一、仔猪细菌性腹泻的防治（论文文献综述）
陈宝财[1]（2022）在《新生仔猪腹泻病的防治刍议》文中研究指明新生仔猪腹泻病是一种常见疾病,一旦出现将给养殖业带来较大的经济损失。一般情况下,患病新生仔猪主要表现为腹泻、呕吐等。该种疾病产生的主要原因是卫生不达标、管理不合理等。养殖人员要准确分析新生仔猪腹泻病产生的主要原因,并制定有针对性的防治措施,更好地进行防疫工作。
陈维,谭涛[2]（2021）在《禁抗后仔猪细菌性腹泻的临床诊断与防治》文中认为为了促进食品安全和养猪业的健康发展,禁止在饲料中使用促生长抗生素势在必行。随着我国的饲料禁抗相关法规的推行,饲料企业被严格禁止在饲料生产过程中加入抗生素,这也导致了猪场疾病尤其是肠道疾病的高发,而仔猪肠道发育未完全,免疫系统未发育成熟,更容易发生严重的腹泻甚至死亡。文章对几种常见的仔猪细菌性腹泻疾病进行了回顾,病原包括大肠杆菌、沙门氏菌、魏氏梭菌,讨论了它们的临床症状与防控措施,为猪场在防控这些细菌性腹泻提供参考。
张龙舟,高青山,崔莲花,侯丽娜,张魁[3]（2021）在《基于肠道菌群调控治疗动物腹泻的相关研究进展》文中研究说明动物腹泻会导致机体养分吸收能力下降从而降低生产性能,严重的还会导致动物死亡。抗生素治疗存在耐药性和药物残留等问题,寻找绿色、健康、无残留"替抗"添加剂成为研究重点。目前,通过对肠道菌群的调控可以改善动物腹泻,提高生产性能。文章综述动物腹泻的种类及生理学症状,添加益生菌、益生元、合生元等微生态制剂调控肠道菌群平衡的研究进展,为肠道调控治疗动物腹泻及相关疾病提供参考。
雒瑞瑞[4]（2021）在《circDCP2/ssc-miR-23b/IRF1在CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞损伤中的作用机制》文中认为腹泻是仔猪死亡的主要原因,给养猪业造成巨大的经济损失。C型产气荚膜梭菌（C.perfringens type C）产生α和β（1、2）毒素,是导致新生仔猪腹泻的重要原因。产气荚膜梭菌β2（CPB2）被认为是引起仔猪坏死性肠炎的重要毒力因子。微小RNA（micro RNA,miRNA）、环状RNA（circular RNA,circ RNA）在细胞新陈代谢,病原微生物感染等生理和病理过程中发挥着重要调控作用。研究发现CPB2对某些人类细胞系具有毒性作用,可使其细胞活力降低,并以依赖细胞类型的方式诱导不同程度的毒性。然而,CPB2是否可对猪空肠黏膜上皮细胞造成损伤,以及在此过程miRNA和circ RNA的变化和调控机制至今尚未见报道。本研究利用基因重组的方法获得CPB2毒素蛋白,构建CPB2毒素诱导的肠损伤模型。采用RNA测序技术检测CPB2处理对IPEC-J2细胞miRNA和circ RNA表达谱的影响,并构建circ RNA-miRNA-m RNA调控网络。利用RT-q PCR、FISH、western blot、双荧光素酶报告基因、流式细胞术等方法研究miRNA和circ RNA在CPB2诱导的IPEC-J2细胞损伤过程中的调控机制。研究取得如下结果:（1）通过重组表达的方法获得了具有生物学活性的CPB2毒素蛋白。IPEC-J2细胞在10、20、30、40和50μg/m L的CPB2毒素处理后,细胞活力以剂量依赖性降低（p<0.05）,乳酸脱氢酶（LDH）含量以剂量依赖性增加（p<0.05）。当CPB2浓度为20μg/m L时细胞活力约为50%。随着CPB2浓度的（0、10、20、30μg/m L）升高,IPEC-J2细胞TNF-α和IL-8的表达逐渐升高（p<0.05）,而IL-10的表达逐渐降低（p<0.05）。此外,CPB2处理IPEC-J2细胞后,增加了细胞凋亡率、ROS含量以及Bax蛋白的表达（p<0.05）,降低了线粒体膜电位、Bcl-2和Bcl-x L蛋白表达水平（p<0.05）。ZO-1、CLDN12和OCLN的在CPB2处理的IPEC-J2细胞中下调表达（p<0.05）。（2）利用RNA-seq技术检测CPB2诱导IPEC-J2细胞损伤过程中miRNA表达谱的变化,以|log2FC|>1且p<0.05为条件,筛选到419个差异表达的miRNAs,其中有227个表达上调,192个表达下调。随机选取的8个上调和8个下调差异表达miRNAs的RT-q PCR结果和RNA-seq的结果趋势一致。差异表达miRNAs预测到的13618个靶基因与721个差异表达m RNAs做交集得到563个差异表达靶基因。差异表达靶基因GO功能主要富集在免疫系统过程、对刺激的反应、细胞杀伤和排毒等生物过程。差异表达靶基因主要富集在TNF信号通路、细胞因子与细胞因子受体的相互作用等与免疫应答和炎症反应相关的信号通路。8个上调和8个下调差异表达miRNAs RT-q PCR的结果和测序结果趋势一致。（3）利用RNA-seq检测CPB2诱导IPEC-J2细胞损伤过程中circ RNA表达谱的变化,以|log2FC|>1且p<0.05为条件,筛选到63个差异表达circ RNAs（33个表达上调,30个表达下调）。通过Sanger测序检测10个差异表达circ RNAs环化位点的序列信息,其结果与RNA-seq测序结果一致。10个差异表达circ RNAs的RT-q PCR结果和RNA-seq的结果趋势一致。对circ RNA、miRNA和m RNA的整合分析,得到103个circ RNA-miRNA-m RNA关系对。根据上述结果进一步筛选出和免疫系统、炎症反应以及细胞增殖凋亡相关的靶基因,得到20对候选关系对。由于circDCP2差异表达倍数较大,且IRF1富集于TNF信号通路,并与病原微生物感染和炎症反应密切相关,因此选择circDCP2-ssc-miR-23b-IRF1进行功能验证。（4）通过鉴定发现circDCP2是主要存在于IPEC-J2细胞质中的环状RNA。circDCP2在CPB2诱导的IPEC-J2细胞中上调表达（p<0.05）。circDCP2可以增加CPB2处理的IPEC-J2细胞LDH含量（p<0.05）、炎性因子水平（p<0.05）、凋亡率（p<0.05）、ROS含量（p<0.05）以及Bax表达水平（p<0.05）,同时降低细胞活力（p<0.05）,线粒体膜电位（p<0.05）以及Bcl-2表达水平（p<0.05）。circDCP2可通过海绵ssc-miR-23b对其表达负调控。ssc-miR-23b可以降低细胞LDH含量（p<0.05）、炎性因子水平（p<0.05）、凋亡率（p<0.05）、ROS含量（p<0.05）以及Bax表达水平（p<0.05）,并且增加细胞活力（p<0.05）、线粒体膜电位（p<0.05）和Bcl-2表达水平（p<0.05）从而缓解CPB2对IPEC-J2的损伤。此外,IRF1被确定为ssc-miR-23b的直接靶标。通过挽救试验发现,过表达ssc-miR-23b可以缓解circDCP2过表达对CPB2诱导IPEC-J2细胞损伤的加剧。过表达IRF1可以恢复circDCP2干扰对CPB2诱导IPEC-J2细胞损伤的缓解。circDCP2在CPB2诱导IPEC-J2细胞损伤模型中的作用是通过ssc-miR-23b/IRF1轴加剧细胞的炎症反应,抑制增殖且促进凋亡。本研究成功构建了CPB2诱导的IPEC-J2细胞损伤模型。利用RNA-seq筛选到CPB2诱导IPEC-J2细胞损伤过程中有419个差异表达的miRNAs和63个差异表达的circ RNAs。整合circ RNA、miRNA和m RNA构建ce RNA调控网络,筛选与免疫系统、炎症反应及细胞增殖凋亡相关靶基因对应的关系对,得到20对候选circ RNA-miRNA-m RNA并选择circDCP2-ssc-miR-23b-IRF1进行功能验证。通过一系列试验研究发现,circDCP2可通过吸附ssc-miR-23b靶向IRF1在CPB2诱导的IPEC-J2细胞损伤过程中发挥调控作用。研究结果为进一步揭示C型产气荚膜梭菌致病机制提供理论依据。
高小莉[5]（2021）在《LncRNA ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN在CPB2诱导猪肠上皮细胞损伤中的功能机制研究》文中研究说明仔猪腹泻是集约化养猪生产中普遍存在的肠道疾病,严重影响养猪业的健康发展和经济效益。C型产气荚膜梭菌作为常见病原体,可在仔猪肠道中快速定居和繁殖,并释放多种毒素,损伤肠粘膜上皮及内皮细胞等,引起仔猪腹泻。CPB2是C型产气荚膜梭菌产生的关键致病毒素之一,该毒素可促进腹泻发生,并通过血液循环,加快全身系统性感染。目前,仅从疫苗和抗生素的角度防治仔猪腹泻具有局限性,因此,从遗传基础上提高仔猪对病原菌及毒素的抗性,是解决仔猪腹泻的有效途径。LncRNA和miRNA在细菌感染性疾病中发挥重要调控作用,但其在仔猪C型产气荚膜梭菌感染致腹泻中的调控功能及分子机制尚不清楚。鉴于此,本研究首先通过大肠杆菌表达系统获得CPB2重组蛋白,建立CPB2侵染IPEC-J2的细胞损伤模型;结合RNA-seq和q RT-PCR分析,筛选出差异表达lnc RNA,利用过表达和敲低lnc RNAALDB-898（ALDBSSCG0000000898）,通过CCK8、Ed U、LDH、ROS、流式细胞术、TUNEL、WB、ELISA和FITC-Dextran4等检测方法研究ALDB-898在CPB2诱导IPEC-J2损伤过程中的调控作用;采用细胞核质分离和RNA-FISH技术检测ALDB-898的亚细胞定位;然后结合RNA-seq和靶基因软件预测,构建lnc RNA/miRNA/m RNA的ce RNA网络,使用双荧光素酶报告试验验证ssc-miR-122-5p（ssc-micro RNA-122-5p）与ALDB-898和闭锁蛋白（occludin,OCLN）的靶向结合关系;利用q RT-PCR和WB检测ALDB-898,ssc-miR-122-5p和OCLN在组织和细胞中的表达水平及三者的表达相关性;再利用过表达和敲低ssc-miR-122-5p研究该miRNA在CPB2诱导IPEC-J2损伤过程中的调控功能;最后利用挽救试验验证ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN调控CPB2诱导IPEC-J2损伤的作用机制。主要研究结果如下:1.成功构建pET-28a-CPB2重组质粒,并利用大肠杆菌表达系统获得CPB2重组蛋白。经SDS-PAGE和WB检测,证明CPB2重组蛋白具有较高的纯度,较好的完整性及特异性。IPEC-J2经不同浓度的CPB2重组蛋白处理不同时间后,明显表现出不同程度的损伤,且呈浓度和时间依赖性,表明该重组蛋白具有良好的生物学活性。IPEC-J2在CPB2（20μg/m L）处理24 h时,其存活率降低至50%左右,本研究以该条件构建了CPB2侵染IPEC-J2的损伤模型。2.根据生物信息学分析,筛选出与C型产气荚膜梭菌感染性腹泻相关的6个lnc RNAs,利用q RT-PCR检测了6个lnc RNAs在腹泻仔猪回肠组织（耐受组（IR）和易感组（IS））及CPB2处理的IPEC-J2中的表达情况。结果表明,仅有ALDB-898在组织和细胞中表达显着下降。组织表达谱分析发现ALDB-898在空肠和回肠组织中呈高丰度表达,其次是淋巴,肾和肺,在肝脏和胃中表达丰度较低,而在胸腺,心脏,十二指肠和脾脏中几乎不存在,表明该lnc RNA具有组织特异性。ALDB-898在IPEC-J2中的表达量随着CPB2浓度和诱导时间的增加而显着降低。此外,过表达ALDB-898通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡、毒性和炎性反应以及减小细胞单层通透性而明显减弱了CPB2诱导的IPEC-J2损伤,而干扰ALDB-898则加剧了CPB2对IPEC-J2的毒害作用。3.细胞核质分离和RNA-FISH结果表明ALDB-898主要定位于细胞质中。结合RNA-seq、q RT-PCR和软件预测,构建以ALDB-898为调控中心的ce RNA网络,共筛选出1条ce RNA调控关系对ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN。双荧光素酶报告基因试验表明ssc-miR-122-5p分别与ALDB-898和OCLN存在靶向关系。皮尔森相关分析证明ALDB-898与ssc-miR-122-5p呈表达负相关,ssc-miR-122-5p与OCLN呈表达负相关,而ALDB-898与OCLN呈表达正相关。过表达ALDB-898可降低ssc-miR-122-5p的表达,升高OCLN的表达;而过表达ssc-miR-122-5p可逆转ALDB-898对OCLN的正性调控。Ssc-miR-122-5p在腹泻仔猪回肠（IR组和IS组）和CPB2处理的IPEC-J2中显着上调,且在CPB2刺激后的IPEC-J2中呈剂量和时间依赖性升高。过表达ssc-miR-122-5p通过抑制IPEC-J2的细胞活力、加快细胞凋亡、促进LDH活性水平和促炎因子的增加以及细胞通透性的增大而明显加剧了CPB2诱导IPEC-J2的破坏。OCLN在腹泻仔猪回肠（IR组和IS组）和CPB2处理的IPEC-J2中显着下调,且在CPB2诱导的IPEC-J2中,OCLN随毒素剂量和处理时间的增加而显着降低。挽救试验证明,ssc-miR-122-5p的过表达可部分逆转ALDB-898对CPB2诱导IPEC-J2损伤的保护作用,而过表达OCLN又可显着抑制ssc-miR-122-5p对ALDB-898的逆转作用,从而恢复ALDB-898的保护作用,减少CPB2对IPEC-J2的损害。综上所述,本研究构建了CPB2诱导IPEC-J2损伤的细胞模型,进而发现ALDB-898和ssc-miR-122-5p在CPB2处理的IPEC-J2中的具有抑制和促进毒害作用,进一步揭示了ALDB-898具有捕获ssc-miR-122-5p的能力,能增强OCLN表达并促进肠上皮屏障功能,减少IPEC-J2凋亡和炎症,最终抑制CPB2对IPEC-J2的损害。LncRNA ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN在C型产气荚膜梭菌感染致腹泻中具有积极的抑制作用,可作为预防和控制仔猪腹泻的分子靶标,研究结果可为仔猪细菌性腹泻的抗病育种提供重要参考。
王伟[6]（2021）在《miR-204靶向BCL2L2对CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎症反应的影响》文中研究指明仔猪腹泻是养猪生产中普遍存在的肠道感染性疾病,严重影响养猪业的健康发展。C型产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens type C,C.perfringens type C）是引起幼龄仔猪腹泻的常见细菌性病原菌之一,其主要通过产生α和β毒素,损坏仔猪肠道健康,引起仔猪腹泻。近年来,尽管商品化的疫苗和抗生素类药物在一定程度上能够预防和治疗仔猪腹泻,但随着绿色无抗养殖的呼吁,对仔猪腹泻的防治方法提出了新的挑战。因此,从遗传学角度,开展抗病育种相关研究,成为防治仔猪腹泻的重要手段。Micro RNAs（miRNAs）是一类长度约22nt的非编码小RNA分子,其能够在转录或转录后水平调控基因表达,参与多种生物学过程的调控。本课题组前期建立了7日龄长×大二元仔猪感染C型产气荚膜梭菌耐受（IR）和易感（IS）个体,通过高通量测序技术对仔猪回肠组织进行Small RNA测序,发现ssc-miR-204在耐受组和易感组之间显着差异表达,且在易感组高表达,推测其可能在仔猪C型产气荚膜梭菌感染过程中发挥重要调控作用。鉴于此,本研究以miR-204为研究对象,用产气荚膜梭菌β2毒素（Clostridium perfringens beta2,CPB2）处理猪小肠上皮细胞（intestinal porcine epithelial cells,IPEC-J2）,通过qRT-PCR、Western Blot、CCK-8、Ed U染色、流式细胞术、乳酸脱氢酶（LDH）活性检测、双荧光素酶报告基因试验、过表达和RNA干扰等试验技术,初步探索miR-204/BCL2L2调控轴在仔猪感染C型产气荚膜梭菌中的调控作用。主要研究结果如下:1.miR-204表达模式及功能研究:miR-204在仔猪感染C型产气荚膜梭菌易感组回肠组织中极显着上调表达（P<0.01）;组织表达谱结果显示,miR-204在仔猪肾脏、肝脏、胸腺、淋巴和回肠等组织中显着高表达;CPB2毒素处理IPEC-J2细胞后,miR-204也呈不同程度的上调表达。相比于阴性对照组,miR-204 mimic能够抑制IPEC-J2细胞增殖,促进凋亡,增加LDH活性,增加促炎因子TNF-α、IL-6、IL-8和IL-1β的表达,同时下调Bcl2蛋白表达而上调Bax蛋白表达。2.miR-204生物信息学分析及靶向BCL2L2基因关系验证:采用Target Scan、miRDB和Pic Tar 3款软件对miR-204进行靶基因预测,得到共同靶基因有114个;miR-204靶基因能够显着富集在15个GO功能和13个KEGG信号通络。生物信息学预测发现miR-204成熟体种子区序列与BCL2L2基因3’UTR区存在结合位点。双荧光素酶活性检测证实miR-204能够直接靶向结合BCL2L2基因。进一步通过qRT-PCR和Western Blot检测发现,miR-204可以负调控BCL2L2的表达。3.miR-204通过靶向BCL2L2参与CPB2毒素诱导的细胞凋亡和炎症反应:首先分析了BCL2L2基因敲低和过表达对CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎症反应的影响。结果表明,敲低BCL2L2后,促进了IPEC-J2细胞凋亡,增加LDH活性和炎性因子的表达;而过表达BCL2L2后,则表现出相反的表达趋势。此外,将pcDNA3.1、pcDNA-BCL2L2与miR-204 mimic共转染,发现过表达BCL2L2后,减弱了miR-204mimic引起的细胞凋亡和炎症反应。综上所述,CPB2毒素处理IPEC-J2细胞后,上调表达的miR-204通过直接靶向BCL2L2促进CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎症反应。miR-204及其靶基因可能在仔猪感染C型产气荚膜梭菌导致腹泻的过程中发挥重要作用,本研究结果可为miRNAs参与调控C型产气荚膜梭菌性仔猪腹泻的作用机制提供依据。
陈志洪[7]（2021）在《苦白石颗粒治疗仔猪白痢临床研究及安全性评价》文中认为研究背景:苦白石颗粒是由苦参、白头翁、石榴皮、仙鹤草、肉桂、木香等中药提取有效成分制粒而成,具有清热燥湿、涩肠止泻、行气止痛的作用,可用于治疗仔猪湿热下痢。本文对苦白石颗粒进行了靶动物（猪）安全性评价,为苦白石颗粒在靶动物（猪）上的应用提供安全剂量范围,并进行了实验性临床试验和扩大临床试验,以期为临床应用提供准确可靠的疗效数据。研究方法:（1）将50头仔猪随机分为苦白石颗粒1倍、3倍、5倍、10倍剂量组和空白对照组,各组连续拌料给药5天,并观察14天。通过计算体重变化、测定血液常规指标和血液生化指标的变化,评价苦白石颗粒对靶动物（猪）的安全性;（2）根据仔猪白痢临床症状及中兽医辩证,建立仔猪白痢的病例纳入标准、症状评分标准以及痊愈标准,并纳入适量自然病例,设置苦白石颗粒高、中、低剂量组,苦参止痢颗粒对照组和感染发病不治疗组进行实验性临床试验,观察仔猪在灌胃给药期间临床症状变化及痊愈情况,对其症状评分进行统计分析。并对腹泻仔猪进行大肠杆菌分离,生化、血清学鉴定和回归试验,观察苦白石颗粒对仔猪白痢的治疗效果;（3）在实验性临床试验的基础上,进行了扩大临床实验,将100头自然发病的仔猪白痢病例,随机分为苦白石颗粒组和苦参止痢颗粒组,在给药前采集粪便进行大肠杆菌分离及血清学鉴定,随后各组按推荐剂量连续给药5天,观察临床症状,记录临床症状评分变化,进一步评价苦白石颗粒对仔猪白痢的治疗作用。研究结果:（1）在苦白石颗粒靶动物（猪）安全性试验中,分别以临床推荐剂量的1、3、5、10倍剂量给药连用5天,苦白石颗粒各剂量组猪在14天观察期内状态良好,采食正常。苦白石颗粒各试验组的血常规及血生化指标均在正常范围内。（2）在苦白石颗粒实验性临床试验中,从腹泻仔猪中一共分离出的23株大肠杆菌,其中含O157抗原的占2株,含O55抗原的2株,含O44抗原的1株。采用O157进行小鼠回归试验,发现能致小鼠死亡。从综合疗效分析,苦白石颗粒各组和苦参止痢颗粒各组的总有效率均为95%,苦白石颗粒高、中剂量组治愈率均为85%,苦参止痢颗粒组治愈率为75%;（3）在扩大临床实验中分离出10株大肠杆菌,其中含O44抗原的占1株,含O55抗原的1株。综合疗效分析显示,苦白石颗粒组总有效率能达到96.5%,苦参止痢颗粒组总有效率为92%,苦白石颗粒组、苦参止痢颗粒组治愈率分别为80.77%、82%。综上,苦白石颗粒略高于苦参止痢颗粒,苦白石颗粒临床疗效与实验性临床试验结果相似。结论:（1）苦白石颗粒以临床推荐剂量的1、3、5、10倍剂量给药连用5天,在临床上是安全的;（2）在苦白石颗粒实验性临床试验中,苦白石颗粒连续给药三天可有效控制仔猪白痢。结合各组的治愈率、总有效率、增重和用药成本等因素综合考虑,建议苦白石颗粒用于自然感染白痢的仔猪治疗,用法用量为:灌服,0.5 g/kg·WB,每日1-2次,连用3-5日;（3）扩大临床试验结果表明,苦白石颗粒的临床推荐用药方案为:灌服,0.5 g/kg·WB,每日1-2次,连用3-5日,是合理的。
王诗琴[8]（2021）在《METTL3介导m6A修饰对断奶仔猪F18大肠杆菌抗性的调控机制分析》文中研究说明仔猪细菌性腹泻是目前规模化猪场常见的一种疾病,其中F18大肠杆菌（Escherichia coli F18,E.coli F18）是引起断奶仔猪细菌性腹泻的主要病原,断奶仔猪对其抗性调控机制有待阐明。N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）作为一种最常见的RNA修饰方式,在病毒复制、细菌感染以及免疫应答等多种生物学过程中扮演重要角色,m6A甲基化修饰正在成为目前畜禽遗传领域RNA表观遗传学研究的一个新方向和热点,然而关于m6A对断奶仔猪细菌性腹泻的转录后调控机制尚处于空白。本研究从mRNA、蛋白质、细胞以及组织水平上系统验证猪m6A甲基化酶METTL3表达与大肠杆菌抗性的关系,利用MeRIP-seq分析与筛选METTL3介导m6A修饰调控的关键靶基因及信号通路,探究关键靶基因介导信号通路对F18大肠杆菌的调控作用,具体结果如下:1.首先利用qPCR和Western Blot检测了E.coli F18菌体感染和LPS诱导IPEC-J2细胞后,METTL3 mRNA和蛋白表达情况,结果显示,E.coli F18感染后,METTL3基因转录水平和蛋白水平极显着增加（P<0.01）,LPS诱导2 h时,METTL3基因的表达显着降低（P<0.05）,而诱导4h后表达极显着增加（P<0.01）。通过间接免疫荧光实验分析METTL3蛋白在IPEC-J2细胞中定位分布,结果显示,METTL3定位于IPEC-J2细胞核中,并且F18大肠杆菌侵染后METTL3表达上升。组织表达谱分析显示,METTL3基因在苏太断奶仔猪不同组织中均有表达,并且在E.coli F18抗性型十二指肠、空肠组织中表达显着高于敏感组（P<0.05）。成功构建METTL3基因稳定干扰和过表达IPEC-J2细胞系,CCK8细胞活性检测表明METTL3表达对细胞增殖活性无显着影响;菌落计数、菌毛蛋白定量、间接免疫荧光、扫描电镜和革兰氏染色试验表明METTL3基因表达对F18大肠杆菌体外黏附水平造成显着影响,结果表明METTL3可能作为F18大肠杆菌易感性调控的关键m6A甲基化酶,并且其表达上调有利于提高仔猪对F18大肠杆菌的抵抗能力。2.利用MeRIP-seq技术对METTL3基因干扰组（shMETTL3）和对照组（shCtrl）的IPEC-J2细胞进行差异m6A图谱进行分析,结果显示,shCtrl组和shMETTL3组分别鉴定出17574个、18292个m6A peak峰,并对应7385个、7442个基因;m6A修饰主要发生在转录本中CDS、stopC和startC区域,存在3个保守motif模块序列;两组之间存在646个差异m6A甲基化基因（Fold change>2且P<0.05）,其中shCtrl组上调202个;shCtrl组上调m6A甲基化基因主要参与Toll样受体信号（Toll-like receptor signaling）、RIG-I 受体信号（RIG-I-like receptor signaling）、胞浆DNA识别（Cytosolic DNA-sensing）等免疫信号通路,利用qPCR和Western Blot验证发现,METTL3基因干扰后IKBKG表达水平出现极显着下调（P<0.01）,同时TLRs信号通路下游基因（NFκB、TNF-α、CCL5）及细胞因子（LL-6、IL-1β、IL-8、IL-12）表达均造成显着下降（P<0.05）。由此表明,IKBKG基因可能是METTL3-m6A重要修饰靶点,并激活或抑制TLRs免疫信号通路。3.利用qPCR检测了 IKBKG基因苏太断奶仔猪F18抗性型与敏感型个体中的差异表达情况,结果显示,在抗性组十二指肠的表达显着高于敏感组（P<0.05）,在抗性组空肠的表达极显着高于敏感组（P<0.01）;F18大肠杆菌感染IPEC-J2细胞后,IKBKG基因mRNA转录水平极显着上调（P<0.01）,蛋白表达也明显提高,TLRs免疫信号通路中细胞因子（IL-6、IL-1β、IL-1β、IL-12）mRNA水平和关键基因（NFκB、p38、JNK）蛋白表达均出现明显上调;成功构建IKBKG基因siRNA干扰载体,干扰效率为63.3%,通过菌落计数、菌毛蛋白拷贝数定量检测、间接免疫荧光和扫描电镜测定F18大肠杆菌体外黏附能力,发现IKBKG干扰后,IPEC-J2细胞与细菌黏附水平明显上升。由此表明,IKBKG及其介导TLRs信号通路可能在F18大肠杆菌感染过程中发挥了重要免疫调控作用。综合以上研究推测,METTL3可能通过介导m6A甲基化修饰来提高关键靶基因IKBKG表达水平,进而激活TLRs免疫信号通路的发生,最终在一定程度上提高断奶仔猪对F18大肠杆菌抵抗能力。
张亚军[9]（2021）在《春季仔猪腹泻的特点及科学防治》文中研究表明随着现代养猪业的进步与发展,规模化、集约化养猪模式已普及与推广,但在饲养中时常会发生仔猪腹泻,如不进行及时治疗,可引发较大的经济损失,因此认真分析仔猪腹泻的原因,并制定有效的预防措施是减少该病暴发的重要举措。将对春季仔猪腹泻的特点作分析,并提出科学防治的关键控制点,旨在减少该病的暴发概率,提升养猪经济效益。
程鑫怡,邹君彪,冷董碧,刘雅晶,庄煜,杨帆,胡国良[10]（2021）在《畜禽腹泻病因及中草药防治腹泻机制研究进展》文中研究指明饲料中添加抗生素是防治腹泻的常用方法,然而长期以来由于大多数养殖场不合理使用抗生素导致耐药菌株产生、畜禽产品品质下降、人类食品安全遭受威胁等问题出现。我国农业农村部发布公告,自2020年1月1日起,禁用所有除中药外的促生长类饲料添加剂。因此,寻找能够替代抗生素的药物迫在眉睫。中草药来源广泛、种类丰富,具有抗病毒、抗细菌、提高免疫力等多种功效,并且毒性低、残留少、不易产生耐药性。综合"禁抗"的时代背景,文章从畜禽腹泻的常见类型、中草药防治腹泻的机制等方面进行阐述,并综述了中草药防治畜禽腹泻的前景,以期为中草药应用于临床防治畜禽腹泻提供参考。
二、仔猪细菌性腹泻的防治（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、仔猪细菌性腹泻的防治（论文提纲范文）
（1）新生仔猪腹泻病的防治刍议（论文提纲范文）
| 1 新生仔猪腹泻病产生的原因 |
| 1.1 传染性因素 |
| 1.2 非传染性因素 |
| 2 新生仔猪腹泻特征 |
| 3 新生仔猪腹泻病预防措施 |
| 3.1 做好免疫接种 |
| 3.2 强化新生仔猪饲养管理工作 |
| 3.3 补充适量的铁盐 |
| 3.4 提高母猪饲养管理水平，提升母猪营养充足性 |
| 4 新生仔猪腹泻病综合治理措施 |
| 4.1 防治传染性新生仔猪腹泻病措施 |
| 4.2 防止非传染性新生仔猪腹泻病措施 |
| 5 结语 |
（2）禁抗后仔猪细菌性腹泻的临床诊断与防治（论文提纲范文）
| 1 仔猪细菌性腹泻的致病机理及常见疾病种类 |
| 2 常见仔猪细菌性腹泻及防控 |
| 2.1 大肠杆菌 |
| 2.1.1 临床表现 |
| 2.1.2 防控措施 |
| 2.2 猪沙门氏菌病 |
| 2.2.1 临床表现 |
| 2.2.2 防控措施 |
| 2.3 猪魏氏梭菌病 |
| 2.3.1 临床表现 |
| 2.3.2 防控措施 |
| 3 小结 |
（3）基于肠道菌群调控治疗动物腹泻的相关研究进展（论文提纲范文）
| 1 动物腹泻种类及生理学症状 |
| 1.1 病毒性腹泻 |
| 1.1.1 轮状病毒 |
| 1.1.2 冠状病毒 |
| 1.1.3 诺如病毒 |
| 1.2 细菌性腹泻 |
| 1.2.1 大肠杆菌 |
| 1.2.2 沙门氏菌 |
| 2 动物肠道菌群的调控方法及作用机制 |
| 2.1 肠道菌群 |
| 2.2 微生态制剂 |
| 2.2.1 益生菌 |
| 2.2.2 益生元 |
| 2.2.3 合生元 |
| 2.3 微胶囊技术在微生态制剂中的应用 |
| 3 微生态制剂在治疗动物腹泻中的研究进展 |
| 3 展望 |
（4）circDCP2/ssc-miR-23b/IRF1在CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞损伤中的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 仔猪腹泻概述 |
| 1.1 仔猪细菌性腹泻 |
| 1.2 仔猪细菌性腹泻的防治 |
| 2 产气荚膜梭菌概述 |
| 2.1 产气荚膜梭菌分类 |
| 2.2 C型产气荚膜梭菌概述 |
| 2.2.1 C型产气荚膜梭菌感染仔猪的临床表现 |
| 2.2.2 C型产气荚膜梭菌的致病机理 |
| 3 CPB2 毒素研究概述 |
| 3.1 CPB2 毒素研究进展 |
| 3.2 CPB2 毒素作用机制 |
| 3.3 CPB2 对动物的影响 |
| 4 miRNA概述 |
| 4.1 miRNA生物合成 |
| 4.2 miRNA功能及作用机制 |
| 4.3 miRNA在病原菌感染中的作用及机制研究进展 |
| 5 circRNA概述 |
| 5.1 circRNA形成 |
| 5.2 circRNA特性 |
| 5.3 circRNA功能 |
| 5.3.1 circRNA潜在的翻译功能 |
| 5.3.2 作为ce RNA竞争性结合miRNA |
| 5.3.3 circRNA与蛋白质结合 |
| 5.3.4 circRNA调控亲本基因 |
| 5.4 circRNA在病原菌感染中的作用及机制研究进展 |
| 6 研究目的与意义 |
| 第二章 CPB2 毒素对IPEC-J2 细胞损伤作用及其毒性评估 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 细胞株和毒素 |
| 1.2 试验仪器设备与试剂 |
| 1.2.1 主要仪器设备 |
| 1.2.2 主要试剂 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 重组CPB2 毒素蛋白的制备与纯化 |
| 2.2 IPEC-J2 细胞的培养及毒素处理 |
| 2.3 MTT |
| 2.4 LDH |
| 2.5 RT-qPCR |
| 2.6 Hoechst33258染色 |
| 2.7 Annexin V-FITC细胞凋亡检测 |
| 2.8 ROS |
| 2.9 线粒体膜电位检测 |
| 2.10 免疫荧光 |
| 2.11 Western blot |
| 2.12 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 重组CPB2 毒素蛋白 |
| 3.2 CPB2 毒素对IPEC-J2 细胞的毒性作用 |
| 3.3 CPB2 毒素对IPEC-J2 细胞炎性因子表达的影响 |
| 3.4 CPB2 毒素对IPEC-J2 细胞凋亡的影响 |
| 3.5 CPB2 毒素对IPEC-J2 细胞紧密连接蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 CPB2 毒素诱导IPEC-J2 细胞中miRNA的鉴定 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 样品准备 |
| 2.2 mRNA文库构建 |
| 2.3 mRNA生信分析流程 |
| 2.4 miRNA文库构建 |
| 2.5 miRNA生信分析流程 |
| 2.6 miRNA测序结果验证 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 mRNA测序基本数据及差异表达分析 |
| 3.2 miRNA测序基本数据分析 |
| 3.3 差异表达miRNAs筛选 |
| 3.4 差异表达miRNAs靶基因预测 |
| 3.5 差异表达miRNAs靶基因GO功能富集 |
| 3.6 差异表达miRNAs靶基因KEGG信号通路富集 |
| 3.7 RT-q PCR验证miRNA测序结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 CPB2 毒素诱导IPEC-J2 细胞中circRNA鉴定及ce RNA表达网络构建 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 样品准备 |
| 2.2 circRNA文库构建 |
| 2.3 circRNA生信分析流程 |
| 2.4 circRNA测序结果验证 |
| 2.5 构建circRNA-miRNA-mRNA互作网络 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 circRNA测序基本数据分析 |
| 3.2 差异表达circRNAs筛选 |
| 3.3 差异表达circRNAs来源基因预测 |
| 3.4 差异表达circRNAs来源基因GO功能富集 |
| 3.5 差异表达circRNAs来源基因KEGG信号通路富集 |
| 3.6 circRNA测序结果验证 |
| 3.7 circRNA-miRNA-mRNA互作网络构建 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第五章 circDCP2 吸附ssc-miR-23b靶向IRF1 调控CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞损伤过程 |
| 1 试验材料 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 细胞培养与毒素处理 |
| 2.2 载体构建及酶切鉴定 |
| 2.2.1 双荧光素酶载体构建 |
| 2.2.2 circDCP2 过表达载体构建 |
| 2.2.3 IRF1 过表达载体构建 |
| 2.3 质核分离 |
| 2.4 RNA荧光原位杂交 |
| 2.5 基因组DNA提取及去线性RNA |
| 2.6 细胞转染 |
| 2.7 CCK-8 |
| 2.8 LDH |
| 2.9 RT-q PCR |
| 2.10 ELISA |
| 2.11 Ed U染色 |
| 2.12 Annexin V-FITC细胞凋亡检测 |
| 2.13 ROS |
| 2.14 线粒体膜电位 |
| 2.15 免疫荧光 |
| 2.16 Western blot |
| 2.17 双荧光素酶报告基因 |
| 2.18 统计学分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 circDCP2 的鉴定 |
| 3.2 circDCP2对CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞的影响 |
| 3.2.1 circDCP2对CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞损伤和炎症反应的影响 |
| 3.2.2 circDCP2对CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞增殖的影响 |
| 3.2.3 circDCP2对CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞凋亡的影响 |
| 3.3 circDCP2与ssc-miR-23b靶向关系验证 |
| 3.4 ssc-miR-23b对 CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞损伤的影响 |
| 3.4.1 ssc-miR-23b对 CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞损伤和炎症反应的影响 |
| 3.4.2 ssc-miR-23b对 CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞增殖的影响 |
| 3.4.3 ssc-miR-23b对 CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞凋亡的影响 |
| 3.5 ssc-miR-23b与 IRF1 靶向关系验证 |
| 3.6 circDCP2 通过吸附ssc-miR-23b靶向IRF1对CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞损伤的影响 |
| 3.6.1 同时过表达circDCP2和ssc-miR-23b对 CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞的影响 |
| 3.6.2 circDCP2对CPB2 毒素诱导的IPEC-J2 细胞的影响由IRF1 介导 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第六章 全文结论 |
| 创新点 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（5）LncRNA ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN在CPB2诱导猪肠上皮细胞损伤中的功能机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 仔猪腹泻 |
| 1.1 仔猪腹泻成因 |
| 1.1.1 非病原性腹泻 |
| 1.1.2 病原性腹泻 |
| 2 产气荚膜梭菌 |
| 3 C型产气荚膜梭菌性腹泻 |
| 3.1 C型产气荚膜梭菌的毒素类型 |
| 3.1.1 C型产气荚膜梭菌alpha毒素 |
| 3.1.2 C型产气荚膜梭菌beta1 毒素 |
| 3.1.3 C型产气荚膜梭菌beta2 毒素 |
| 3.2 C型产气荚膜梭菌性腹泻现状及防治 |
| 4 猪抗病育种现状 |
| 5 肠道屏障 |
| 5.1 肠道屏障分类 |
| 5.2 紧密连接组成及功能 |
| 5.3 产气荚膜梭菌影响肠上皮屏障 |
| 6 非编码RNA研究进展 |
| 6.1 miRNA概述 |
| 6.2 miRNA生成 |
| 6.3 miRNA的作用机制 |
| 6.4 miRNA参与调控肠道屏障功能 |
| 6.5 miRNA参与调控畜禽感染性疾病 |
| 6.6 LncRNA概述 |
| 6.7 LncRNA作用方式 |
| 6.8 LncRNA参与调控肠道屏障功能 |
| 6.9 LncRNA参与调控畜禽感染性疾病 |
| 7 研究目的与意义 |
| 第二章 ALDB-898在CPB2 诱导肠上皮细胞损伤中的功能研究 |
| 1 试验材料与试剂 |
| 1.1 试验动物组织样品 |
| 1.2 IPEC-J2 细胞系 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要试验仪器 |
| 1.5 主要试剂配制 |
| 1.6 应用分析软件和生物信息学网站 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 CPB2 重组蛋白制备 |
| 2.1.1 CPB2 表达载体的构建 |
| 2.1.2 转化试验 |
| 2.1.3 pET-28a-CPB2 重组质粒的诱导表达 |
| 2.1.4 CPB2 重组蛋白SDS-PAGE凝胶电泳检测 |
| 2.1.5 CPB2 重组蛋白的纯化 |
| 2.1.6 CPB2 重组蛋白内毒素的去除 |
| 2.1.7 CPB2 重组蛋白内毒素的检测 |
| 2.1.8 CPB2 重组蛋白浓度的测定 |
| 2.1.9 CPB2 重组蛋白的Western blot检测 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.2.1 细胞复苏 |
| 2.2.2 细胞传代 |
| 2.2.3 细胞冻存 |
| 2.2.4 细胞接种 |
| 2.3 CPB2 诱导IPEC-J2 损伤模型构建 |
| 2.4 LncRNA生物信息学分析 |
| 2.5 过表达载体构建及siRNA合成 |
| 2.5.1 ALDB-898 过表达载体的构建 |
| 2.5.2 siRNA的合成 |
| 2.6 细胞转染 |
| 2.7 RNA的提取及检测 |
| 2.8 qRT-PCR检测 |
| 2.8.1 LncRNA和 m RNA逆转录成cDNA |
| 2.8.2 qPCR检测 |
| 2.9 Western blot检测 |
| 2.10 细胞增殖试验 |
| 2.10.1 CCK8 细胞增殖试验 |
| 2.10.2 EdU细胞增殖试验 |
| 2.11 细胞凋亡试验 |
| 2.11.1 细胞形态检测 |
| 2.11.2 流式细胞术凋亡检测 |
| 2.11.3 TUNEL凋亡检测 |
| 2.12 细胞损伤试验 |
| 2.12.1 LDH细胞毒性试验 |
| 2.12.2 活性氧ROS检测 |
| 2.12.3 炎性因子ELISA检测 |
| 2.12.4 细胞通透性试验 |
| 2.13 ALDB-898 亚细胞定位 |
| 2.14 数据统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 重组表达质粒pET-28a-CPB2 的鉴定、表达及蛋白纯化结果 |
| 3.2 CPB2 诱导IPEC-J2 细胞损伤 |
| 3.3 仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻相关lncRNA的筛选 |
| 3.4 ALDB-898 的表达模式分析 |
| 3.5 ALDB-898 过表达和干扰效率 |
| 3.6 ALDB-898对CPB2 处理的IPEC-J2 细胞增殖的影响 |
| 3.7 ALDB-898对CPB2 处理的IPEC-J2 细胞凋亡的影响 |
| 3.8 ALDB-898对CPB2 处理的IPEC-J2 细胞毒性和氧化应激的影响 |
| 3.9 ALDB-898对CPB2 诱导的IPEC-J2 中炎性因子表达的影响 |
| 3.10 ALDB-898对CPB2 处理的IPEC-J2 细胞通透性的影响 |
| 3.11 ALDB-898在IPEC-J2 中亚细胞定位 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 ALDB-898 通过ssc-miR-122-5p调控OCLN抑制CPB2 诱导肠上皮细胞损伤的功能机制研究 |
| 1 试验材料与试剂 |
| 1.1 IPEC-J2和HEK293T细胞系 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要试验仪器 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 LncRNA-miRNA-mRNA的 ceRNA网络构建 |
| 2.2 差异表达miRNA筛选 |
| 2.3 Ssc-miR-122-5p mimic和 inhibitor合成及细胞转染 |
| 2.4 双荧光素酶报告试验 |
| 2.4.1 野生型载体构建 |
| 2.4.2 突变载体的构建 |
| 2.4.3 细胞转染 |
| 2.4.4 荧光检测 |
| 2.5 OCLN过表达载体构建及转染 |
| 2.6 RNA的提取及检测 |
| 2.7 qRT-PCR检测 |
| 2.7.1 miRNA逆转录成cDNA |
| 2.7.2 qPCR检测 |
| 2.8 Western blot检测 |
| 2.9 免疫荧光检测 |
| 2.10 细胞增殖和凋亡试验 |
| 2.11 细胞损伤试验 |
| 2.12 数据统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 LncRNA-miRNA-mRNA的 ceRNA网络构建结果 |
| 3.2 仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻相关miRNA的筛选 |
| 3.3 Ssc-miR-122-5p转染效率 |
| 3.4 ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN的筛选 |
| 3.5 双荧光素酶载体构建 |
| 3.6 ALDB-898与ssc-miR-122-5p靶向关系验证 |
| 3.7 Ssc-miR-122-5p与 OCLN靶向关系验证 |
| 3.8 ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN 在 C 型产气荚膜梭菌感染仔猪腹泻中的表达相关性分析 |
| 3.9 Ssc-miR-122-5p表达模式分析 |
| 3.10 Ssc-miR-122-5p对 CPB2 处理的IPEC-J2 细胞增殖的影响 |
| 3.11 Ssc-miR-122-5p对 CPB2 处理的IPEC-J2 细胞凋亡的影响 |
| 3.12 Ssc-miR-122-5p对 CPB2 处理的IPEC-J2 细胞毒性和氧化应激的影响 |
| 3.13 Ssc-miR-122-5p对 CPB2 诱导的IPEC-J2 中炎性因子表达的影响 |
| 3.14 Ssc-miR-122-5p对 CPB2 处理的IPEC-J2 细胞通透性的影响 |
| 3.15 OCLN表达模式分析 |
| 3.16 ALDB-898 通过ce RNA负调控ssc-miR-122-5p促进OCLN表达 |
| 3.17 OCLN过表达载体构建 |
| 3.18 ALDB-898、ssc-miR-122-5p与 OCLN共转染对CPB2 处理的IPEC-J中OCLN表达影响 |
| 3.19 ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN对 CPB2 处理的IPEC-J2 细胞增殖的影响 |
| 3.20 ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN对 CPB2 处理的IPEC-J2 细胞凋亡的影响 |
| 3.21 ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN对 CPB2 处理的IPEC-J2 细胞毒性的影响 |
| 3.22 ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN对 CPB2 诱导的IPEC-J2 中炎性因子表达的影响 |
| 3.23 ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN对 CPB2 处理的IPEC-J2 细胞通透性的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 全文结论 |
| 创新点 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（6）miR-204靶向BCL2L2对CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎症反应的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 仔猪腹泻 |
| 1.1 仔猪腹泻的病因 |
| 1.1.1 病原性腹泻 |
| 1.1.2 非病原性腹泻 |
| 1.2 仔猪腹泻的防治现状 |
| 2 产气荚膜梭菌 |
| 2.1 产气荚膜梭菌简介 |
| 2.2 C型产气荚膜梭菌毒素类型及致病机理 |
| 3 miRNA概述 |
| 3.1 miRNA的发现 |
| 3.2 miRNA的生成及作用机制 |
| 3.3 miRNA在病原微生物感染中的研究 |
| 4 miR-204研究进展 |
| 5 BCL2L2基因研究进展 |
| 6 本研究的目的与意义 |
| 第二章 miR-204表达模式分析及在CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞中的功能研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验样品采集 |
| 1.1.1 组织样品 |
| 1.1.2 细胞系 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 主要试验试剂 |
| 1.4 重组CPB2毒素蛋白制备与纯化 |
| 1.4.1 构建pET-28a-CPB2重组质粒 |
| 1.4.2 重组质粒诱导表达 |
| 1.4.3 蛋白质纯化 |
| 1.5 细胞培养及转染 |
| 1.5.1 细胞培养 |
| 1.5.2 细胞转染 |
| 1.6 CPB2毒素处理IPEC-J2细胞损伤模型构建 |
| 1.7 引物设计与合成 |
| 1.8 RNA提取、反转录及荧光定量PCR检测 |
| 1.8.1 总RNA提取 |
| 1.8.2 反转录反应 |
| 1.8.3 荧光定量PCR检测 |
| 1.9 CCK-8检测 |
| 1.10 EdU染色 |
| 1.11 流式细胞术检测 |
| 1.12 乳酸脱氢酶(LDH)活性检测 |
| 1.13 Western Blot检测 |
| 1.14 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 重组CPB2毒素蛋白制备与纯化 |
| 2.2 构建CPB2毒素处理的IPEC-J2细胞损伤模型 |
| 2.3 miR-204转染效率检测 |
| 2.4 miR-204表达模式分析 |
| 2.5 miR-204对CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞增殖和凋亡的影响 |
| 2.6 miR-204对CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞损伤和炎症反应的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 miR-204生物信息学分析及靶向BCL2L2验证 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 主要试验试剂 |
| 1.3 miR-204保守性分析 |
| 1.4 miR-204靶基因预测 |
| 1.5 miR-204靶基因GO功能和KEGG信号通路富集分析 |
| 1.6 BCL2L2基因3’UTR双荧光素酶载体构建 |
| 1.6.1 引物设计与合成 |
| 1.6.2 PCR扩增、胶回收及载体连接 |
| 1.6.3 重组载体双酶切及测序鉴定 |
| 1.7 细胞培养及转染 |
| 1.8 双荧光素酶活性检测 |
| 1.9 RNA提取、反转录及荧光定量PCR检测 |
| 1.10 Western Blot检测 |
| 1.11 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 miR-204保守性分析 |
| 2.2 miR-204靶基因预测 |
| 2.3 miR-204靶基因GO功能和KEGG通路富集分析 |
| 2.4 双荧光素酶重组载体构建及鉴定 |
| 2.5 miR-204靶向结合BCL2L2关系验证 |
| 2.6 miR-204在转录和蛋白水平调控BCL2L2表达 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 miR-204靶向BCL2L2参与CPB2毒素诱导的细胞凋亡和炎症反应 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器设备与试验试剂 |
| 1.2 BCL2L2基因siRNA设计与合成 |
| 1.3 BCL2L2基因过表达载体构建 |
| 1.4 细胞培养及转染 |
| 1.5 RNA提取、反转录及荧光定量PCR检测 |
| 1.6 CCK-8、EdU染色和流式细胞术检测 |
| 1.7 LDH活性、炎性细胞因子及凋亡蛋白表达检测 |
| 1.8 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 BCL2L2基因敲低和过表达效率检测 |
| 2.2 BCL2L2基因敲低和过表达对IPEC-J2细胞增殖和凋亡的影响 |
| 2.3 BCL2L2基因敲低和过表达对IPEC-J2细胞损伤和炎症反应的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 在读期间发表论文和研究成果等 |
| 导师简介 |
（7）苦白石颗粒治疗仔猪白痢临床研究及安全性评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 部分缩写的中英文对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 仔猪的腹泻 |
| 1.1.1 细菌性腹泻 |
| 1.1.2 寄生虫性腹泻 |
| 1.1.3 病毒性腹泻 |
| 1.1.4 非病原性腹泻 |
| 1.2 中兽药对仔猪腹泻的辩证论治 |
| 1.2.1 中兽医对泄泻的理论基础 |
| 1.2.2 中兽医对于泄泻的辩证论治 |
| 1.2.3 中兽医关于仔猪白痢的病因病理 |
| 1.2.4 中兽医对仔猪白痢的辩证论治 |
| 1.2.5 中兽药在仔猪腹泻治疗中的应用 |
| 1.3 苦白石颗粒 |
| 1.3.1 苦白石颗粒简介 |
| 1.3.2 苦白石颗粒组成成分 |
| 1.3.3 苦白石颗粒药理、毒理作用及应用前景 |
| 1.4 研究的目的及意义 |
| 第二章 苦白石颗粒靶动物(猪)安全性试验 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验药品 |
| 2.1.2 试验动物 |
| 2.1.3 仪器 |
| 2.1.4 试验动物分组与处理 |
| 2.1.5 临床症状观察 |
| 2.1.6 体重 |
| 2.1.7 样品采集及前处理 |
| 2.1.8 血液常规指标检测 |
| 2.1.9 血液生化指标检测 |
| 2.1.10 临床解剖学检查 |
| 2.1.11 数据处理 |
| 2.2 试验结果 |
| 2.2.1 临床表现、体重及解剖学检查 |
| 2.2.2 血常规检测结果 |
| 2.2.3 血液生化指标检测结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 苦白石颗粒治疗仔猪白痢实验性临床试验 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 药物 |
| 3.1.2 试验动物 |
| 3.1.3 试剂及试剂配制 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.1.5 病例选入方法 |
| 3.1.6 动物分组 |
| 3.1.7 病原分离与生化鉴定 |
| 3.1.8 大肠杆菌血清型鉴定 |
| 3.1.9 分离菌对小鼠的致病力试验 |
| 3.1.10 体重 |
| 3.1.11 临床症状 |
| 3.1.12 疗效判定 |
| 3.1.13 数据分析 |
| 3.2 试验结果 |
| 3.2.1 大肠杆菌分离鉴定结果 |
| 3.2.2 生化及血清型试验结果 |
| 3.2.3 分离菌致病力试验结果 |
| 3.2.4 临床症候积分 |
| 3.2.5 体重变化 |
| 3.2.6 综合疗效 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 苦白石颗粒对仔猪白痢治疗的扩大临床试验 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 药品 |
| 4.1.2 试验动物 |
| 4.1.3 试剂 |
| 4.1.4 试剂配制方式 |
| 4.1.5 试验仪器 |
| 4.1.6 病例筛选方法 |
| 4.1.7 动物分组 |
| 4.1.8 病原分离 |
| 4.1.9 生化鉴定 |
| 4.1.10 大肠杆菌血清型鉴定 |
| 4.1.11 体重变化 |
| 4.1.12 临床症状及记录 |
| 4.1.13 疗效评价 |
| 4.1.14 数据分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 病原分离结果 |
| 4.2.2 生化分析及病原血清鉴定 |
| 4.2.3 临床症候积分结果 |
| 4.2.4 体重变化 |
| 4.2.5 综合疗效 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 结论与创新点 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 主要创新点 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
（8）METTL3介导m6A修饰对断奶仔猪F18大肠杆菌抗性的调控机制分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 产肠毒素F18大肠杆菌与仔猪腹泻 |
| 1.1.1 仔猪腹泻的危害 |
| 1.1.2 E.coli F18的致病机理 |
| 1.1.3 E.coli F18抗性相关的分子研究 |
| 1.2 RNA甲基化修饰及其检测方法 |
| 1.2.1 RNA甲基化修饰和m~6A |
| 1.2.2 m~6A检测方法和MeRIP-seq技术 |
| 1.3 METTL3的结构功能及其在动物中的研究进展 |
| 1.3.1 甲基转移酶METTL3的结构和功能 |
| 1.3.2 METTL3基因与动物生长发育及免疫疾病的关系 |
| 1.4 本研究目的和意义 |
| 第2章 猪m~6A甲基化酶METTL3与F18大肠杆菌感染的关系 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料、试剂、仪器 |
| 2.1.2 引物设计 |
| 2.1.3 F18大肠杆菌刺激与LPS诱导 |
| 2.1.4 总RNA提取与cDNA合成 |
| 2.1.5 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR,qPCR)反应 |
| 2.1.6 蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)检测METTL3蛋白表达 |
| 2.1.7 间接免疫荧光(Indirect Immunofluorescence Assay,IFA)检测METTL3蛋白表达分布 |
| 2.1.8 METTL3稳定干扰IPEC-J2细胞系(shMETTL3)的建立 |
| 2.1.9 METTL3过表达IPEC-J2细胞系(METTL3-OE)的建立 |
| 2.1.10 METTL3基因干扰、过表达对F18大肠杆菌黏附能力的影响 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 F18大肠杆菌侵染和LPS诱导IPEC-J2后METTL3的表达情况 |
| 2.2.2 METTL3蛋白在菌体刺激IPEC-J2细胞前后的分布情况 |
| 2.2.3 METTL3基因的组织表达谱及其在抗性、敏感组肠道中的表达差异 |
| 2.2.4 METTL3基因稳定干扰IPEC-J2细胞系的建立 |
| 2.2.5 METTL3基因过表达细胞系的建立 |
| 2.2.6 METTL3基因干扰、过表达对F18大肠杆菌黏附能力的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 MeRIP-seq测序筛选METTL3-m~6A调控F18大肠杆菌抗性的关键基因及信号通路 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验样本处理 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 MeRIP-seq技术流程 |
| 3.1.4 差异基因mRNA和蛋白水平验证 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 测序质控分析 |
| 3.2.2 m~6A测序图谱分析 |
| 3.2.3 差异m~6A甲基化丰度及功能注释分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 猪IKBKG基因介导TLRs信号通路对F18大肠杆菌抗性的调控作用 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料、试剂及仪器 |
| 4.1.2 IKBKG基因在苏太猪肠道中表达情况的测定 |
| 4.1.3 E.coli F18感染IPEC-J2细胞IKBKG和TLRs信号通路分子表达的检测 |
| 4.1.4 siRNA瞬转及IKBKG基因干扰效率验证 |
| 4.1.5 E.coli F18与IKBKG基因干扰细胞体外黏附试验 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 IKBKG基因在断奶仔猪F18抗性型与敏感型肠道组织中的差异表达 |
| 4.2.2 F18大肠杆菌感染猪IPEC-J2细胞前后IKBKG表达变化 |
| 4.2.3 F18大肠杆菌感染猪IPEC-J2细胞前后TLRs信号通路表达变化 |
| 4.2.4 猪IKBKG基因siRNA干扰试验 |
| 4.2.5 猪IKBKG基因表达对F18大肠杆菌与IPEC-J2细胞黏附水平的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 本章小结 |
| 全文结论及创新点 |
| 论文不足之处及下一步工作计划 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（9）春季仔猪腹泻的特点及科学防治（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 致病机理 |
| 2 春季仔猪病毒性腹泻特点 |
| 3 春季仔猪细菌性腹泻特点 |
| 4 春季仔猪混感型剧烈腹泻 |
| 5 综合防治 |
| 5.1 温、湿度控制 |
| 5.2 疫苗程序免疫 |
| 5.3 养殖环境控制 |
| 5.4 食药防治 |
（10）畜禽腹泻病因及中草药防治腹泻机制研究进展（论文提纲范文）
| 1 腹泻主要病因及常用治疗方法 |
| 1.1 传染性因素 |
| 1.1.1 病毒性腹泻 |
| 1.1.2 寄生虫性腹泻 |
| 1.1.3 细菌性腹泻 |
| 1.2 非传染性因素 |
| 1.2.1 营养因素 |
| 1.2.2 饲养管理因素 |
| 2 中草药防治畜禽腹泻作用的机制 |
| 2.1 抗菌作用 |
| 2.1.1 影响细菌结构 |
| 2.1.2 消除耐药质粒 |
| 2.1.3 改善肠道菌群结构 |
| 2.2 抗病毒作用 |
| 2.2.1 直接杀灭病毒 |
| 2.2.2 抑制病毒复制 |
| 2.2.3 产生干扰素 |
| 2.3 增强机体免疫力 |
| 2.3.1 促进免疫器官生长 |
| 2.3.2 增强机体体液免疫能力 |
| 2.3.3 增强机体细胞免疫能力 |
| 3 总结与展望 |
四、仔猪细菌性腹泻的防治（论文参考文献）
- [1]新生仔猪腹泻病的防治刍议[J]. 陈宝财. 中国畜禽种业, 2022(02)
- [2]禁抗后仔猪细菌性腹泻的临床诊断与防治[J]. 陈维,谭涛. 猪业科学, 2021(08)
- [3]基于肠道菌群调控治疗动物腹泻的相关研究进展[J]. 张龙舟,高青山,崔莲花,侯丽娜,张魁. 饲料研究, 2021(12)
- [4]circDCP2/ssc-miR-23b/IRF1在CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞损伤中的作用机制[D]. 雒瑞瑞. 甘肃农业大学, 2021(01)
- [5]LncRNA ALDB-898/ssc-miR-122-5p/OCLN在CPB2诱导猪肠上皮细胞损伤中的功能机制研究[D]. 高小莉. 甘肃农业大学, 2021(01)
- [6]miR-204靶向BCL2L2对CPB2毒素诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎症反应的影响[D]. 王伟. 甘肃农业大学, 2021
- [7]苦白石颗粒治疗仔猪白痢临床研究及安全性评价[D]. 陈志洪. 广西大学, 2021(12)
- [8]METTL3介导m6A修饰对断奶仔猪F18大肠杆菌抗性的调控机制分析[D]. 王诗琴. 扬州大学, 2021
- [9]春季仔猪腹泻的特点及科学防治[J]. 张亚军. 畜禽业, 2021(03)
- [10]畜禽腹泻病因及中草药防治腹泻机制研究进展[J]. 程鑫怡,邹君彪,冷董碧,刘雅晶,庄煜,杨帆,胡国良. 黑龙江畜牧兽医, 2021(05)