象;采用流式细胞术（FCM）检测人急性髓性白血病M2b细胞株Kasumi-1和SKNO-1的细胞凋亡及周期变化;采用甲基纤维素半固体培养基培养法检测PHI对Kasumi-1细胞集落形成能力的影响;在体内,同时建立Kasumi-1细胞的裸鼠皮下成瘤模型,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（TUNEL）检测PHI在裸鼠体内对于Kasumi-1移植瘤的诱导凋亡效应;使用蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测Kasumi-1细胞凋亡通路的相关蛋白表达;采用lncRNA基因芯片了解PHI作用前后lncRNA和mRNA的差异谱改变,KEGG、GO分析、lncRNA靶基因预测等生物学信息方法来分析差异表达的lncRNA和mRNA;逆转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）验证相关RNA的表达情况。结果:1、PHI抑制多种血液肿瘤细胞的增殖,呈时间和浓度依赖关系,而对两种人急性髓性白血病M2b细胞株Kasumi-1和SKNO-1细胞,有更明显的抑制效果;2、在体外,PHI诱导急性髓性白血病M2b细胞株Kasumi-1和SKNO-1细胞的凋亡,并使细胞周期停滞在G0/G1期,呈时间和浓度依赖关系;并抑制kasumi-1细胞的克隆形成;而在体内,PHI能减慢Kasumi-1的裸鼠移植瘤的生长,并能造成移植瘤细胞的凋亡。3、PHI可以通过线粒体途径和Fas死亡受体两种途径来诱导Kasumi-1细胞的凋亡,并且可以激活p21,诱导细胞的周期停滞于G0/G1期。对信号通路的研究发现,PHI是通过激活P53通路导致了Kasumi-1的凋亡。4、通过lncRNA芯片分析和RT-qPCR验证,TNFR死亡受体通路可能也参于了PHI的致凋亡作用,而E2F1、CDKN 2A、MDM2等可能也参与了P53信号通路的调控。5、PHI作用Kasumi-1后能造成多种lncRNA的表达改变,如P53下游的NEAT1、LncPINT出现了上调的的表达;也可以导致GAPLINC下调,和lnc-HDAC9-1:2的上调;而ENST00-000590797、和NR024330也可能通过调整miRNA-125 a、miRNA122的表达,进而通过ceRNA（竞争性内源RNA）的调控机制来参与PHI诱导细胞凋亡。结论:1、PHI对血液肿瘤细胞具有普遍的抑制增殖作用,其中对于人急性髓性白血病M2b细胞株,有较特异的抑制增殖作用。2、PHI抑制人急性髓性白血病M2b细胞株增殖的机制主要通过诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞的周期停滞于G0/G1期。3、PHI通过激活P53通路导致了Kasumi-1的凋亡。4、TNFR死亡受体通路可能也参于了PHI的致凋亡作用,而E2F1、CDKN 2A、MDM2等可能也参与了P53信号通路的调控1。5、PHI可能可以调控某些P53下游的lncRNA的表达,也可能通过ceRNA的调控机制来诱导细胞凋亡。

刘架伸^[10]（2017）在《Survivin和CyclinD1在胃癌细胞株SGC7901/ADR多药耐药的相关性研究》文中研究表明研究背景:胃癌作为人类最常见的消化道恶性肿瘤之一,在我国呈现低早期诊断率,高死亡率的特点。化疗则是中晚期胃癌和胃癌术后的主要治疗手段之一,但是肿瘤多药耐药（multidrug resistance,MDR）的产生严重影响化疗疗效。肿瘤的多药耐药是很多因素共同作用的结果,其作用机制复杂,至今尚未明确。深入研究胃癌的多药耐药产生机制,实现耐药性的逆转,将会给胃癌的临床治疗带来新的突破。生存素（survivin）和细胞周期蛋白D1（cyclinD1）在诸多肿瘤中都具有高表达特性,但在胃癌耐阿霉素细胞株SGC7901/ADR中未见明确研究。本课题组研究发现Wnt/β-catenin信号通路中的β-catenin（β连环蛋白）在胃癌耐阿霉素药细胞株SGC7901/ADR中表达明显高于SGC7901细胞株,β-catenin可能参与胃癌MDR的过程。在S100A6基因下调的SGC7901质粒稳转细胞株中发现β-catenin也呈现低表达,β-catenin和S100A6两者存在正相关性,均与耐药有关。Survivin和cyclinD1均作为Wnt/β-catenin下游具有争议的因子,在肿瘤多药耐药中的作用尚不明确,在胃癌及其耐阿霉素细胞中尚未有报导。本研究采用Western Blotting（蛋白免疫印迹）、ICC（免疫细胞化学）、RT-PCR和CCK8（细胞增殖与活性检测）实验技术来检测survivin和cyclinD1在人胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞SGC7901/ADR和本课题组之前所构建的S100A6下调SCG7901细胞所导致β-catenin呈低表达的shRNA-1、shRNA-3质粒稳转细胞株的表达情况,探讨Wnt/β-catenin、survivin和cyclinD1三者之间是否存在关系,与胃癌耐药之间所存在的关系。为Wnt/β-catenin通路作为临床治疗以及克服胃癌的多药耐药提供相关理论依据。目的:探讨survivin、cyclind1与sgc7901/adr细胞株中的多药耐药的关系,并进一步探讨survivin、cyclind1与wnt/β-catenin参与胃癌mdr的过程。方法:1、免疫细胞化学技术（icc）、westernblotting（wb）技术和rt-pcr技术检测survivin、cyclind1在人胃癌sgc7901细胞及其耐阿霉素细胞sgc7901/adr中的差异;2、icc技术、wb技术和rt-pcr技术检测survivin、cyclind1分别在sgc7901细胞中s100a6下调导致β-catenin低表达的shrna-1、shrna-3质粒稳转细胞中的表达差异。3、cck-8细胞毒性实验检测上述五种细胞的半抑制浓度（ic50）和耐药指数（ri）。结果:1、survivin结果显示:（1）icc:survivin在sgc7901细胞浆深染成棕褐色,染色呈强阳性（+++）;sgc7901/adr细胞浆和部分细胞核深染成棕褐色,染色呈强阳性（+++）;sgc7901、nc质粒稳转细胞为棕褐色,染色呈强阳性（+++）,β-catenin低表达的shrna-1、shrna-3质粒稳转细胞胞浆染色呈棕黄色,染色呈阳性（++）。（2）westernblotting显示survivin蛋白在sgc7901/adr细胞中平均表达量明显高于sgc7901细胞,差异性显着,p值<0.05;sgc7901细胞中平均表达量明显高于β-catenin低表达的s100a6下调株shrna-1和shrna-3质粒稳转细胞,差异性显着,p值<0.05。（3）rt-pcr结果显示:survivin在sgc7901/adr细胞中的平均表达量高于sgc7901细胞,差异性显着,p值<0.05。survivin在sgc7901细胞中平均表达量明显高于β-catenin低表达的s100a6下调株shrna-1和shrna-3质粒稳转细胞的表达量,p值<0.05,有显着性差异。2、cyclind1结果显示（1）icc:cyclind1在sgc7901部分细胞核深染成棕黄色,染色呈阳性（++）,sgc7901/adr细胞核深染成棕褐色,染色呈强阳性（+++）;sgc7901和nc质粒稳转细胞胞浆染色呈棕黄色,染色呈阳性（++）;β-catenin低表达的shrna-1和shrna-3质粒稳转细胞胞浆无染色,染色呈阴性（—）。（2）westernblotting:cyclind1显示sgc7901/adr细胞中的平均表达量明显高于sgc7901细胞,差异性显着（p<0.05）;sgc7901细胞中平均表达量明显高于β-catenin低表达的s100a6下调株shrna-1和shrna-3质粒稳转细胞的表达量,p<0.05,差异性显着。（3）rt-pcr结果显示:cyclind1在sgc7901/adr高于sgc7901细胞差异性显着（p<0.05）;sgc7901细胞中mrna平均表达量明显高于s100a6下调至β-catenin低表达的shrna-1和shrna-3质粒稳转细胞的表达量,p值<0.05,具有显着差异。结论:1、Survivin和cyclinD1参与人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR耐药,survivin、cyclinD1高表达,细胞的耐药性增加。2、2、Survivin和cyclinD1位于Wnt/β-catenin信号通路下游,参与胃癌的多药耐药。3、3、β-catenin高表达,survivin和cyclinD1表达均增高;β-catenin低表达,survivin和cyclinD1表达均降低,β-catenin和survivin、β-catenin和cyclinD1表达存在一致性。

二、Effects of Cyclin D1 Antisense Oligodeoxyneucleotides on the Growth and Expression of G_1 Phase Regulators in Gastric Carcinoma Cells（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、Effects of Cyclin D1 Antisense Oligodeoxyneucleotides on the Growth and Expression of G_1 Phase Regulators in Gastric Carcinoma Cells（论文提纲范文）

（1）LncRNA-cCSC1调控结直肠癌细胞增殖的作用及机制研究（论文提纲范文）

（2）苦参碱抗肿瘤作用分子机制研究（论文提纲范文）

（3）基于Fas信号通路对姜黄素联合5-FU诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡作用机理的研究（论文提纲范文）

（4）基于计算机模拟分子对接技术筛选Survivin抑制剂及其抗胃癌活性初步研究（论文提纲范文）

（5）ERβ增加胃癌细胞氟尿嘧啶化疗敏感性的机制研究（论文提纲范文）

（6）miR-221在骨肉瘤细胞中的作用及机制研究（论文提纲范文）

（7）基于STAT3信号通路探讨化痰祛瘀方对喉鳞癌的作用研究（论文提纲范文）

（8）miR-17-92基因簇靶向调控TRAF3对胃癌细胞生物学行为的影响及机制探讨（论文提纲范文）

（9）PHI对急性髓性白血病M2b细胞致凋亡的机制研究（论文提纲范文）

（10）Survivin和CyclinD1在胃癌细胞株SGC7901/ADR多药耐药的相关性研究（论文提纲范文）

四、Effects of Cyclin D1 Antisense Oligodeoxyneucleotides on the Growth and Expression of G_1 Phase Regulators in Gastric Carcinoma Cells（论文参考文献）

• [1]LncRNA-cCSC1调控结直肠癌细胞增殖的作用及机制研究[D]. 张海容. 重庆医科大学, 2021(01)
• [2]苦参碱抗肿瘤作用分子机制研究[D]. 张玺. 华中科技大学, 2020(01)
• [3]基于Fas信号通路对姜黄素联合5-FU诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡作用机理的研究[D]. 刘强. 湖北中医药大学, 2020(10)
• [4]基于计算机模拟分子对接技术筛选Survivin抑制剂及其抗胃癌活性初步研究[D]. 王明娟. 昆明医科大学, 2020(02)
• [5]ERβ增加胃癌细胞氟尿嘧啶化疗敏感性的机制研究[J]. 王祥财,郭蒸,黄莉,涂福平,徐雪明,叶建明,赖小强. 赣南医学院学报, 2019(05)
• [6]miR-221在骨肉瘤细胞中的作用及机制研究[D]. 胡晓晖. 苏州大学, 2019(04)
• [7]基于STAT3信号通路探讨化痰祛瘀方对喉鳞癌的作用研究[D]. 周世卿. 广州中医药大学, 2019(05)
• [8]miR-17-92基因簇靶向调控TRAF3对胃癌细胞生物学行为的影响及机制探讨[D]. 刘菲. 苏州大学, 2018
• [9]PHI对急性髓性白血病M2b细胞致凋亡的机制研究[D]. 邹勇. 福建医科大学, 2017(04)
• [10]Survivin和CyclinD1在胃癌细胞株SGC7901/ADR多药耐药的相关性研究[D]. 刘架伸. 大连医科大学, 2017(08)

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